כדי להתחיל, להפוך בעדינות 10 מיליליטר צינורות דם שלמים 10 פעמים בטמפרטורת החדר. באמצעות רוטור דלי מתנדנד, צנטריפוגו את הצינורות ב 800 גרם במשך 10 דקות ב 22 מעלות צלזיוס עם הבלם דולק. לאחר מכן הניחו את הדגימות בארון בטיחות ביולוגי ובדקו את שלוש השכבות הנפרדות.
תייגו שלוש שפופרות פוליסטירן של חמישה מיליליטר עם האותיות A, B ו-C.Swirl ואספו מיליליטר אחד של מעיל האפי על ידי שאיפה והעבירו לצינור המסומן כ-A.לאחר מכן הוסיפו 60 מיקרוליטר של EDTA טוחנת 0.1 לצינור A המכיל את הפרווה הבאפי. מוסיפים 50 מיקרוליטר של תערובת הקוקטיילים לצינור A.Pipette למעלה ולמטה לפחות שלוש פעמים כדי לערבב אותו ולדגור במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להוסיף 890 מיקרוליטר של PBS לצינור A מעורבב על ידי pipetting לפחות שלוש פעמים.
לאחר מכן, מערבל את צינור החרוז המגנטי במשך 30 שניות. מוסיפים 50 מיקרוליטר של החרוזים המגנטיים לצינור A ופיפטה לפחות שלוש פעמים כדי לערבב היטב את החרוזים. הכניסו מיד את צינור A למעמד המגנט ודגרו במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.
לאחר מכן הכניסו בזהירות את תרחיף התאים המועשר לתוך צינור B, ואספו את החלק השקוף ללא תאי דם אדומים או מינימליים להתאוששות אופטימלית של PBMC. לאחר מכן, הסר את צינור A ממעמד המגנט והשלך אותו. לאחר מכן, הוסף 50 מיקרוליטר של חרוזים מגנטיים לתרחיף התא בצינור B ופיפטה למעלה ולמטה לפחות שלוש פעמים.
הכניסו מיד את צינור B למעמד המגנט ודגרו במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. בזהירות pipete התא מועשר תרחיף לתוך צינור C, לאסוף רק את החלק הברור. הסר את צינור B ממעמד המגנט והשלך אותו.
לאחר מכן הכניסו מיד את צינור C למעמד המגנט ודגרו במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. הכניסו בזהירות את מתלה התא המועשר לצינור צנטריפוגה מסומן ומלאו עד שני מיליליטר ב-PBS. מעבירים 50 מיקרוליטר של תרחיף התא לכוס דגימה של מונה התאים האוטומטי.
הוסף 450 מיקרוליטר של PBS לספירת תאים דילול של 1 עד 10.
