כדי להתחיל, להשיג חומצה פולית או מזון חסר כולין מיצרני מזון מכרסמים מסחריים. הדיאטה המיוחדת מכילה 0.3 מיליגרם לקילוגרם חומצה פולית, או 300 מיליגרם לקילוגרם כולין על ידי טרטרט. שמור על עכבר נקבה על דיאטה מיוחדת זו במשך ארבעה עד שישה שבועות.
מאוחר יותר, כאשר הצאצאים נגמלים מהאם, הניחו אותם על דיאטה של חומצה פולית או מחסור בכולין, כמו גם על דיאטת ביקורת. לאחר המתת הצאצאים, לאסוף את דגימת הדם ואת רקמת הכבד לניתוח ביוכימי. הוסף את הדם לצינור מצופה EDTA וצנטריפוגה את הצינור כדי לבודד את פלסמת הדם לקביעת הריכוז של מטבוליטים של פחמן אחד.
לאחר מכן, העבירו את דגימות רקמת הכבד החתוכות לצינור אחסון בהקפאה מהירה. המשקל הבסיסי והשבועי של נקבות עכברים בדיאטות ביקורת, כולין או מחסור בחומצה פולית במהלך ארבעת השבועות שקדמו להזדווגות לא הראו הבדל משמעותי. ריכוזי המטבוליטים האימהיים של פחמן אחד היו מעט נמוכים בפלזמה של עכברים שהיו נתונים לתזונה חסרת חומצה פולית בהשוואה לעכברי הביקורת.