קציר וזריעה של תאי אנדותל של וריד הטבור האנושי (HUVECs) עבור מודל מעי על שבב אנושי

כדי להתחיל, להכין 1 עד 100 דילול של תמיסת מלאי קולגן DPBS עם מגנזיום וסידן. הוסיפו 350 מיקרוליטר של תמיסת הציר המדולל לתא המתאים, ודגרו במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. יש לשטוף את כל התאים פעמיים באמצעות 350 מיקרוליטר של DPBS עם מגנזיום וסידן כדי לשטוף את שאריות הקולגן והחומצה האצטית.

הסר את התקעים מאתר אחד והעבר אותם לצד השני. לאחר שטיפת החדר שוב, להוסיף 350 מיקרוליטר של מדיום גידול תאי אנדותל אליו. הסר את התקעים מאתר אחד והעבר אותם לצד השני.

לאחר מכן הוסף 350 מיקרוליטר של מדיום גידול תאי אנדותל לכל חדר. קח HUVECs מעובדים במעברים אחד עד שלושה עם 80% עד 90% מפגש תאים בתווך גידול תאי אנדותל. לאחר מכן הסר את מדיום תרבית התאים מבקבוק תרבית תאים T25 ושטוף את התאים בעדינות עם שלושה עד חמישה מיליליטר של DPBS ללא מגנזיום וסידן.

לאחר הסרת התמיסה מוסיפים מיליליטר אחד של מגיב דיסוציאציה טריפסין ודגרים במשך חמש דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עד שהתאים מתנתקים מהצלוחית. מעבירים את התאים המנותקים לצינורית באמצעות תשעה מיליליטר של 5% FBS ב-PBS ללא מגנזיום וסידן. צנטריפוגה ב-350 גרם למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

לאחר הזזת הסופרנטנט, השהה מחדש את גלולת התא במיליליטר אחד של מדיום גידול תאי אנדותל. הוסיפו את נפח התאים המתאים לתא, ודגרו על הביו-שבבים באינקובטור לח בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. בצע חילוף בינוני של HUVECs המכיל תא עם 350 מיקרוליטר של מדיום גידול תאי אנדותל לאחר 24 שעות.

אם מופיעות בועות אוויר בביו-שבבים מיקרופלואידים, סגור את כל היציאות של השבב הביולוגי מלבד יציאות התא הפגוע. הטה את השבב כדי להזיז את בועת האוויר קרוב לקצה אחד של החלל. מהיציאה של הקצה השני, לדחוף 700 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאים דרך התא תוך אחיזת תקעים נגדיים.