כדי להתחיל, לדגור על תמיסת טריגליצין ב 60 מעלות צלזיוס. מוציאים מהמקפיא שלוש שפופרות רצועות של כדורי RPA. טפחו בעדינות על צינורות הפסים על ספסל המעבדה כדי לעקור את הכדורים הלבנים.
מעבירים את כל שלושת הכדוריות לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר A.Pipette 25 מיקרוליטר מים נטולי נוקלאז כדי לשטוף את כל אבקת RPA שנותרה בצינורות הרצועה. מעבירים את תמיסת השטיפה לצינור מיקרוצנטריפוגה חדש של 1.5 מיליליטר B.לאחר מכן, מוסיפים 10 מיקרוליטר של תמיסת טריגליצין מולרית 0.57 ו-10 מיקרוליטר תערובת פריימר לצינור התערובת הראשי B.לאחר ערבול וסיבוב הצינור, מניחים אותו על קרח. לאחר מכן, הוסף 28.4 מיקרוליטר של חיץ RPA חמש פעמים לצינור תערובת האב B.Mix ביסודיות על ידי הקשה חזקה או ניעור מספר פעמים.
מעבירים כדורים שנאספו בצינור A לתוך צינור המיקס הראשי B והופכים את הצינור או מקישים על תחתית הצינור עם האצבע מספר פעמים כדי לערבב. שימו לב אם הפתרון נראה הומוגני ומונופאזי. מניחים את הצינור על קרח.
לאחר מכן הוסף 0.71 מיקרוליטר של שעתוק הפוך ו 2.84 מיקרוליטר RNase H לצינור תערובת האב. הקש בעדינות או הפוך את צינור התערובת הראשי למעלה ולמטה פעמים רבות. סובבו בקצרה את הצינור לפני שתניחו אותו על קרח.
עכשיו, aliquot 8.4 מיקרוליטר של פתרון תערובת האב 10 מראש מקורר 1.5 צינורות ומניחים את הצינורות על קרח. לאחר aliquoting, מניחים את הצינורות במדף מתכת שקוע בחנקן נוזלי כדי להכין אותם לליופיליזציה. במייבש ההקפאה, בדקו את טמפרטורת הקולט והמדף.
כעת, כסו צינורות פתוחים במדף המתכת בגיליון נייר לבן לניקוי. הניחו את מתלה המתכת יחד עם הצינורות הפתוחים במדף מייבש ההקפאה וסגרו את דלת המדף. לאחר מכן, בחר את התוכנית הרצויה ולחץ על התחל.
לאחר 30 דקות של שלב הייבוש המשני, לחץ על עצור. שחרר את הלחץ על ידי פתיחת שסתום שחרור הוואקום. לאחר הסרת המדף מהמדף, יש לסגור את הצינורות מיד.
