כדי להתחיל, ליצור מכלולים מסומנים וירוס באמצעות אורגנואידים ספציפיים לגורל. כדי להכין ריאגנטים לטיפול מקדים בפני MEA, יש להמיס 0.5 גרם של אבקת אנזים דטרגנט ב-50 מיליליטר מים שעברו דה-יוניזציה. מערבבים היטב את התערובת עד להמסה מלאה של האבקה ומעקרים את התמיסה באמצעות מסנן ואקום עליון של צינור סטרילי בתוך ארון הבטיחות הביולוגית.
דללו 500 מיקרוליטר של תמיסת מלאי 7% פוליאתילן, או PEI, עם 49.5 מיליליטר של חיץ בוראט 1X כדי להכין תמיסת PEI של 0.07%. כדי לעקר את התמיסה, סנן אותה דרך יחידת סינון של 0.22 מיקרומטר בתוך ארון הבטיחות הביולוגית. לאחר מכן, יש לפזר מיליליטר אחד מתמיסת אנזים הדטרגנט 1% לכל באר של צלחת MEA סטרילית ולדגור עליה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים.
לאחר מכן להסיר את תמיסת אנזים דטרגנט מכל באר ולשטוף את הבארות חמש פעמים עם 1.5 מיליליטר של מים סטריליים deionized לכל באר. מלאו כל באר במיליליטר אחד של מדיה תרבותית להתניה מוקדמת. החזירו את לוחות MEA לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני למשך יומיים.
לאחר הדגירה, הסר את אמצעי התרבית מהבארות והוסף 50 מיקרוליטר של תמיסת 0.07% PEI כדי לכסות את אלקטרודות MEA לציפוי ראשוני. דוגרים על הצלחת בחום של 37 מעלות צלזיוס למשך שעה. לאחר מכן שאפו את פתרון PEI לחלוטין מכל באר.
לשטוף כל באר שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של מים סטריליים deionized. לאחר שאיפת המים, יבשו את הצלחות בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות בארון הבטיחות הביולוגית כשהמכסה פתוח. כעת מכסים את שטח האלקטרודות בכל באר ב-50 מיקרוליטר בנפח אחד עד 20 לנפח מטריצת קרום מרתף מדוללת באמצעי תרבית לציפוי משני.
החזירו את לוחות MEA לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. למחרת, שואפים את פתרון מטריצה מדולל, משאיר שכבה דקה על פני השטח. אם נוצרת שכבה עבה, רססו את אזור המגע של האלקטרודה בכוח עם אמצעי תרבית באמצעות קצה פיפטה P1000.
לאחר מכן באמצעות קצה P1000 עם חתך רחב, לאסוף מכלול מן הכלים בזהירות להניח אותו על גבי האלקטרודות בבאר תוך העברת מדיה קטנה ככל האפשר. מניחים את הצלחת תחת מיקרוסקופ דיסקציה במכסה מנוע זרימה למינרית ובעזרת קצה סטרילי P 20, דוחפים בזהירות את המכלול למיקום הרצוי. השתמש בקצה P 20 כדי להסיר נוזלים עודפים סביב המכלול.
לאחר הדגירה, להסיר את הצלחת מן האינקובטור. לאחר מכן מתבוננים תחת מיקרוסקופ דיסקציה, מניחים שתיים עד שלוש טיפות קטנות של מטריצת קרום מרתף אחת עד 50 מדוללת במדיה תרבותית על גבי המכלולים, ומחזירים את הצלחת לאינקובטור למשך 30 דקות נוספות. לאחר מכן, הוסיפו בזהירות שלוש טיפות של מצע תרבית קרוב למכלולים באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה.
למחרת, בדקו אם המכלולים התיישבו והתייצבו תחת מיקרוסקופ דיסקציה. הוסף 750 מיקרוליטר של מדיה תרבותית כדי להביא את הנפח הכולל למיליליטר אחד לכל באר ולהשאיר את הצלחת ללא הפרעה לפחות יומיים באינקובטור. בכל שבוע, הסר בזהירות 500 מיקרוליטר של מדיה תרבותית מכל באר, והכנס 700 מיקרוליטר טריים של מדיה בסיסית נוירופיזיולוגית לכל באר.
משך פיצוץ רשת מוגבר נצפה ביום 92 בהשוואה ליום 78, ככל הנראה עקב הבשלת נוירונים. הפעילות הסלולרית והרשת דעכה אט אט ביום ה-125.
