כדי להתחיל, הניחו את תרבית תאי Sf1Ep טריפסינזציה וצלחת 6 בארות על פלטפורמת עבודה. הוסף את המספר המתאים של תאי Sf1Ep ומדיום Sf1Ep לכל באר של צלחת בעלת 6 בארות. דוגרים על הצלחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני למשך הלילה.
שלב את רכיבי TpCM-2 במיכל סטרילי, והוסף dithiothreitol כאבקה יבשה אחרונה. ערבבו וסננו בעדינות את המדיום באמצעות יחידת סינון של 0.22 מיקרומטר. יש לאזן מראש את התווך בצנצנת אנאירובית, לפנות את התא באמצעות ואקום ביתי ולמלא מחדש בתערובת של 95% חנקן ו-5% פחמן דו חמצני שלוש פעמים.
לאחר מכן מלאו מחדש ב-1.5% חמצן, 5% פחמן דו-חמצני ואזנו את תערובת גז החנקן. מעבירים במהירות את התווך לאינקובטור תלת גזים, מוקם בטמפרטורה של 34 מעלות צלזיוס ודוגרים למשך הלילה. לאחר דגירה של לילה, הסר את המדיום מתרבית Sf1Ep ושטוף את התאים בנפח קטן של TpCM-2 המאוזן מראש.
לאחר הסרת השטיפה, יש להוסיף כמות מתאימה של TpCM-2 ולאזן את הצלחת ב-1.5% חמצן, 5% פחמן דו-חמצני, ולאזן את אטמוספירת החנקן ב-34 מעלות צלזיוס למשך שלוש עד ארבע שעות. הסר את תרבית T.pallidum הקיימת מאינקובטור דל חמצן ובדוק את שכבת תאי Sf1Ep בכל באר. לאחר רישום צפיפות התא ומראהו, פיפטה את המדיום מכל באר לתוך צינור חרוטי סטרילי 15 מיליליטר.
שטפו היטב כל באר עם 0.35 מיליליטר של טריפסין-EDTA שחומם מראש והוסיפו את השטיפה לצינור של 15 מיליליטר. הוסף עוד 0.35 מיליליטר של טריפסין-EDTA לכל באר ודגר במשך חמש דקות ב 37 מעלות צלזיוס כדי להסיר תאי Sf1Ep מהצלחת ו- T.pallidum מתא Sf1Ep. לאחר הניתוק, שלב את תאי T.pallidum ו- Sf1Ep המנותקים עם תווך המילואים שנאסף בצינור החרוטי של 15 מיליליטר ורשום את הנפח הכולל שאוחזר לחישוב התשואה לתרבית.
חסן את הצלחת שהוכנה בעבר של תאי Sf1Ep עם נפח מוגדר של T.pallidum שנקטף. לאחר החלפת האטמוספירה בצלחת, דוגרים בטמפרטורה של 34 מעלות צלזיוס בתוך צנצנת הבירה או באינקובטור תלת גז. לאחר החיסון, השתמש בתא ספירה עוזר כדי למנות T.pallidum תחת מיקרוסקופ שדה כהה.
יש להוסיף 50% גליצרול לריכוז סופי של 10% לתרבית T.pallidum ולפזר את הגליצרול באמצעות פיפטינג עדין או היפוך. מפזרים את התכשיר במיליליטר אחד עד שניים לבקבוקוני הקפאה בורגיים, ומיד מניחים את הבקבוקונים במקפיא בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס או במקפיא חנקן נוזלי. הכינו ושיווי משקל מראש של שתי צלחות 96 בארות עם 1000 תאי Sf1Ep ו-200 מיקרוליטר של TpCM-2 לכל באר ודגרו לילה באינקובטור תרביות רקמות.
למחרת, החלף את מדיום Sf1Ep ב- TpCM-2 כמתואר קודם לכן. לאחר הכמות, לדלל T.pallidum ב TpCM-2 לייצר שני תכשירים עם ריכוזים של 10 ו 40 תאים למיליליטר. יש לחסן 50 מיקרוליטר לבאר מתוך תכשיר 10 T.pallidum למיליליטר לאחת מ-96 הצלחות המוכנות.
בשתי בארות הבקרה בכל לוחית, לחסן את 2 x 10 בחזקת שלושה T.pallidum לכל דילול מיליליטר. אזנו את הצלחות עם תערובת הגז דלת החמצן ודגרו עליהן בצנצנת בירה או באינקובטור תלת גזים בטמפרטורה של 34 מעלות צלזיוס. ביום השביעי, הסר מחצית מהתווך והחלף אותו ב- TpCM-2 מאוזן טרי.
ברגע שבארות חיוביות מזוהות על ידי מיקרוסקופ שדה כהה, טריפסין את הבארות החיוביות ומעבירים את תרחיף התא ללוחות 24 בארות שהוכנו קודם לכן להרחבה נוספת. T.pallidum בדרך כלל שומר על תנועתיות של מעל 90% ומתרבה לוגריתמית עם זמן הכפלה של 33 עד 45 שעות במשך כשבעה ימים לפני הכניסה לשלב הנייח. במשך שבוע אחד עברו הספירוכטות כארבע עד חמש הכפלות.
