כדי להתחיל, לייבש את explant עצם osteochondral שנאסף כבשים בבקבוקון זכוכית 40 מיליליטר המכיל 25 מיליליטר של תמיסת התייבשות. מניחים את הבקבוקונים על גלגל מסתובב למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר הכביסה האחרונה, להחליף את פתרון התייבשות עם 25 מיליליטר של xylene.
הניחו את בקבוקוני הזכוכית על הגלגל המסתובב למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הוסיפו 10% בנזואיל פרוקסיד, 10% דיבוטיל פתלאט ו-450 מיקרוליטר N, N-דימתילאנילין מדולל 1 עד 20 בפרופנול, והניחו את בקבוקון הזכוכית על מינוס 20 מעלות צלזיוס למשך הלילה. כעת, הכניסו את העציץ לתבנית הטבעה בינונית בקופסת פלסטיק.
יוצקים את methylmethacrylate benzoyl peroxide dibutyl phthalate N, N-aniline פתרון לתוך התבנית. אווררו את התבנית בזרימת חנקן למשך חמש דקות. סגרו את הקופסה באופן הרמטי והניחו אותה על ארבע מעלות צלזיוס למשך 48 שעות לצורך פילמור והתקשות MMA.
לאחר יומיים, מוציאים את השרף המכיל את החציל מהתבנית. חתכו את בלוק הפולימתילמתקרילט המכיל את האקספלנט באמצעות מסור יהלום לאורך צירו הארוך כדי ליצור חתך בעובי 1.5 מילימטר ב-3000 סל"ד במהירות של שלושה מילימטרים לדקה. טוחנים את החלק עם נייר סיליקון קרביד עם מספרים עולים.
ציפוי פחמן החלק העבה בסרט פחמן 10 ננומטר. הרכיבו את הקטע על גב אלומיניום. לאחר מכן, צרו גשר בצבע כסף בין החלק העליון של הקטע לבין הספח כדי לאפשר פינוי מטען אלקטרונים לקרקע.
הניחו את הספח על מיקרוסקופ אלקטרונים סורק, או SEM, שלב. סגור את החדר והתחל ואקום. הפעל את קרן האלקטרונים וכוונן את הגדרות ה- SEM כך שיפעלו במצב אלקטרונים מפוזרים לאחור.
קבעו את תקני הרמה האפורה ל-25 עבור פחמן, 225 עבור אלומיניום ו-253 עבור סיליקון. לאחר כיול ה- SEM עם הסטנדרטים, קבל תמונות של הדגימה במצב אלקטרונים מפוזרים לאחור. השתמש בתמונת האלקטרונים המפוזרת לאחור של הדגימה כדי להמיר את רמות האפור לתכולת סידן.
לאחר מכן, התווה את תוכן התפלגות הסידן של התמונה. מקם את החלק על הבמה של מיקרוספקטרומטר ראמאן. כייל את מספר הגל לקבלת דיוק, ויישר את הלייזר לפני המדידה.
כדי לאסוף את ספקטרום הרמאן, השתמש בלייזר 785 ננומטר בהספק של 30 מילי וואט. הגדר את זמן השילוב ל -20 שניות, חזור על הפעולה שלוש פעמים והשתמש בטווח ספקטרלי של 350 עד 1, 800 לסנטימטר עם דירוג של 1, 200 שורות למילימטר. לאחר כיול מערכת הננו-הזחה, מקם את הדגימה במערכת האופטית וזהה את מיקום הננו-הזחה.
לאחר מכן, העבר את הדגימה מתחת להתקן הכניסה. הגדר את עומק הכניסה ל- 900 ננומטר עם מהירות העמסה-פריקה של 40 מילימטרים לדקה והפסקה של 15 שניות בין טעינה לפריקה. הגדר את מקדם הקוסינוס עבור רקמת העצם ל -0.3 והתחל את הננו-הזחה.
