כדי להתחיל, השתמש במרית מקוררת מראש כדי להוסיף 100 מיליגרם של אבקת רקמת צמח לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה פוליפרופילן שכבות. לאחר מכן מיד להוסיף מיליליטר אחד של 20% מתנול לצינור. הניחו את הצינור הסגור על שייקר נדנדה למשך שלוש שעות בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן, צנטריפוגר את הצינור ב 9, 464 G במשך 10 דקות, ולאסוף את supernatant לתוך בקבוקון autosampler LC-MS. הגדר מכשיר LC-MS עם מקור יינון אלקטרוספריי ועמוד HPLC בפאזה הפוכה. עבור HPLC, יש להשתמש ב-0.1% חומצה פורמית במים כממס A ו-0.1% חומצה פורמית באצטוניטריל כממס B.כוונן את טמפרטורת תנור העמודים ל-45 מעלות צלזיוס ואת קצב הזרימה ל-0.5 מיליליטר לדקה.
אזנו את העמודה עם 99%A ו-1%B. הגדירו שיפוע של 30 דקות כדי שריכוז הממס B יעלה מ-1% ל-50% במשך 26 דקות, ואז חזרו במהירות ל-1%B לאחר 26.01 דקות והחזיקו למשך ארבע דקות. הגדר את פרמטרי ההפעלה של ספקטרומטר המסות.
הגדר את מתח הממשק לארבעה קילו-וולט, את זרימת הגז הנבוליזציה לשלושה ליטר לדקה, ואת זרימת גז החימום ל-10 ליטר לדקה. כוונן את טמפרטורת קו ההתמוססות ל-250 מעלות צלזיוס, טמפרטורת בלוק חום ל-400 מעלות צלזיוס וטמפרטורת ממשק ל-300 מעלות צלזיוס. הגדר את זרימת גז הייבוש ל -10 ליטר לדקה ואת לחץ גז הדיסוציאציה הנגרם כתוצאה מהתנגשות ל -17 קילופסקל.
בנה שיטת MS במצב חיובי של מקור יינון אלקטרוספריי, כלול סריקות Q3 ו- Q1 המכסות את טווח המסה של 100 עד 1, 000 דלטון כאשר סריקת Q1 משמשת כאירוע סקר עם אי הכללת איזוטופים אוטומטית. הוסף קישור לסריקת יוני מוצר לסריקת Q1 עם חלון מסה של 50 עד 1, 000 דלתונים, אנרגיית תא התנגשות של מינוס 20 וולט וזמן אירוע של פחות מ- 0.2 שניות. לאחר מכן, התאם את שיטת MS כדי להוסיף סריקות יון מקדים במצב חיובי שווה לאורך שיטת LC עם אנרגיות תא התנגשות של מינוס 20 וולט וזמני אירוע של 0.75 שניות.
ודא שבכל המקרים, פונקציות אוטומטיות של איזוטופ מוציא או מנטרל מופעלות. הגדר את ערכי המטען הראשי עבור מקטעי אלקלואיד טרופאן חד-תחליפים, לא מוחלפים ותלת-תחליפים. לאחר מכן, לשיטת MS-MS, הוסף סריקות אובדן ניטרליות במצב חיובי השווה לאורך שיטת LC עם אנרגיות תא התנגשות של מינוס 20 וולט וזמני אירוע של 0.75 שניות.
ודא שבכל המקרים, פונקציות אוטומטיות של אי-הכללה או דה-איזוטופינג מופעלות. הגדר את מסות ההפסד הניטרליות של עניין עבור אסטרים על אלקלואידים טרופניים עבור אסטרים שמקורם חומצה טיגלית, קבוצות אצטיל ואסטרים של חומצה פנילקטית או טרופית. הורד את שיטת LC-MS וצור קבצי נתונים עבור דוגמאות של עניין.
ברגע שעמודת HPLC מאוזנת ב 45 מעלות צלזיוס, הזריקו 10 עד 20 מיקרוליטר דגימה.
