כדי להתחיל את השינוי של Escherichia coli BL21 DE3 תאים, להפשיר 50 microliter aliquot של תרחיף תאים מוכשר על קרח. הוסף מיקרוליטר אחד של DNA של פלסמיד סומו TRF2 pET 28a לתרחיף התא המוסמך, וסובב בעדינות את הצינור כדי לערבב את המתלה. לאחר הטרנספורמציה, מורחים 100 מיקרוליטר של תרחיף התא על לוחית אגר לוריא ברטני, או LB, המכילה 50 מיקרוגרם למיליליטר קנמיצין.
לדגור על התאים במשך הלילה ב 37 מעלות צלזיוס. למחרת, בחרו מושבה של התאים שעברו טרנספורמציה, ותרבו אותה בחמישה מיליליטר של LB בינוני, בתוספת 50 מיקרוגרם למיליליטר קנמיצין. דוגרים במשך 18 שעות ב-37 מעלות צלזיוס, עם רעידות ב-220 סל"ד.
לאחר הדגירה, השרישו את התרבית עם IPTG מילימולרי אחד כריכוז סופי. יש לדגור בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס למשך 17 שעות כדי לקדם את ביטוי החלבון. טען את תמציות החלבון הגולמי, יחד עם מאגר העמסה, על ג'ל SDS-PAGE.
הריצו את הדגימות בתחילה במתח של 100 וולט למשך 30 דקות, ולאחר מכן במתח של 120 וולט במשך 50 דקות במאגר טריס-גליצין. לאחר מכן, צבעו בכחול קומאסי כדי להמחיש ביטוי חלבון. לטיהור חלבונים, צנטריפוגו את תמצית החלבון הגולמי ב 38, 000 גרם במשך 40 דקות בארבע מעלות צלזיוס, ולסנן את supernatant דרך מסנן מזרק 0.22 מיקרומטר.
טען את הסופרנאטנט המסונן על עמודת הניקל המאוזנת מראש במאגר הקשירה. לשטוף את העמוד עם חיץ מחייב ו elute את החלבון עם שיפוע imidazole מוכן, איסוף 12 שברים של מיליליטר אחד כל אחד. יש להוסיף גליצרול לריכוז סופי של 50% לחלבון המרוכז והמאגר המוחלף לאחסון.
הביטוי של TRF2 ב-Escherichia coli הודגם בהצלחה, כפי שמוצג על ידי SDS-PAGE, כאשר פסים נפרדים המתאימים ל-TRF2 הופיעו לפני ואחרי האינדוקציה.
