כדי להתחיל, הכניסו את רקמות העכבר שחולצו לתוך צינור מטחנת רקמות המכיל 50% מלח קר כקרח ו-50% מתנול. הכנס את המזיק לתוך צינור המטחנה וסובב אותו בעדינות חמש פעמים כדי הומוגניזציה של הרקמה. מיד להעביר את הרקמה הומוגנית לתוך צינור 15 מיליליטר.
הוסף שני מיליליטר מתנול ומיליליטר אחד של הידרוקסילאמין מולארי 0.1 לדגימה הומוגנית. השאירו את התערובת למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. למיצוי רטינואידים, הוסיפו 10 מיליליטר הקסאן להומוגנט וסובבו את הצינור אופקית למשך 10 שניות לפחות.
צנטריפוגה את תערובת ההקסאן הומוגנית במשך שלוש דקות ב 1000 x גרם כדי להפריד את השלבים. בעזרת פיפטה, מעבירים את שכבת ההקסאן לשפופרת זכוכית נפרדת של 15 מיליליטר ומניחים את הדגימה בצנטריפוגת ואקום כדי לאדות לחלוטין את ההקסאן מהדגימה שחולצה. השהה מחדש את הרטינואידים המיובשים בצינור 15 מיליליטר עם 100 מיקרוליטר של הקסאן ומערבולת היטב כדי להבטיח שכל הרטינואידים מומסים.
פיפטה את כל 100 מיקרוליטר של הקסאן לתוך צינור הזכוכית השני מערבלת את הצינור כדי להמיס את רטינואידים. לאחר מכן פיפטה את כל 100 מיקרוליטר של הקסאן לתוך זכוכית אחת אינרטי עבור ניתוח HPLC. הגדר את הפעלת HPLC באמצעות התנאים המתאימים.
זהה פסגות באמצעות זמני שמירה וספקטרום UV עבור כל רטינואיד מעניין בהתבסס על סטנדרטים. באמצעות מערכת הנתונים הכרומטוגרפית, שלב את הפסגות שזוהו והפנה לעקומת התקן החיצונית כדי לכמת את האנליט. עבור כרומטוגרמות של רקמות ביולוגיות, שלב ידנית את הפסגות כדי לקחת בחשבון את השונות בזמני השמירה.
בכרומטוגרמה של עין עכבר הבקרה זוהו 13-cis-retinal, 11-cis-retinal, all-trans-retinal, 11-cis-retinol ו-all-trans-retinol. בכרומטוגרמה של עין העכבר שטופלה בהידרוקסילאמין, זמני השמירה הוגדלו. היו גם איזומרים סינים ואנטי של רטינאלדהידים אלה.
בכרומטוגרמה של רקמת הכבד של עכבר, רטיניל פלמיטט ו all-trans-retinol זוהו כצורות העיקריות של ויטמין A, וכי בדם עכבר הראה שיא trans-retinol. ספקטרום סופג UV אישר את נוכחותם של איזופורמים רטינואידים בפסגות הכרומטוגרמה.
