ב-Vivo התפשטות וקציר של תאי T-ALL של דגי זברה המסומנים בתווית GFP

כדי להתחיל, הפשירו בקבוקון המכיל מיליליטר אחד של תאי T-ALL קפואים של דגי זברה עם תווית GFP באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס עם ניעור עדין. לאט לאט פיפט את התוכן של הבקבוקון לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר, המכיל ארבעה מיליליטר של מדיה דגים על קרח. סובב את התאים ב 2, 500 גרם במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס ולזרוק את supernate לפני resuspending את הגלולה ב 0.5 מיליליטר של מדיה דגים.

הוסף 10 מיקרוליטר של תרחיף תאים לתוך צינור microcentrifuge המכיל 10 מיקרוליטר של צבע כחול טריפאן. מערבבים היטב ומעבירים 10 מיקרוליטר להמוציטומטר וסופרים את התאים תחת המיקרוסקופ. לאחר מכן, החזיקו את דג הזברה CG1 הבוגר המורדם עם צד הגחון כלפי מעלה.

באמצעות מיקרומזרק המילטון, להזריק חמישה עד שישה מיקרוליטרים של תרחיף תאים לתוך החלל intraperitoneal. כ-21 עד 28 ימים לאחר ההשתלה, יש להעריך את אחוז תאי הלוקמיה המסומנים ב-GFP מדגי זברה מורדמים. כדי לקצור תאי לוקמיה, העבירו את דגי הזברה המורדמים לצלחת פטרי חדשה והוסיפו מיליליטר אחד של מצע דגים כדי לשמש כחיץ לתאים.

בעזרת סכין גילוח, ערפו תחילה את ראשו של דג הזברה, ולאחר מכן ערפו את הרקמה. פיפטה למעלה ולמטה כדי לעקור גושים גדולים של תאים. העבירו את תרחיף התא דרך מסננת תאים של 40 מיקרון לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר כדי להתנתק לתרחיף של תא יחיד.