כדי להתחיל, לקחת צלחת זכוכית עם מכסה הדוק. מניחים כדור צמר גפן בצלחת. מתחת למכסה מנוע, הוסף שלושה עד חמישה מיליליטר של אתר אתילי לכדור הצמר גפן.
מיד לכסות את המנה עם המכסה. השתמשו במברשת צבע כדי לאסוף את הזחלים האינסטאריים השלישי של דרוזופילה מבקבוקוני זבובים. מעבירים זחל אחד למיכל קטן ופתוח.
מניחים את המיכל בצלחת זכוכית עם אתר אתיל, ומיד לסגור את המנה בחוזקה. השתמש במיקרוסקופ דיסקציה כדי לבדוק את הזחל לניידות כל 30 שניות. מעבירים את הזחל המורדם למגלשת מיקרוסקופ זכוכית.
לטבול את הזחלים בטיפת מלח חרקים. תחת מיקרוסקופ דיסקציה. מוציאים את רוב המלח בעזרת ממחטת נייר.
מקם את הצד הגבי של הזחל כלפי מעלה עבור אבלציה של סיבים ענקיים, או את הצד הגחוני כלפי מעלה עבור אבלציה של TTMn. ואז לאט לאט להוריד כיסוי זכוכית להחליק על הזחל. הוסיפו מי מלח לצד החלקת הכיסוי.
כדי למלא את החלל שבין מגלשת הזכוכית לבין החלקת הכיסוי. עבור אבלציה של סיבים ענקיים, בדוק את מיקום המוח תחת הגדלה גבוהה במיקרוסקופ דיסקציה. ודא שהמוח שוכב בגובה ונראה דרך הקוטיקולה.
כדי להזיז כל רקמת שומן המכסה את המוח, השתמש במלקחיים כדי להפעיל לחץ קל על החלקת הכיסוי והזז את החלקת הכיסוי מצד לצד. הניחו את הדגימה על במת מיקרוסקופ רב-פוטונים. השתמש במסנן GFP כדי לאתר את הדגימה במצב אפיפלואורסצנטי.
עבור אבלציה של סיבים ענקיים, התמקדו בתאים המעניינים, ואז עברו למצב שני פוטונים. הגדר את הלייזר ל 870 ננומטר וכוונן את רווח הגלאי כדי להציג את תאי הביטוי GFP באמצעות סורק Galvano, להגדיר את האזור עבור אבלציה באמצעות אזור מעגלי של עניין. לאחר מכן, המשך להגדיר את פרוטוקול אבלציה בתוכנה, לשם כך, להגדיר ברצף מסגרת אחת של רכישה, גירוי, ואחריו מסגרת רכישה נוספת.
הפעל את עוצמת לייזר הגירוי בערך נמוך יותר והפעל את פרוטוקול הגירוי. אם האבלציה לא הצליחה ורק הלבינה את התא, הגדל את עוצמת הלייזר בהפרשים של 5% או את מספר הלולאות אחת בכל פעם, והפעל את הפרוטוקול שוב. עשה זאת עד שנראה אבלציה מוצלחת של התא.
לאחר הצתת התא בהצלחה, הסר את תלוש הכיסוי. בעזרת מברשת צבע, הרימו בעדינות את הזחלים מהמגלשה, ואז העבירו את הזחלים לבקבוקון מזון. בדגימות אבלציה ענקיות של סיבים.
האבלציה אומתה באמצעות היעדר סומא המסומן בתווית GFP בצד האבלאטי של המוח. עבור זחלי TTMn ablated. היעדרו של TTMn בצד אחד זוהה בקלות עקב מחסור בסומה ובדנדריטים.
