כדי להתחיל, להשיג צלחת תרבית עם מיני Methylomonas LW13 מושבות. לחסן את המושבות בשישה מיליליטר של מלחים מינרליים חנקתיים בינוניים בצינור זכוכית. אטמו את הצינור עם פקק בסרום ואטם אלומיניום.
הוסיפו מתאן באמצעות מזרק כדי ליצור אטמוספירה סופית של 50% נפח לפי נפח מתאן באוויר. נערו את התרבית הנוזלית הפלנקטונית במהירות של 200 סיבובים לדקה בטמפרטורת החדר עד לעכירות, דבר שלוקח בערך יום אחד. העבירו את התרביות הנוזליות ביחס של אחד עד 10 למדיה רעננה.
המשיכו לגדל את התרביות הנוזליות של מתאנוטרופים כדי לרשום את צמיחת הפאזה, והגיעו לצפיפות אופטית של 600 ננומטר של כ-0.5. כדי להכין את המזרק, להסיר את הבוכנות הנלוות ומניחים אותו במיכל סטרילי. חברו קצה מסנן סטרילי מסוג פוליטטרה-פלואוראתילן או PTFE לכל מזרק והניחו את המזרק במדף מבחנה סטנדרטי כשהקצה פונה כלפי מטה.
לאחר מכן, מערבבים מיליליטר אחד של התאים עם חמישה מיליליטר של מלחים מינרליים חנקתיים בינוניים וארבעה מיליליטר של אגרוז מותך בצינור חרוטי סטרילי. יוצקים לאט את תערובת האגרוז לתוך המזרק עד סימן שמונה מיליליטר ולתת לו להתמצק. לאחר כ-15 דקות, מכסים את המזרק בפקק בוטיל גומי סטרילי בקוטר 20 מ"מ.
הדקו את הפקקים בעזרת סרט מעבדה ותייגו את המזרק. לאחר מכן, מלאו מזרק גדול של 60 מיליליטר ב-100% מתאן וחברו קצה מסנן PTFE המחובר למחט סטרילית בעלת 23 מד. חוררים את פקק הגומי של המזרק עם תערובת האגרוז עם מזרק גדול, ומכניסים מחט סטרילית שנייה כיציאת גז.
לחץ על הבוכנה של המזרק הגדול כדי לאפשר 20 מיליליטר של 100% מתאן לשטוף דרך חלל הראש. הסר את מחט המוצא כאשר נותרו מיליליטר עד שני מיליליטר של מתאן במזרק כדי למנוע זרימת חמצן חוזרת. לדגור על המזרק עם תערובת אגרוז ומתאן ב 18 מעלות צלזיוס.
כדי להבליט את האגרוז, החלף את קצה מסנן PTFE במחט סטרילית בעלת 23 מד ואת פקק הגומי בבוכנת המזרק שסופקה. לחץ באיטיות על הבוכנה כדי לפזר מרווחים של מיליליטר אחד לתוך צינורות מיקרוצנטריפוגות סטריליות נפרדות של 1.5 מיליליטר. הזן הפראי LW13 יצר רצועה אופקית ברורה בעומק מסוים במזרק השיפוע שבו ריכוזי המתאן והחמצן היו נמוכים.
LW13 שחוסן במזרקים הדרגתיים הראה שיפוע מונה מתאן-חמצן עם דלדול מתאן וצריכת חמצן המתאימה לעומק הרצועה האופקית. מוטציית מחיקת OAT של LW13 חסרה את היווצרות הפס האופקי המובהק שנצפתה בזן הסוג הפראי, מה שמצביע על תפקיד הגן בפנוטיפ זה.
