האכלת ננו-חלקיקים Chitosan/dsRNA למחקרים פונקציונליים של גנים הפוכים בזחלי תולעי משי

כדי להתחיל, הכינו את חלקיקי הרנ"א הדו-גדילי של צ'יטוזן להזנת זחלי תולעי המשי. לאחר מכן בחרו זחלי תולעי משי חמישיות מותכות טריות בגודל דומה לניסוי ההאכלה. מניחים כל זחל בנפרד לתוך באר של צלחת שש בארות.

מכסים את הצלחת ומרעיבים את הזחלים במשך 24 שעות. לאחר מכן, שטפו עלי תות טריים במים נטולי יונים, וייבשו אותם באמצעות נייר מטבח נקי. חותכים את העלים המיובשים במלואם לסנטימטר אחד על סנטימטר אחד דיסקיות עלים.

יש להמיס את חלקיקי ה-dsRNA של צ'יטוזן במים נטולי נוקלאז בריכוז של 500 ננוגרם למיקרוליטר לפני השימוש. מצפים 10 מיקרוליטר של ננו-חלקיקי dsRNA chitosan, שולטים בננו-חלקיקי chitosan ו-dsRNA עירום בנפרד על פני השטח של כל דיסקת עלי תות. הניחו לתמיסות להתייבש באוויר על דיסקיות העלים בטמפרטורת החדר למשך חמש דקות.

לאחר מכן, הציעו דיסקית עלים אחת מצופה ננו-חלקיקים או dsRNA לכל זחל מדי יום. לאחר שדיסקית העלים המצופה נצרכת במלואה על ידי הזחלים, בכל יום, מספקים עלי תות טריים. ביום השישי, הניחו את הזחלים על קרח עד שהם חסרי תנועה.

כדי לנתח את הזחלים, חתכו את בית החזה עם מספריים על צלחת פטרי נקייה והשתמשו בפינצטה כדי לשלוף את אמצע המעי. לאחר הסרת התוכן. שטפו את המעיים בצלחת פטרי במים נטולי נוקלאז.

מקפיאים את אמצע המעי בטמפרטורה של מינוס 70 מעלות צלזיוס בצינור של 1.5 מיליליטר. הזנת חלקיקי dsRNA של צ'יטוזן בתולעי משי הביאה לירידה של 79% ברמות התמליל של BmToll9-2 בהשוואה לטיפולי ביקורת. זחלי תולעי משי שטופלו בננו-חלקיקי dsRNA משתיקי BmToll9-2 היו קטנים באופן ניכר מזחלי הביקורת.

הפקעות של הזחלים המושתקים BmToll9-2 היו גם קטנות משמעותית מאלה של קבוצת הביקורת.