טיפול בעקת חום של שתילי ארבידופסיס והכנת סוכרוז הדרגתי ליצירת פרופיל פוליזום ומיצוי RNA

כדי להתחיל, באמצעות טפטפת, צלחת 250 זרעי Arabidopsis עבור כל קבוצה של תנאים על נייר סינון מונח על צלחת אגר Murashige ו Skoog Basal Media ללא סוכרוז, בתוספת 1.2% phyto אגר. עטפו את הצלחת ברדיד אלומיניום כדי לחסום את האור והניחו אותה באינקובטור בארבע מעלות צלזיוס למשך יומיים כדי לגרום לוורנליזציה. לאחר יומיים, להסיר את נייר הכסף ולהעביר את הזרעים vernalized לתא צמיחה.

תנו לצמחים לגדול במשך חמישה ימים. לאחר מכן, לאטום את הצלחת המכילה שתילים בני חמישה ימים עם סרט דבק עמיד למים. מניחים את הצלחת באמבט מים של 40 מעלות צלזיוס למשך שעה לטיפול בלחץ חום.

מיד לאחר הטיפול בחום, מקררים את הצלחת ומעבירים אותה לתא גדילה שנקבע על 22 מעלות צלזיוס למשך שעתיים כדי לאפשר התאוששות. קצרו 250 שתילים שטופלו בחום או שלא טופלו לתוך צינורות מיקרוצנטריפוגות של 1.5 מיליליטר. להקפיא את הדגימות שנאספו מיד בחנקן נוזלי.

הכינו את תמיסת שיפוע הסוכרוז בריכוזים של 12.5%24.4%, 36.3%, 48.1% ו-60%כדי להכין שיפוע צפיפות סוכרוז לא רציף, יש להעמיס תחילה 2.2 מיליליטר של תמיסת 60% סוכרוז בתחתית הצינור. לאחר מכן, הכניסו את הצינור למקפיא של 80 מעלות צלזיוס כדי להקפיא את תמיסת הסוכרוז למצב מוצק. לאחר ההתמצקות, מעמיסים 2.2 מיליליטר מכל אחד מריכוזי הסוכרוז האחרים בסדרה מלמטה למעלה.

יש לאחסן את שיפוע הסוכרוז המוכן בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס עד לשימוש.