כדי להתחיל, סדרו מדיום הרחבה טרי, סננו פרוטאינאז מעוקר ותמיסות אנטיביוטיות, וכלי ניתוח מעוקרים על פלטפורמת העבודה של ארון הבטיחות הביולוגית. הוסיפו קולגן זנב חולדה לצלחות תרבית של 100 מילימטר ולבארות טרנס של 24 מילימטר. השאירו את הכלים פתוחים למשך הלילה תחת אור אולטרה סגול לעיקור.
טבלו את העכבר שעבר המתת חסד באתנול 75% לצורך עיקור. אין לטבול את האף והפה. בעזרת מספריים ומלקחיים כירורגיים, חותכים ופותחים את האפידרמיס מהלסת התחתונה לחלל הבטן של העכבר.
בעזרת קבוצה נוספת של מספריים ומלקחיים כירורגיים, קורעים את בלוטות התריס משני הצדדים ומסירים את הקשרים בין קנה הנשימה, רקמת השריר שמסביב והוושט. לאחר מכן, לחתוך בזהירות לתוך החזה, ולהשתמש מלקחיים להתעמק עמוק יותר לתוך חלל החזה. הסר את כל הריאה ומצא את קצה קנה הנשימה.
חותכים את קנה הנשימה מסחוס בלוטת התריס לענף הסימפונות קנה הנשימה, ומכניסים אותו למדיום הרחבה טרום קר המכיל ארבע אנטיביוטיקה. נערו את הצינור כדי לשטוף כמה שיותר דם מפני השטח של קנה הנשימה לפני הנחתו על קרח. כעת העבירו את קנה הנשימה ל- PBS טרום קר המכיל ארבע אנטיביוטיקה.
באמצעות מספריים כירורגיים ומלקחיים, להסיר קרישי דם ורקמות אחרות מפני השטח של קנה הנשימה לחתוך אותם לגודל של סנטימטר מרובע אחד. לדגור על רקמת קנה הנשימה בתמיסת פרוטאינאז ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר 40 דקות, נענע את הצינור מספר פעמים והשתמש במסננת תאים של 40 מיקרון כדי להסיר את הרקמות הנותרות.
שוטפים את קנה הנשימה הקצוץ על מסננת עם חמישה מיליליטר של מדיום הרחבה. צנטריפוגו את מתלה קנה הנשימה ב 400 G למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס, והשעו מחדש את הגלולה בשמונה מיליליטר של תווך התפשטות. לספור את התאים קיימא באמצעות כחול טריפאן ואת hemocytometer.
תרחיף תאי צלחת P0 על צלחת 100 מ"מ, מצופה מראש בקולגן זנב חולדה. תרבית את התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני.
