טיהור וניתוח תאי T נאיביים CD4⁺ עכברים באמצעות ברירה שלילית מגנטית מבוססת חרוזים

כדי להתחיל, להכין עכבר splenic תא יחיד השעיה עם אחד כפול 10 בחזקת שמונה תאים למיליליטר בנפח של 0.1 עד שני מיליליטר. הוסיפו 50 מיקרוליטר של נסיוב חולדות לדגימה. מעבירים את הדגימה לצינור תחתון עגול מפוליסטירן של חמישה מיליליטר.

הוסיפו 50 מיקרוליטר קוקטייל בידוד לדגימה. מערבבים היטב ודגרים במשך 7.5 דקות בטמפרטורת החדר. עכשיו להוסיף 50 מיקרוליטר למיליליטר של קוקטייל דלדול.

מערבבים היטב ודגרים במשך 2.5 דקות. בינתיים, מערבלים את החרוזים המגנטיים כדי להבטיח פיזור אחיד. הוסיפו 75 מיקרוליטר של החרוזים המגנטיים לדגימה.

מערבבים היטב ודגרים במשך 2.5 דקות. ממלאים את המדגם בסל"ד 1640 בינוני לנפח סופי של 2.5 מיליליטר ומערבבים מספר פעמים. לאחר מכן הכנס את הצינור למגנט למשך 2.5 דקות.

הרימו את המגנט והפכו אותו עם הצינור בתנועה רציפה אחת, ושפכו את תרחיף התא המועשר לתוך צינור חדש. קבע את מספר התא באמצעות המוציטומטר. בצע ניתוח ציטומטרי של זרימה עבור CD נאיבי ארבעה תאי T חיוביים לפני ואחרי בידוד.

לאחר הגידור, מעבירים את מתלה התא לצינור צנטריפוגה חדש. צנטריפוגה ב-400 גרם למשך חמש דקות ומשליכים את הסופרנטנט. להשעות מחדש את הגלולה ב 200 עד 500 מיקרוליטר של RPMI 1640 בינוני בתוספת 10% FBS.

עבור כל מיליליטר אחד של תרבית תאים, להוסיף שני מיקרוליטר של קוקטייל הפעלת לויקוציטים ולערבב. תרבית את התאים באינקובטור פחמן דו חמצני בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם לחות רוויה למשך ארבע עד שש שעות.