כדי להתחיל, להשיג 250 מיליגרם של SAT מעל שריר החזה העיקרי במהלך השתלת CIED בתמיסת אחסון רקמות מיון תאים המופעלת מגנטית. הכינו מיליגרם אחד למיליליטר של Collagenase/Dispase ב-10 מיליליטר של תמיסת מלח מאוזנת קרה של Hanks. תחת ארון זרימה למינרי, טחון רקמות לחתיכות מילימטר מעוקב אחד ב 500 מיקרוליטר של תמיסת Collagenase/Dispase.
הוסיפו 4.5 מיליליטר של תמיסת Collagenase/Dispase לתערובת והעבירו את הרקמה המשולשת לצינור צנטריפוגה נקי של 50 מיליליטר. שטפו את מכסה צלחת הפטרי בחמישה מיליליטר של תמיסת Collagenase/Dispase והוסיפו אותו לצינור. דוגרים על הצינור למשך 30 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במסובב צינור המוגדר ל-20 סיבובים לדקה.
כדי לעצור את העיכול, שפכו 10 מיליליטר של מדיה מלאה לגידול תאי אנדותל לתוך הצינור. לאחר שניסו את התערובת המעוכלת עם צינורית ונפלון בעלת 14 מדדים, סננו אותה דרך מסננת תאים בגודל 70 מיקרומטר ושטפו אותה ב-10 מיליליטר של חיץ PBS-BSA של 0.5%. צנטריפוגו את התסנין ב-300 גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר והשליכו את הסופרנטנט.
כדי להסיר את התאים המתים, הוסיפו 200 מיקרוליטר של חרוזים להסרת תאים מתים לגלולת התא שנלקחה בצינור מיקרוצנטריפוגה, ודגרו. לאחר מכן חברו עמוד הפרדת נוזלים עם מסנן 30 מיקרומטר למגנט המפריד והניחו צינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר מתחתיו. לאחר שטיפת העמוד עם מאגר קשירה להסרת תאים מתים, הוסף את מתלה החרוזים לדוגמה.
תנו לו לעבור תחת כוח הכבידה ולאסוף את הפליטה. לאחר מכן, לסובב את התא החי שנאסף לפלוט ולהשעות מחדש את הגלולה המתקבלת ב 400 מיקרוליטר של 0.5% PBS-BSA. לדגור על התאים המרחפים עם 20 מיקרוליטר של חרוזים מגנטיים מצופים נגד CD31 בארבע מעלות צלזיוס במשך 20 דקות.
לאחר צנטריפוגה, להשהות מחדש את גלולת התא ב 500 מיקרוליטר של 0.5% PBS-BSA. חברו עמוד עם מסנן 30 מיקרומטר למגנט המפריד והניחו צינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר מתחתיו. הוסיפו את תרחיף מיקרו-חרוזי התא לעמוד ותנו לו לעבור תחת כוח הכבידה.
לאחר שטיפת העמוד, הניחו אותו בצינור צנטריפוגה טרי של 15 מיליליטר והוסיפו מיליליטר אחד של 0.5%PBS-BSA לעמודה. לחץ על בוכנת העמודה כדי לאסוף את החלק החיובי CD31. צנטריפוגות את הדגימה כפי שהודגם קודם לכן ומשהות מחדש את גלולת התא במיליליטר אחד של מצע גידול תאי אנדותל מיקרו-וסקולרי מלא.
מוציאים את המתלה לשתי בארות של צלחת 24 בארות מצופות ג'לטין 2%. תרבית את התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני במשך שבועיים עד ארבעה שבועות עד שהתאים הופכים לכמעט 80% נפגשים.
