טעינת תאי T ראשוניים CD4⁺ של עכבר וציפוי חרוזים מגנטיים של חלבון G עם נוגדנים להדמיית Ca²⁺ מקומית

כדי להתחיל, לקחת תאי T חיוביים CD4 מבודדים בלוטות הלימפה עכבר וטחול. צנטריפוגה של שניים עד חמישה מיליון תאים למשך חמש דקות במהירות של 300 גרם. יש להשליך את הסופרנאטנט ולהשהות מחדש את הגלולה ב-480 מיקרוליטר של תווך תאי T המכיל 10 מיקרומולרי Fluo-4 AM ו-20 מיקרומולרית Fura Red AM. מכסים את צינור הפלקון ברדיד אלומיניום ודגרים על התאים למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר בחושך.

לאחר מכן מוסיפים שני מיליליטר של תווך תאי T לתאים וממשיכים לדגור במשך 30 דקות נוספות. מערבבים בעדינות את תרחיף החרוזים המגנטי של חלבון G ומעבירים 12.5 מיקרוליטר לצינור חדש. הניחו את הצינור על מעמד מגנטי כדי לאפשר לחרוזים לנדוד אל המגנט.

הוציאו בעדינות את מאגר האחסון מהצד הנגדי של המגנט כדי להסיר אותו. כדי להסיר את מאגר האחסון שנותר, הוסף 500 מיקרוליטר PBST ומערבולת למשך 10 שניות. הניחו שוב את הצינור על המעמד המגנטי והסירו את החיץ.

כדי לצפות את החרוזים עם נוגדנים, להשעות אותם 7.5 מיקרוליטר של PBST ולהוסיף חמישה מיקרוליטר כל אחד של anti-CD3 ו anti-CD28. דוגרים במשך 30 עד 60 דקות תוך ערבוב מתמשך בטמפרטורת החדר. שטפו את החרוזים המצופים שלוש פעמים עם 500 מיקרוליטר PBST, ולאחר מכן שטפו עם 500 מיקרוליטר של חיץ סידן באמצעות המעמד המגנטי, ואז השהו מחדש את החרוזים ב-200 עד 400 מיקרוליטר של מאגר סידן.