להשיג אורגנואידים קיבה אנושיים שהוכנו בעבר עבור פרופיל pH. כדי להתחיל, חבר את אלקטרודת הייחוס לכבל אלקטרודת ה- pH באמצעות המחבר. לאחר מכן, חבר את המיקרואלקטרודה למגבר ואת המגבר למחשב מוארק עם התוכנה באמצעות כבל USB.
הניחו את המיקרואלקטרודה ואת אלקטרודת הייחוס במים שעברו דה-יוניזציה כדי לטבול את שני הקצוות בסנטימטר אחד לפחות בנוזל. מלא צינורות חרוטיים של 50 מיליליטר במאגרי כיול רצויים. בעזרת מגבון מעבדה עדין, כתם בעדינות את צינורית המגן יחד עם אלקטרודת הייחוס.
לאחר פתיחת התוכנה, תחת לשונית הכיול, בחר בתיבה Y-Zoom ולאחר מכן הגדר את קריאת אות החיישן למיליוולטים. החל מהאלקטרודות במאגר pH 4.01, הזן 4.01 כערך ה- pH הידוע. בחר הוסף נקודה לאחר שקריאת המיליוולט מתייצבת, ולאחר מכן החזיר את שתי האלקטרודות למים נטולי יונים, כדי לשטוף אותן.
לאחר חזרה על התהליך עבור מאגר pH 9.21, לחץ על הוסף נקודה כאשר האות יציב בסביבות 83 מיליוולט. בדקו שהמיקרואלקטרודות מגיבות באופן ליניארי בין pH 4.01 ל-9.21 לקבלת עקומת כיול דו-נקודתית. הניחו בזהירות את מארז ההגנה שטוח על הספסל ומשכו את המארז בתנועה מהירה ומהירה כדי להסיר את המיקרואלקטרודה.
הרכיבו את המיקרואלקטרודה על מיקרומניפולטור וסדרו את הסטריאוסקופ והמיקרומניפולטור כך שהמיקרואלקטרודה תוכל להתקדם לעבר צלחת התרבית בחופשיות. מקמו את צלחת התרבית המכילה את האורגנואידים ליצירת פרופיל. אבטחו קלות את אלקטרודת הייחוס למהדק שעל מעמד הטבעת משמאל לסטריאוסקופ.
מקדמים ויזואלית את קצה המיקרואלקטרודה עד שהיא שקועה מספיק במדיה. לאחר שהאות התייצב, רשום שלוש קריאות pH של התקשורת. לאחר מכן, לקדם לאט את המיקרואלקטרודה לתוך ECM מבלי לגעת אורגנואידים.
רשום לפחות שלוש קריאות pH כדי לחשב את הממוצע. מקם את המיקרואלקטרודה לאורך הציר הניצב למשטח האורגנואידים, תוך ביצוע כניסה קלה בעדינות על משטח האורגנואיד הבזולטרלי מבלי לחדור אליו. מקדמים בזהירות את המיקרואלקטרודה לתוך האורגנואיד ומודדים את ה- pH הלומינלי.
לאחר השלמת, המשך למדוד את ה- pH עבור האורגנואיד הבא. הניחו את האלקטרודה לניקוי בחזרה בצינור ההגנה שלה. שטפו את האלקטרודה באופן סדרתי במים שעברו דה-יוניזציה, אתנול וחיץ.
הניחו את אלקטרודת הייחוס בתוך מלאה בתמיסת אשלגן כלורי תלת-טוחנת. מלאו נימי זכוכית של שני מיקרוליטרים בשמן מינרלי סטרילי והעמיסו אותו על מזרק אוטומטי ננוליטר הנשלט על ידי מיקרומניפולטור. לבסוף, מלא אותו בתמיסה המכילה 0.02% מתיל אדום וחומצה הידרוכלורית 150 מילימולרית ובצע את ההזרקה עם 9.2 ננוליטר של התמיסה.
השונות ברמת החומציות הלומינלית על פני 10 אורגנואידים על אותה צלחת תרבית הייתה מינימלית, עם מדידות עקביות סביב 8.16. רמת החומציות התוך-לומינלית על פני חמישה קווי אורגנואידים שונים הייתה עקבית בכל תרבית, אך נצפתה שונות משמעותית בין קווי אורגנואידים. ה-pH הלומינלי האורגנואידי היה נמוך באופן עקבי מה-ECMs, שבתורו היה נמוך יותר מה-pH של התקשורת, מה שמרמז על כך שה-pH הלומינלי רלוונטי מבחינה פיזיולוגית ולא נקבע רק על ידי סביבת התרבות הסובבת.
הזרקת מתיל אדום ללומן האורגנואידי אישרה כי היה לו pH גדול מ-6.2, בהתאם למדידות המיקרואלקטרודות שהראו pH כמעט נייטרלי.
