עבודה זו נתמכת על ידי מענק מטעם הקרן הלאומית למדע בארה&quot;ב כדי כריסטוף בנינג.

1. ליפידים Extraction <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בגין שאיבת שומן על ידי קצירת 30 מ&quot;ג 4 שבועות בת ארבידופסיס עלים מצמחים הגדלים על אגר הקרושה בינוני או אדמה ולהעביר אותם לתוך צינורות פוליפרופילן 1.5 מ&quot;ל התגובה. עלים טריים ניתן פלאש קפואים בחנקן נוזלי המאוחסן ב -80 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 300 החילוץ μL ממס מורכב מתנול, כלורופורם ו חומצה פורמית (20:10:01, V / v / v) מדגם אחד. Shake במרץ (באמצעות צבע שייקר או דומה) במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 150 μL של חומצה זרחתית M 0.2 (H 3 PO 4), 1 מ כלוריד האשלגן (KCl) ו בקצרה מערבולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 13,000 בטמפרטורת החדר למשך דקה 1. ליפידים מומס בשלב כלורופורם התחתון יהיה הבחין לצלחות TLC. </li></ol> 2. כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC) 15 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להכין צלחות TLC, לצלול סיליקה ג&#39;ל 20cmx20cm מצופה TLC צלחת עם פס טעינה של 30 שניות לתוך M 0.15 אמוניום סולפט ((NH 4) 2 SO 4) פתרון, לאחר השריית למשך 30 שניות, יבש את הצלחת לפחות 2 ימים מיכל מכוסה. במהלך הפעלת סובלימציה של אמוניום משאיר מאחוריו חומצה גופרתית, אשר protonates phosphatidylglycerol הכרחי ההפרדה שלה glycerolipids אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הניסוי, להפעיל TLC צלחות על ידי אפייה בתנור על 120 מעלות צלזיוס במשך 2.5 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הרגעות צלחות מופעל לטמפרטורת החדר, יש להשתמש בעיפרון כדי לצייר קו ישר (1.5 ס&quot;מ משולי הצלחת) על פני הצלחת המקור של chromatogram. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במנדף קטר, לאט לספק 3 X 20 μL של תמצית השומנים בשלב כלורופורם נמוך באמצעות פיפטה 20 μL עם 200 טיפים μL פלסטיק צהוב תחת זרם איטי של N 2. לענין זה, Tubing Tygon מחובר הרגולטור של הטנק N 2. שמרו על המקום קטן יותר מאשר 1 ס&quot;מ קוטר. הצלחת כל יכול להכיל עד 10 דגימות (כאשר לאחר מכן ניתוח GLC מתוכנן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו שומנים הנקודות להתייבש לחלוטין בשכונה קטר, להכין את הממס פיתוח מורכב של אצטון, טולואן, מים (91 מ&quot;ל: 30 מ&quot;ל: 7.5 מ&quot;ל). אם רמת הלחות באוויר הסביבה היא גבוהה יחסית, ההפרדה עשויים להיות מושפעים. במקרה זה מים צריך להיות מופחת לתת (91 מ&quot;ל: 30 מ&quot;ל: 7.0 מ&quot;ל) כדי להשיג את ההפרדה הרצויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 80 מ&quot;ל בפיתוח ממס לתוך TLC סגר פיתוח תא (L: H: W = 27.0: 26.5: 7.0 ס&quot;מ / ס&quot;מ / ס&quot;מ) ומניחים את הצלחת לתוך הטנק עם סוף מדגם כלפי מטה. חותם את הטנק באמצעות מהדק. ממס יהיה לעלות את הצלחת שומנים יופרדו. זמן הפיתוח הוא כ 50 דקות בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר הגיע מול ממס 1 ס&quot;מ מהחלק העליון של הצלחת, להסיר בזהירות את הצלחת מהטנק ויבש לחלוטין למכסה המנוע קטר במשך כ -10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ליפידים מופרדות TLC יכול להיות מוכתם הפיך בקצרה עם יוד על ניתוח כמותי או מוכתמת באופן בלתי הפיך עם חומצה גופרתית או α-naphthol. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חומצה גופרתית לחריכה: לרסס את הצלחת עם חומצה גופרתית 50% מים בבקבוק זכוכית ספריי בשכונה קטר ואופים בחום של 120 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות (איור 2 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> α-naphthol מכתים עבור glycolipids: לרסס את הצלחת עם 2.4% (w / v) α-naphthol ב -10% (v / v) חומצה גופרתית, 80% (v / v) אתנול ואופים בחום של 120 מעלות צלזיוס במשך 3-5 דקות עד להקות glycolipid מוכתמות ורוד או סגול (תרשים 2B). טיפול יתר יוביל לחריכה של כל השומנים בשל נוכחותם של חומצה גופרתית ב מגיב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכתים יוד: במנדף קטר, במקום את הצלחת לתוך טנק TLC סגור עם גבישי יוד (במגש בתחתית המוביל הרוויה של האווירה עם אדי