התחל על ידי ציפוי המטריצה החוץ תאית על תוספות תרבית תאים עבור תרבית חד-שכבתית דו-ממדית שמקורה באורגנואידים. יש למרוח 100 מיקרוליטר של ציפוי מטריצה חוץ-תאי על התא האפי של כל תרבית תאים מוכנה, להכניס ולהחליף את המכסה. לאחר מכן דוגרים על צלחת תרבית התאים באינקובטור לח בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני למשך שעה.
עבור תאי אורגנואיד רקטליים, לאחר הדגירה, יש להחליף את ציפוי המטריקס החוץ תאי בתווך תרבית חד-שכבתי רקטלי ולדגור למשך הלילה. לאחר עיכול אנזימטי של האורגנואידים וסינון לתאים בודדים, צנטריפוגו את תרחיף התא ב -200 גרם למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס ולאחר מכן השליכו את הסופרנטנט. לאחר מכן, להכין 200 מיקרוליטר של תרחיפים התא לכל תרבית תא להוסיף מדיה תרבית monolayer.
אחזר את צלחת תרבית התא 24 באר המכילה תוספות תרבית תאים מצופות מטריצה חוץ-תאיות. באמצעות שאיבת ואקום, רוקנו בזהירות את התא האפי של כל תרבית תא כדי למנוע הפרעה לציפוי. יש למרוח בזהירות 200 מיקרוליטר של תרחיף התא הבודד על התא האפי של כל תוספת תרבית תא.
הוסף 500 מיקרוליטר של מדיום תרבית monolayer בתוספת המתאימה לחדר basolateral של כל באר. לאחר מכן דוגרים על הצלחת באינקובטור לח כדי לקדם הידבקות וצמיחה של תאים, ויוצרים חד-שכבה דו-ממדית על תוספת תרבית התא. החליפו את אמצעי התרבית הן בחדר האפי והן בחדר הבזולטרלי אחת ליומיים, החל מ-48 שעות לאחר זריעת התאים.
עבור צביעה אימונופלואורסצנטית של חד-שכבה דו-ממדית שמקורה באורגנואידים, חתכו בזהירות את קרום תרבית התא עם להב אזמל והניחו את תוספת תרבית התא על שקופית זכוכית. הוסף מדיית הרכבה על משטח כיסוי והנח אותה על מגלשת הזכוכית לפני התבוננות בתאים. יום אחד לאחר זריעת אורגנואידים בוגרים מנותקים על גבי תרבית תאים, נוצר חד-שכבתי דו-ממדי.
מיקרוסקופ האלקטרונים הסורק חשף מיקרוווילי מפותח היטב ותיחום תאי על פני השטח האפי של החד-שכבות הדו-ממדיות חמישה ימים לאחר הזריעה. צביעה אימונופלואורסצנטית של החד-שכבות הדו-ממדיות אישרה את נוכחותם של גבול מברשת אפיקלית, צמתים של היצמדות בזולטרלית ותאי גביע מייצרי ריר הן בשכבות חד-שכבתיות דו-ממדיות של אורגנואידים איליאליים והן רקטליים.
