ניסוי אבולוציית טמפרטורה באמצעות Sulfolobus acidocldarius

כדי להתחיל, השתמש באוכלוסיות Sulfolobus acidocaldarius הקדומות שקמו לתחייה. הוסף BBM plus כדי לדלל את התרביות ל- OD600 של 0.01. פיפטה מתאימה נפח מכל אחת משבע התרביות לשלוש צינורות נפרדים מנוקבים של שני מיליליטר.

אטמו את הצינורות עם קרום נושם, ולאחר מכן הניחו כל קבוצה של שבע אוכלוסיות קדמוניות בתרמומיקסרים נפרדים. כוונו כל תרמומיקסר לטמפרטורה הנדרשת ול-400 סל"ד כדי להתחיל בניסוי האבולוציה. לאחר 48 שעות, העבירו 15 מיקרוליטר מכל אחת מתרביות אפס ההעברה ל-1.5 מיליליטר של BBM מחומם בתוספת תווך הכלול בצינור שני מיליליטר מנוקב המסומן כהעברה אחת.

אטמו את הצינורות עם קרום חדיר לפני שתחזירו אותם למיקומים אקראיים לתוך התרמומיקסרים המתאימים. מדוד את OD600 של העברה אפס בספקטרופוטומטר מבוסס לוח כדי להשלים את ההעברה הראשונה. חזור על העברת התרבית ומדידת הצפיפות האופטית כל יומיים כדי לבצע העברות עד שתגיע למספר ההעברות הרצוי.

הכינו מלאי גליצרול של אוכלוסיות לאחר כל העברה עשירית ובהעברה הסופית, ותייגו את הצינור עם מזהה אוכלוסיית האבות ומספר ההעברה. יש לכוון את התרמומיקסרים לטמפרטורות קבועות של 75 מעלות צלזיוס ו-65 מעלות צלזיוס. תרמומיקסר שלישי יופחת בהדרגה כדי לבחון את התגובה לשינוי הדרגתי.