הקמה והדבקה של תרביות צילום פינסטר חוץ גופיות עם נמטודות עץ אורן

כדי להתחיל, שטפו זרעי Pinus pinaster מאושרים במי ברז זורמים כדי להסיר לכלוך גדול יותר. לאחר מכן שטפו את הלכלוך העדין באמצעות תמיסת חומרי ניקוי נפוצה עם תסיסה נמרצת. במכסה מנוע זורם, מוסיפים תמיסת אקונומיקה מסחרית עד שהזרעים מכוסים ומערבבים במרץ במשך 15 דקות.

לאחר השלכת תמיסת האקונומיקה, שטפו את הזרעים שלוש פעמים במי ברז מעוקרים. עכשיו לטבול את הזרעים 80% אתנול במשך 15 דקות עם תסיסה נמרצת. לאחר השלכת אתנול, לשטוף את הזרעים שלוש פעמים עם מים מעוקרים ultrapure .

לנביטת אורנים, שברו את מעילי הזרעים המעוקרים באמצעות מחרטה מכנית סטרילית. בודדו את הצנוברים והניחו אותם בכלי סגור עם נייר פילטר רטוב מעוקר ללחות למשך הלילה. למחרת, רבדו את הצנוברים הלחים בארבע מעלות צלזיוס במשך שבעה ימים כדי לשבור את התרדמה ולסנכרן את הנביטה.

לאחר מכן לשמור על הצנוברים בחושך ב 25 מעלות צלזיוס עד הנביטה. מעבירים את האורנים הנבטים האספטיים לתנאי סביבה מבוקרים למשך שבועיים, או עד שהגבעול הראשי מתחיל להתפתח. לאחר שבועיים, חותכים את החלק האווירי של השתיל מעל השורש עם אזמל ומעבירים אותו למדיום תרבות מעוקר של שנק הילדברנדט.

לשמור על התרבות בתנאים סביבתיים מבוקרים כפי שתואר קודם לכן. תת-תרבות מעת לעת על ידי חיתוך הרקמה הקשוחה בבסיס הנבטה באזמל סטרילי. מעבירים את אשכול הצילומים באמצעות פינצטה סטרילית למדיום תרבית כפל טרי.

לאחר מכן, חסנו את המיקרושוטים למדיום התרבית Schenk Hildebrandt המכיל שלושה גרם לליטר פחם פעיל להתארכות גזע מיקרו. כעת הניחו את הנבטים המוארכים במדיום התרבית של שנק הילדברנדט ללא פיטוהורמונים או פחם פעיל. הוסף 100 עד 150 נמטודות עץ אורן מעוקרות בשלב החיים המעורבים בתחתית המיקרושוט.

לשמור על התרבות בתנאים סביבתיים מבוקרים כפי שתואר קודם לכן. ההקמה והזיהום של נבטי אורן במבחנה הראו את הופעתם של מחטים כלורוטיות בתוך חודש של תרבות משותפת עם נמטודות עץ אורן.