הכנה ומיון של תאי T-ALL של דגי זברה מוכתמים CT-FR להשתלה ומעקב אחר גידולים

להכנת צלחת התורם להעביר 500, 000 תאי זברה מסוג CG1 פראי לתוך צינור חרוטי 15 מיליליטר. הוסיפו חמישה מיליליטר של מצע דגים כדי לדלל את מלאי התאים ל-100 תאים למיקרוליטר. מוציאים 50 מיקרוליטר מתרחיף התא לכל באר של צלחת 96 בארות ומניחים את הצלחת בארבע מעלות צלזיוס עד למיון.

אין להכין פקדי צבע וצבע יחיד להגדרת ניסוי המיון. העבירו את תרחיף התאים של הפקדים והדגימות דרך מכסה מסנן של 35 מיקרון לתוך שפופרת פקס על קרח. צנטריפוגה צלחת 96 באר ב 2, 500 גרם בארבע מעלות צלזיוס.

בזהירות להסיר 45 מיקרוליטר של supernatant מכל באר, משאיר חמישה מיקרוליטר של נוזל מאחור. מרחפים מחדש את התאים עם פיפטה של 20 מיקרוליטר ובאמצעות מזרק המיקרו של המילטון, מזריקים את תרחיף התאים למספר הרצוי של דגי זברה CG1. לאחר השתלת דגי זברה CG1 עם תאים ממוינים לצורך ניתוח הדילול המגביל, התאים הגבוהים של CT-FR היו בעלי תדירות גבוהה פי ארבעה של תאי גזע לוקמיים בהשוואה לתאים נמוכים של CT-FR.

תמונות מייצגות של דגי זברה 28 ימים לאחר ההשתלה הראו כי 89% מדגי הזברה הגבוהים ב-CT-FR מפתחים לוקמיה, בהשוואה ל-20% בקבוצה הנמוכה של CT-FR. דגי זברה גבוהים מסוג CT-FR היו בעלי חביון קצר משמעותית ללוקמיה. לדגי זברה גבוהים מסוג CT-FR הייתה הישרדות כללית נמוכה משמעותית בהשוואה לדגי זברה נמוכים מסוג CT-FR.