כדי להתחיל תרבית חמש פעמים 10 עד חמישית DF-1 תאים לכל באר בצלחת שש באר עם DMEM בתוספת 10% FBS. כאשר התאים מגיעים למפגש של 80%, יש להשליך את הסרום המכיל מדיום תרבית תאים. לאחר שטיפת התאים שלוש פעמים עם PBS, הוסף שני מיליליטר של מדיום תרבית תאים ללא סרום, ולאחר מכן תמיסת וירוס IBDV לכל באר.
לאחר שעה אחת של ספיגת וירוסים, לשטוף את התאים עם PBS שלוש פעמים לדגור אותם במשך 24 שעות עם שני מיליליטר של DMEM בתוספת 2% FBS. הוסף 500 מיקרוליטר של טריפסין לכל באר, ואחריו שני מיליליטר של DMEM עם 10% FBS לאחר דקה אחת. צנטריפוגות את התאים ומוציאות את הסופרנאטנט בזהירות.
לאחר השעיה מחדש של גלולת התא ב-PBS, מערבלים בעדינות את הצינור למשך שלוש שניות וצנטריפוגות את התאים כפי שתואר קודם לכן. באמצעות המוציטומטר תחת מיקרוסקופ, לספור את התאים כדי להשעות אותם מחדש בנפח מתאים של ציטומטריית זרימה צביעת חיץ מערבולת את המתרחיף. הוסף 100 מיקרוליטר של תרחיף התא היחיד לתוך צינור פוליסטירן עגול בעל תחתית עגולה של חמישה מיליליטר.
לדגור על התאים הנגועים ב- IBDV ולדמות תאי ביקורת עם מיקרוגרם אחד של נוגדן מתאים על קרח למשך 30 דקות בחושך. יש לערבב בעדינות כל 10 דקות. לשטוף את התאים עם מיליליטר אחד של ציטומטריה זרימה מכתים חיץ צנטריפוגה את הצינור.
לאחר השלכת הסופרנטנט, השהה מחדש את הגלולה ב -100 מיקרוליטר של חיץ צביעת ציטומטריית זרימה. לאחר מכן לדגור את התאים עם 10 מיקרוגרם למיליליטר של יודיד פרופידיום במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר בחושך. ולהוסיף 400 מיקרוליטר של חיץ צביעת ציטומטריית זרימה לבדיקת ציטומטריית זרימה.
בצע ציטומטריית זרימה עם צינור הבקרה הריק ואחריו הצינורות המוכתמים הבודדים כדי להתאים את פרמטרי המתח והפיצוי לפני הפעלת כל הדגימות. ציטומטריית זרימה הצביעה על כך שמספר ניכר של תאים היו חיוביים לשברי N-terminal של עוף Gasdermin E לאחר זיהום IBV, בעוד ששברי טרמינל C של עוף שסוע Gasdermin E בקושי היו ניתנים לזיהוי על ידי ציטומטריית זרימה באמצעות צביעת אנטיגן פני השטח של הממברנה. אוכלוסיית שברי N-terminal של עוף Gasdermin E ופרופידיום יודיד בתאים נגועים ב- IBDV הייתה גדולה משמעותית מזו של בקרות נגועות מדומה, דבר המצביע על כך שחלק זה של תאים נגועים ב- IBDV עבר פירופטוזיס.
