כדי להתחיל, לקחת את תאי שריר השלד מוכתמים עם cisplatin, נוגדנים מצומדים מתכת, תמיסת intercalator-אירידיום, ו pellet את התאים על ידי צנטריפוגה. לאחר הסרת הסופרנאטנט, הוסף מיליליטר אחד של CSM לתאים המעורבלים. משחררים את התאים באמצעות צנטריפוגה ושוטפים במיליליטר אחד של חיץ CAS.
לאחר הצנטריפוגה, שואפים את הסופרנאטנט לכ-200 מיקרוליטר. הוסף מיליליטר אחד של חיץ CAS לדגימות המערבולות ו aliquot חמישה מיקרוליטר לספירת תאים. לאחר צנטריפוגה של התאים ושאיפה של הסופרנאטנט ל-50 מיקרוליטר, יש להשהות מחדש את התאים במאגר CAS לריכוז סופי של 1 מיליון תאים למיליליטר ולהוסיף חרוזי כיול כדי להגיע לריכוז סופי של פי 0.1.
טען את הדגימה לתוך ציטומטר המסה כדי לאסוף נתונים באמצעות קצב זרימה של 400 עד 500 תאים לשנייה, ולנרמל את הנתונים לאחר האיסוף. במידת הצורך, שרשר קובצי Flow Cytometry Standard או FCS נפרדים עבור כל דגימה לקובץ יחיד. זהה תאים בודדים על ידי gating על אירועים חיוביים של אירידיום אינטרקלטור.
בחר אירועים שליליים עבור cisplatin כדי שער עבור תאים חיים. שער על האוכלוסייה המעניינת וכימות השיעור היחסי של תאי גזע ותאי אב. כדי לבצע ניתוח ממדי גבוה, לייצא את האוכלוסייה של עניין ולהשתמש באלגוריתמים אשכולות.
לניתוח X-shift, הורד את חבילת התוכנה Vortex ואת Java 64-bit. העלה את אוכלוסיות התאים המיוצאות למסד נתונים מקומי והגדר את פרמטרי קיבוץ האשכולות. כדי להמחיש את היחסים המרחביים בין אוכלוסיות תאים בתוך צבירי היסט X, בצע פריסה מכוונת כוח.
ניתוח CyTOF זיהה רצף של ארבע אוכלוסיות, תאי גזע ואוכלוסיות אבות אחת עד שלוש. אוכלוסיות האב P1 ו-P2 מתאימות לתאי אב בוגרים יותר ויותר. P3 זוהה בעבר אך לא אופיין בשל השפע הנמוך שלו.
דינמיקת תאי הגזע ותאי האב לאחר הפציעה נותחה באמצעות CD9 על ידי CD104 על ידי תרשימי נקודות ציריות. עלייה ניכרת באוכלוסיית תאי הגזע נצפתה ביום השלישי, מה שמרמז על התרחבות. זה נתמך על ידי שילוב מוגבר של יודודוקסיורידין, המצביע על התפשטות תאים, וביטוי מיודי מוגבר כפי שמוצג על ידי שכבת העל.
זוהו תאי גזע פעילים המסומנים ברמות גבוהות של CD98, CD44, MyoD ויודאוקסיאורידין, מה שמדגיש את ההתרבות הגבוהה שלהם ואת מצבם המופעל ביום השלישי שלאחר הפציעה.
