ניתוח כמותי של מטבוליטים תזונתיים של ויטמין A ברקמות עיניות ולא עיניות באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים

המעבדה שלנו חוקרת שני מובילי ויטמין A קריטיים, STRA6 ו-Rbpr2. חלבונים אלה ממברנות להקל על צריכת ויטמין A בדם לתוך רקמות כגון העין והכבד. באמצעות HPLC אנו יכולים לחקור את התפקודים הפיזיולוגיים של טרנספורטרים אלה על ידי יצירת פרופיל ויטמין A מערכתי בעכברים טרנסגניים.

טכניקה נוספת המשמשת בתחום שלנו היא Surface Plasmon Resonance, SPR אשר בוחנת את זיקות הקישור והקינטיקה של חלבון לטעמו, ויישמנו SPR כדי לחקור את הקישור בין STRA6 או Rbpr2, קומפלקס קשירת רטינול RBP4. אחד האתגרים הנוכחיים של שיטה זו הוא תפוקת הדגימה. שלב אידוי הממס הוא צוואר בקבוק משמעותי בפרוטוקול זה, וחוקרים עתידיים צריכים להתנסות בשיטות ייבוש כגון אידוי ניפוח חנקן, שיש להן תפוקה גדולה בהרבה בהשוואה לאידוי ואקום.

קבענו את תפקידו של Rbpr2 כמסייע חשוב בשמירה על הומאוסטזיס ויטמין A מערכתי באמצעות תפקודו בכבד. ושיבוש ביטוי Rbpr2 בעכברים טרנסגניים הוביל להפרעה משמעותית ברמות ויטמין A בכל הרקמות המערכתיות הנבדקות כפי שכומתו באמצעות HPLC. רוב הפרוטוקולים האחרים בזיהוי ויטמין A מבוסס HPLC משתמשים בשיטות פנים הפוכות ובדרך כלל אינם מאפשרים לאיזומרים רטינואידים להיפתר בנפרד.

פרוטוקול הפנים הרגיל שלנו מאפשר רזולוציה של איזומרים של רטינאלדהיד ורשתית, ומאפשר לנו ליצור פרופיל מפורט של ויטמין A, שהוא קריטי בהתחשב בחשיבות של פוטואיזומריזציה של ויטמין A במפל הפוטוטרנסדוקציה.