כדי להדביק תרביות סלמונלה בפאגים חיידקיים, לדלל בן לילה תרבית של סלמונלה אנטריקה בנפח סופי של חמישה מיליליטר של LB ולהוסיף לה 0.1 מיליליטר של חיידקים שהוכנו בעבר פאג 'ליזט. לאחר מכן דוגרים ב-37 מעלות צלזיוס וב-200 סל"ד למשך 24 שעות. בצינור צנטריפוגה חרוטי של 50 מיליליטר, מדללים את תרבית החיידקים המכילה פאגים 100 פעמים בחמישה מיליליטר של LB מסונן 0.22 מיקרון. צנטריפוגה את המתלה במשך 10 דקות ב 2, 377 גרם.
בזהירות decant supernatant, משאיר קצת נפח בתחתית כדי להבטיח את נוכחותם של תאים. לשטוף את תאי החיידקים עם 10 מיליליטר של 0.22 מיקרון מסונן LB בינוני. לאחר חזרה על הצנטריפוגה ושטיפה שלוש פעמים, להשהות מחדש את הגלולה בחמישה מיליליטר של LB מסונן. השתמש במערכת סינון ואקום כדי לסנן 50 מיקרוליטר של תרחיף החיידקים המתקבל דרך מסנן סטרילי 0.45 מיקרון.
שוטפים את המסנן עם 100 מיליליטר של LB.To המסוננים להקל על שחרור פאגים מתאי חיידקים, לדגור על המסנן המכיל את התאים מבלי לפרק את המערכת. שטפו את המסנן שוב, כפי שהודגם קודם לכן, באמצעות מערכת סינון הוואקום. כדי לשחזר את תאי החיידקים מהמסנן באמצעות מלקחיים סטריליים, העבירו את המסנן לצלוחית.
לאחר מכן הוסף שני מיליליטר של 2x LB מעל המסנן ופיפטה מספר פעמים כדי לשחרר את התאים מהמסנן. צנטריפוגה מיליליטר אחד של מתלה זה במשך שתי דקות ב 10, 354 גרם. לאחר השלכת supernatant, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של מדיום LB מסונן.
לאחר מכן להשעות מחדש את התאים במיליליטר אחד של 2x LB. לאחר מכן, ערבבו סלמונלה אנטריקה ליפופוליסכריד מסחרית, או LPS, עם 20 מיקרוליטר של תרחיף חיידקי במיליליטר אחד של LB מסונן. דוגרים על התערובת במשך שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם טלטול ב-200 סל"ד כדי למנוע הדבקה חוזרת בפאגים של חיידקים. לאחר מכן, להעביר מיליליטר אחד של תרבית צינור מיקרוצנטריפוגה צנטריפוגה צנטריפוגה המתלה במשך שתי דקות ב 10, 354 גרם. לשטוף את הגלולה שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של LB מסונן בינוני.
לאחר הכביסה, להשעות מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של 2x LB. הוסף 20 מיקרוליטר של תערובת זו למיליליטר אחד של LB מסונן, המכיל 0.8 מיליגרם למיליליטר של LPS מסחרי. ולדגור על התערובת ב 37 מעלות צלזיוס ו 200 סל"ד במשך שעתיים. לאחר מכן, גלולה מיליליטר אחד של תרבית בצינור מיקרוצנטריפוגה על ידי צנטריפוגה במשך שתי דקות ב 10, 354 גרם.
לאחר שטיפת התאים שלוש פעמים עם LB מסונן, להשעות אותם במיליליטר אחד של LB מסונן. באמצעות מערכת סינון ואקום, מעבירים מיליליטר אחד של תרחיף חיידקי דרך מסנן סטרילי של 0.45 מיקרון ושוטפים את המסנן באמצעות 100 מיליליטר של LB מסונן. מעבירים את הפילטר לבקבוק בעזרת מלקחיים סטריליים. הוסף שני מיליליטר של 2x LB מעל המסנן והפיפטה מספר פעמים כדי לשחרר תאים מהמסנן. צנטריפוגה מיליליטר אחד של תאים במשך שתי דקות ב 10, 354 גרם לפני שטיפה שלוש פעמים עם LB מסונן. להשהות מחדש את התאים שנאספו במיליליטר אחד של 2x LB.To להכין את החיסון ללא פאגים, להוסיף 100 מיקרוליטר של תאים מן התרחיף החיידקי ל 900 מיקרוליטר של LB המכיל 0.45 מיליגרם למיליליטר LPS.
יש לדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות עם רעידות ב-200 סל"ד. השתמש בזה כמו aliquot כדי לאשר את היעדר זיהום חוזר פאגים. על ידי ביצוע טיטרציות בשלבים שונים של הפרוטוקול, נצפה כי שטיפה וסינון חוזרים ונשנים לא הספיקו כדי לסלק פאגים חיידקיים מתרביות.
עם זאת, מספר הפאגים ירד ברגע שנעשה שימוש בשלב הדגירה עם LPS מסחרי. הצעד המכריע לסילוק מלא של פאגים חיידקיים בתרבית החיידקים היה הדגירה השנייה עם LPS מסחרי.
