כדי להתחיל, לנקות ביסודיות את כל האזורים של האינקובטור ואת המשאבה peristaltic עם חומר חיטוי כדי להבטיח סביבה סטרילית למחצה. לאחר מכן שטפו כל צינור עם 700 מיקרוליטר של PBS עם מגנזיום וסידן, ואחריו 500 מיקרוליטר של C2 או מדיום EC-מותנה. השתמש בצינורות עם המרחק הקצר ממנעול הפיתוי לפקק המשאבה הפריסטלטי לחלל השמאלי והצינור עם הסימטריה השנייה לחלל הימני.
לאחר שליפת השבב הביולוגי עם תאי HUVEC ו- C2BBe1 מהאינקובטור, בצע חילוף בינוני עם 350 מיקרוליטר לכל חדר. לאחר מכן העבר את התקעים מהאתר התחתון לאתר העליון. הוסף 350 מיקרוליטר של מדיה טרייה לתא התחתון של השבב הביולוגי.
לאחר מכן, הסר את כל התקעים ומלא את כל היציאות לחלק העליון. החל מהחלל השמאלי, הכנס את מתאם נעילת הפיתוי ליציאת השבב הביולוגי כדי לחבר את הצינור הראשון ליציאה הימנית של החדר העליון. לאחר מכן חבר את הצינור השני ליציאה השמאלית של החדר התחתון.
לאחר מכן, לקחת מאגר ולהוסיף טיפה קטנה של מדיום תרבית תאים לתחתית המאגר. לאחר מכן הכנס את המאגר לצד הנגדי של הצינור הראשון וחזור על הפעולה עבור החדר השני. לאחר שכל היציאות מחוברות לצינורות או למאגר, מלאו את המאגרים ב-3.5 מיליליטר של מדיום תרבית תאים.
לאחר מכן מניחים את הצד הרופף של הצינור, אשר יש את המכסה מחובר אליו, על החלק העליון של המאגר כדי לסגור את המערכת microfluidic של כל חדר. העבירו את השבב הביולוגי למשאבה הפריסטלטית. באמצעות פקקי המשאבה הפריסטלטיים מחברים כל צינור למשאבה הפריסטלטית כך שהתווך זורם מהמאגר אל החלל ובחזרה דרך המשאבה.
לאחר מכן לנקב כל תא עם קצב זרימה של 50 מיקרוליטר לדקה. לאחר השלמת השפע המוקדם, הפסיקו את המשאבה הפריסטלטית. הסירו את המכסה המחובר לצינור של כל מאגר והניחו אותו על רקמה סטרילית ליד המשאבה.
לאחר הסרת כל המדיום, למלא את המאגרים עם 2 מיליליטר של מדיום מוכן טרי. חברו מחדש את הצינור והמכסה והמשיכו את הזילוח המעגלי בקצב זרימה של 50 מיקרוליטר לדקה למשך 24 שעות נוספות. לאחר עצירת המשאבה הפריסטלטית, פתחו את המאגרים של כל החללים.
רוקנו את המאגרים ונתק את הצינורות והמאגרים מהשבב. לשטוף את החללים microfluidic עם 500 מיקרוליטר של PBS קר עם מגנזיום וסידן פעמיים בכל חדר. הוסיפו 500 מיקרוליטר מתנול קר כקרח לכל החללים.
לאחר פתיחת השבב, לחתוך או להסיר את נייר מליטה של biochip. חותכים את הרקמה המכילה קרום PET לשניים כדי להכתים במקביל ללוחות חיסוניים שונים. בעזרת פינצטה מדויקת, מעבירים כל פיסת קרום לבאר נפרדת בצלחת של 24 בארות עם תמיסה חוסמת וחדירה.
לאחר מכן העבירו את חתיכות הממברנה למגלשת זכוכית נקייה בתוך תא לח. הוסף 50 מיקרוליטר של נוגדנים ראשוניים מוכנים ותמיסת צביעה לכל חתיכת ממברנה. לאחר העברת הדגימות לצלחת של 24 בארות, שטפו את הקרומים פעמיים במשך 5 דקות בתמיסת שטיפה, ולאחר מכן עם PBS המכיל מגנזיום וסידן.
בעזרת מדיום הרכבה פלואורסצנטי וזכוכית כיסוי, הרכיבו את חלקי הממברנה על מגלשת זכוכית נקייה ואחסנו אותם בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד להדמיה מיקרוסקופית. לאחר חמישה ימים של שפע, DNA גרעיני מוכתם ב- DAPI הראה מקרופאגים שמקורם במונוציטים מובחנים במלואם המבטאים CD68 המתפשט בכל רקמת כלי הדם. HUVECs יצרו שכבה קונפלואנטית המראה את שלמות הרקמה על ידי היווצרות צמתי היצמדות, כגון VE-cadherin.
בנוסף, גורם פון וילברנד מבוטא מאוד על ידי HUVECs. לאחר חמישה ימים של שפע, תאי C2BBe1 יצרו שכבות תאי אפיתל מקוטבות המבטאות את חלבוני הצומת E-cadherin ו-ZO-1. הצמיחה התלת-ממדית של מבנים דמויי וילוס ודמויי קריפטה של האפיתל יכולה להיות מזוהה בקטעי x ו- y של ערימת Z לאחר שישה ימים של זילוח.
