ייצור בתפוקה גבוהה של ספרואידים רב-תאיים מקו תאי סרטן אנושי להדמיית תלת-ממד חיה

כדי ליצוק צלחות פטרי תלת מימדיות, שטפו את המיקרותבניות במים מזוקקים והניחו אותן במיכל autoclavable עבור autoclaving. הוסיפו 0.9% מלוחים סטריליים לאבקת האגרוז האוטוקלאבית בבקבוק זכוכית של 200 מיליליטר. הבריגו את המכסה באופן רופף כדי למנוע הצטברות לחץ וסובבו את הבקבוק כדי לערבב את אבקת האגרוז.

מרתיחים את אבקת האגרוז במיקרוגל עם ניעור לסירוגין. לאחר שתמיסת האגרוז מתקררת, מפיפטים את האגרוז המותך לתוך תבנית המיקרו ומחכים עד שהיא מתמצקת. לאחר מכן, כופפו בזהירות את תבנית המיקרו כדי להסיר את צלחת הפטרי התלת-ממדית והעבירו אותה לצלחת תרבית רקמות בת 12 בארות.

כדי לאזן את צלחת הפטרי התלת-ממדית, הוסיפו 2.5 מיליליטר של מדיום 5A של מקוי לכל באר, ודגרו במשך 15 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. לאחר שיווי המשקל הסופי, הסירו לחלוטין את כל מדיום התרבית סביב צלחת הפטרי התלת-ממדית ובתוך המנה. טיפתית, זרעו 190 מיקרוליטר של תרחיף תאים המכיל 40, 500 תאים לתוך תא הזריעה ולאפשר לתאים להתיישב במשך 10 דקות.

הוסיפו שני מיליליטרים של תווך 5A של McCoy לחלק החיצוני של צלחת הפטרי התלת-ממדית, ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני. לאחר ארבעה ימים, הספרואידים קומפקטיים מספיק למיקרוסקופיה. מוסיפים 200 מיקרוליטר של תמיסת הציפוי לכל באר של צלחת תרבית U-תחתית 96 בארות, ודגרים במשך דקה אחת.

מוציאים את תמיסת הציפוי העודפת ומניחים לצלחת להתייבש למשך שעה. ראה 200 מיקרוליטר של תרחיף תאים המכיל 500 תאים לכל באר ודגר ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך ארבעה ימים לפחות.