אימונוסטיין וספירה אוטומטית של תאי גנגליון רשתית עכבר באמצעות תוכנה מבוססת בינה מלאכותית

לאחר בידוד כל הרשתית מהעכבר, שטפו את הרשתית ב- PBS בתסיסה עדינה במשך חמש דקות. טבלו את הרשתית שטופה במאגר חוסם למשך 30 דקות. לאחר הדגירה, החלף את המאגר החוסם בנוגדן העיקרי BRN3A.

יש לדגור על הרשתית למשך הלילה בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס כדי לאפשר קשירת נוגדנים ספציפיים. למחרת, שטפו את הרשתית שלוש פעמים עם PBS במשך חמש דקות כל אחת לפני הדגירה עם Alexa 594 או Alexa 488 נוגדן משני מצומד נגד ארנב במשך שעתיים כדי לדמיין אנטיגנים מטרה. לאחר שטיפת הרשתית המוכתמת החיסון עם PBS, העבירו אותה בעדינות לשקופית מיקרוסקופ זכוכית.

שטחו את הרשתית כדי למזער קיפול או עיוות. הניחו את הכיסוי על הרשתית המותקנת כדי להבטיח שלא ייווצרו בועות אוויר. הורד את הקוד מהקישור GitHub.

לאחר מכן הורד את הקבצים הדרושים מדיסק הענן ופתח אותם. אתר את Config. קובץ ini ולשנות את התוכן שלו כך שיצביע על נתיב yolov5_cpu.

לאחר מכן לחץ על ממשק משתמש. exe כדי לפתוח את הממשק הגרפי. בדוק אם pmse_plus.

קובץ מודל pt נמצא בספריית הבסיס של כונן C.אם לא, העתק אותו מתיקיית המשקולות של התיקיה yolov5. פתח את התוכנה לספירת תאים. לחץ על Open Image כדי לייבא את התמונה ולאחר מכן לחץ על Run כדי לאפשר לתוכנה לספור את התאים באופן אוטומטי.

תוכנת ספירת התאים האוטומטית זיהתה במדויק 15, 231 תאי גנגליון רשתית במודל עכבר גלאוקומה המושרה N-methyl-D-aspartate, מראה אובדן תאים משמעותי בהשוואה לכ 45, 000 עד 50, 000 RGCs ברשתית רגילה.