כדי להתחיל, להטמיע את הזחל המהונדס באגרוז נמס נמוך בצלחת microwell תחתית זכוכית. הניחו את המנה על השלב המיקרוסקופי במיקרוסקופ ההפוך. מקם ומקד את האזור הרצוי לאבלציה במרכז שדה הראייה.
בחרו בקביעות Z-stack כדי להציג תמונה לכל רוחב האופרקל. דמיינו את אזור העניין של האופרקל לפני אבלציה. לאחר מכן, צייר אזור מעגלי בקוטר של 25 מיקרומטר במישור דו-ממדי נבחר.
התמקד באופרקל באמצעות אזור העניין, או כלי החזר ההשקעה. כדי לבצע את האבלציה, יש להפעיל עוצמת אבלציה שנמדדה ללא מטרה ל-450 מילי-וואט למשך זמן של 10 שניות. חשוף את האזור שנבחר ללייזר בעל שני פוטונים.
לאחר אבלציה, אשר את האבלציה מבחינה מבנית על ידי הדמיה של אותה מחסנית Z עם אותן הגדרות, כפי שנעשה לפני האבלציה. בעזרת מלקחיים או מחט דיסקציה, הוציאו את הזחלים בזהירות מהאגרוז הנמס נמוך. ראשית, להסיר שכבה של agarose המכסה את הזחלים.
שנית, הסר את האגרוז במגע ישיר עם הזחלים. מחזירים את הזחלים לצלחת עם מצע E3 טהור. ארבע או שש שעות לאחר הנגע, צלם מחדש את אזור האופרקל באמצעות זחלים משובצים באגרוז באותן הגדרות על אותו מיקרוסקופ.
לאחר עיבוד התמונות בפיג'י, כמת תאים עם תווית גרעינית, או על ידי מדידת האזור, במקרה שהתאים חופפים. לכימות האזור, צרו מסיכה המקיפה את המקרופאגים. השתמש בכלי תמונה, התאמה, סף, צור החזר השקעה ונתח את החלקיקים.
לאחר מכן, מדדו את השטח. צור גרפים המשרטטים את תוצאות המדידה באמצעות תוכנה מתאימה. הצטברות משמעותית של מקרופאגים באזור האופרקל האבלאטי התגלתה שש שעות לאחר אבלציה בזחלים של שישה ימים לאחר ההפריה.
בזחלים ארבעה ימים לאחר ההפריה, מספר המקרופאגים גדל ארבע שעות לאחר הנגע. מספר המקרופאגים ושטחם גדלו בארבע שעות לאחר הנגע בהשוואה למצב ללא אבלאט.
