הקרנה ועיבוד אורגנואידים סרטניים שמקורם במטופל לצורך הערכת רגישות לקרינה באמצעות הדמיה חיה

כדי להתחיל, להשיג אורגנואיד גידול נגזר המטופל או PDTO ולהוסיף שלושה מיליליטר של מדיום תרבית מועשר טרי מועשר DMEM F/12 ל- PDTO כל שלושה עד ארבעה ימים. באמצעות פלטפורמת הקרינה לחקר בעלי חיים קטנים, הקרינו את ה- PDTO המכיל כיפות במצב שדה פתוח. מיד לאחר ההקרנה יש לשטוף כל PDTO המכיל כיפת נגריגל בשני מיליליטרים של תווך DMEM F/12 מועשר.

לאחר מכן, באמצעות P 1000, יש להשהות מחדש את ה-PDTO במיליליטר עד שלושה מיליליטר של אנזים רקומביננטי שהושג באופן מסחרי. מעבירים את מתלה התא לצינור צנטריפוגה של 50 מיליליטר ודגרים במשך חמש דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. צנטריפוגה את הצינור כדי לגלול את התאים ולשאוף את הסופרנאטנט להשאיר כמיליליטר אחד של אנזים רקומביננטי בצינור.

לאחר מכן שטפו את התאים עם מדיום DMEM F/12 מועשר וסננו את תרחיף התא במסנן רשת של 40 מיקרומטר כדי לחסל אשכולות תאים, הכתימו מדגם קטן של התאים המסוננים עם 10% טריפין כחול ב-PBS וספרו אותם במונה תאים אוטומטי. להשהות מחדש את התאים כדי להשיג צפיפות של 800 תאים ב 50 מיקרוליטר של מדיום מועשר עם 66% magrigel. לאחר מכן, כל כיפה בבארות נפרדות של צלחת תרבית תואמת הדמיה 48 ודוגרת על הצלחת כדי לאפשר למגריגל להתמצק.

לבסוף, הוסף 0.5 עד מיליליטר אחד של מדיום DMEM F/12 מועשר לכל באר להדמיה חיה.