הכנת מודל אורגנואיד תימי אנושי תלת-ממדי לחקר ביולוגיה של תאי T

כדי להתחיל, להפשיר את טרומבין ו aprotinin על קרח, ומניחים בקבוקון פיברינוגן באמבט מים 37 מעלות צלזיוס. באמצעות פיפטה, הומוגניזציה אותם מתחת למכסה המנוע. לאחר מכן באמצעות צבת סטרילית, מניחים את התוספות לתוך בארות התרבית, משאיר לפחות טור אחד או שורה ריקה על הצלחת.

לצינור 0.25 מיליליטר, תחילה להוסיף את הכרכים הנדרשים של פיברינוגן ואפרוטנין. לאחר מכן, מוסיפים את הטרומבין לתוך הצינור במהירות לשטוף פעמיים מבלי ליצור בועות. צייר את כל התוכן של הצינור.

מקמו את הפיפטה במאונך מעל מרכז האינסרט ושטפו בעדינות תערובת מגיבים מבלי ליצור בועות. דוגרים במשך שעה לפחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למיצוק עד שהתערובת הופכת ללבנה אטומה. עבור זריעת אורגנואידים, אשרו תחת מיקרוסקופ כי מסות המיקרו יוצרות מסות תאים כדוריות, עם מקהלה קומפקטית מוקפת בהילה בצפיפות נמוכה יותר של אבות תימיים מוקדמים.

חתכו את קצה חרוט P200 ושטפו אותו בתמיסה נוגדת הדבקה. הטו את הצלחת למצב כמעט אנכי ושאפו את מסת התא מתחתית הבאר. הפקידו בעדינות את המסה בחלק העליון של ההידרוג'לים מבלי לגעת בג'ל.

בדקו תחת המיקרוסקופ שלא נותר אורגנואיד בבארות הצלחת. לאחר מכן מוסיפים לאט רבע מנפח מדיום התרבית בחלק העליון של ההידרוג'ל מבלי לגעת בו, ומוסיפים את 3/4 הנותרים בתחתית הבאר. הוסיפו מיליליטר אחד של PBS לבארות התרבית הריקות כדי לשמור על לחות בצלחת ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני.

האורגנואידים יוצרים מבנים כדוריים עד מלבניים ולעיתים מתמזגים ליצירת מבנים גדולים יותר בהידרוג'לים.