כדי להתחיל, הניחו עין עכבר רשמית וקבועה על פיסת נייר שעווה מתחת למיקרוסקופ מנתח. בעזרת זוג מיקרו מלקחיים, החזיקו את שרידי השריר ועצב הראייה. לאחר מכן לכוון את העין כך הקרנית פונה לצד אחד.
כעת השתמש בלהב כירורגי כדי לבצע חתך באורך מילימטר עד שניים מאחור ובמקביל ללימבוס. הפעילו כוח כלפי מטה עם הלהב תוך החזקת העין במקומה עד שהמקטע הקדמי נפרד מהקצה האחורי. לאחר מכן השליכו את המקטע הקדמי ואת העדשה.
מעבירים את הקטע האחורי לצלחת של שישה סנטימטרים מלאה ב-PBS. השתמש במרית מיקרוס כדי לגרוף את הרשתית ובו זמנית להחזיק את עצב הראייה עם מיקרו מלקחיים. כדי לשטוף את הרשתית, מעבירים אותה לבאר של צלחת בת 12 בארות שיש בה שש בארות מלאות במים מזוקקים כפולים.
השתמש פיפטה P1000 בזהירות פיפטה מים למעלה ולמטה הסמוך הרשתית תוך ניפוח המים כדי לגרום תסיסה עדינה. לאחר מכן, השתמש פיפטה זכוכית הפוכה כדי להעביר את הרשתית לבאר השנייה. כדי לעכל את הרשתית, להעביר את הרשתית שטופה לתוך תמיסת טריפסין בצלחת 12 באר עם פיפטה זכוכית הפוכה.
מרכז קצה פיפטה P200 ספוג טריפסין על עצב הראייה. לאחר מכן יש לשפשף בעדינות את כל רשת כלי הדם מעלה ומטה כדי לנתק את הרקמה הלא וסקולרית. כעת, השתמשו בפיפטת זכוכית הפוכה שנשטפה מראש בטריפסין כדי להעביר את כלי הדם ברשתית לבאר המכילה מים מזוקקים כפול בצלחת בת שש בארות.
מערבלים את הצלחת, ואז פיפטה את כלי הדם למעלה ולמטה עם פיפטה זכוכית הפוכה שטופת טריפסין כדי להסיר כל רקמה לא וסקולרית שיורית. העבר בזהירות את כלי הדם ברשתית למרכז האזור המסומן בשקופית מיקרוסקופ משטח טעונה. לאחר מכן השתמשו בפיפטת P200 כדי להסיר בזהירות את עודפי המים מקצה אחד.
הניחו את המגלשה בארון בטיחות ביולוגית קרוב לצד הקדמי כדי לאפשר לשאריות המים להתאדות. כאשר כלי הדם כמעט יבש, העבירו אותו תחת מיקרוסקופ ניגודיות פאזה. השתמש פיפטה P200 כדי להוסיף באיטיות מים מזוקקים כפול בצד אחד של האזור המסומן כדי להחזיר בזהירות את כלי הדם.
קיבוע כלי הדם הרשתית המבודדים הביא לרקמה חזקה מבחינה מבנית ועמידה מספיק המתאימה למדידות AFM. לעומת זאת, כלי הרשתית שבודדו מעיניים לא מקובעות או מקובעות לזמן קצר הפכו מקוטעים והתמוטטו.