יוד עד שומנים גלויים). אל תחשוף את צלחת יוד מדי זמן יוד עשוי לשנות קוולנטית חומצות שומן רב בלתי רווי (איור 2C). לחלופין, כדי למנוע חמצון של שומנים, רק נתיבים תקן וביניהם מסלולי מדגם צריך להיות מוכתם באמצעות צמר זכוכית פקוק פיפטה פסטר עם גבישי יוד שדרכו N 2 הוא התפוצץ מעל נתיבי תקן בודדים. </li></ol></li></ol> 3. שומן Acyl Methylester (תהילה) תגובה 16 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסרת כתמים סביב סיליקה מזוהה השומנים מהצלחת TLC בסכין גילוח. לגרד את השומנים המכיל סיליקה ולהעביר את אבקת סיליקה באמצעות משפך לתוך שפופרת זכוכית עם מכסה טפלון (PTFE) מצופה בורג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל 1 N מימן כלורי (HCL) של מתנול anhydrous לטעום כל פיפטה על ידי זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים 100 מ&quot;ל μL 50 מיקרוגרם חומצה pentadecanoic -1 (15:00) באמצעות פיפטה 200 μL לטעום כל כסטנדרט פנימי בעזרת פיפטה 200 μL עם קצה פלסטיק μL 200 צהוב. שמור צינור עם חומצה רק pentadecenoic ב methanolic HCl כביקורת. צינורות זכוכית סגור היטב עם טפלון עטורי כיפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה glהתחת צינורות אמבטיה 80 מעלות צלזיוס מים במשך 25 דקות. צינורות צריך להיות אטום כדי ממס אינו להתאדות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי צינורות יש התקרר, מוסיפים 1 מ&quot;ל נתרן כלוריד 0.9% ואחריו הקסאן מ&quot;ל 1 ו מערבולת במרץ. צנטריפוגה דגימות 1000xg במשך 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב למכסה המנוע קטר, להסיר את שכבת הקסאן / העליון של המדגם עם פיפטה פסטר והנח אותו לתוך צינור חדש זכוכית 13x100 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להתאדות הקסאן תחת זרם איטי של N 2 ללא ייבוש לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את שומן וכתוצאה מכך acyl methylesters s ב הקסאן 60 μL. העברת דגימות autosampler לתוך צלוחיות כובע בחוזקה. דוגמאות ניתן לאחסן 4 ° C לטווח קצר -20 ° C למשך כמה ימים. </li></ol> 4. גז נוזלי כרומטוגרפיה (GLC) 10 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני תחילת GLC, ודא מימן הליום, מיכלי אוויר מלאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקסאן מספיק יש להוסיף את המאגר ממס מיכל הפסולת חייבת להיות ריקה. עבור הפרדה methylesters שומן acyl, לצרף DB-23 טור למכונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום לתוך צלוחיות autosampler. הפעל את התוכנה Chemstation עבור GLC במחשב המערכת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את טמפרטורת כניסת ב 250 ° C עם קצב הזרימה הליום ב 48.6 דקות מ&quot;ל -1 ואת הלחץ על 21.93 psi. יחס הפיצול הוא 30.0: 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טמפרטורת התנור נקבע בתחילה עבור 2 דקות ב 140 מעלות צלזיוס, הועלה ל 160 מעלות בקצב של 25 ° C -1 דקות. ואז להגדיר את הטמפרטורה להגדיל מ 160 ° C עד 250 ° C בשיעור של 8 ° C -1 דקות ולהחזיק ב 250 מעלות צלזיוס במשך 4 דקות לאחר מכן ירידה עד 140 ° C בשיעור של 38 ° C דקות - 1. אחת לרוץ לוקח כ 21 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הטמפרטורה של גלאי יינון הלהבה היא 270 ° C עם קצב זרימת מימן 30.0 מ&quot;ל -1 דקות, קצב זרימת אוויר ב 400 מ&quot;ל ו -1 דקות הליום קצב הזרימה ב 30.0 דקות -1 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את מספר צלוחיות שמות מדגם בטבלה רצף הריצה. הגדר את 10 μL מזרק להזריק 2 מדגם μL לכל בקבוקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר המכשיר מוכן ליזום את רצף הריצה. </li></ol> 5. נציג תוצאות: דוגמאות מכתים בלתי הפיך של TLC מופרד שומנים מן 4 שבועות בת שתילים ארבידופסיס מוצגות באיור 2. שומנים חומצה גופרתית צבעונית (איור 2 א) הם חרוך להופיע כתמים חומים. α-naphthol הוא העדיף כתם glycolipids כגון MGDG, DGDG, SQDG וכו Glycolipids מוכתם α-naphthol לשאת צבע ורוד סגול ואילו שומנים הקוטב השני כתם צהוב (איור 2B). מכתים יוד הוא הפיך והוא נותן שומנים צבע צהבהב זה ייעלם עם הזמן קצר כמו יוד מתאדה (איור 2C). יוד בקצרה שומנים מוכתם יכולה להיות נתונה ניתוח GLC למרות שומנים בלא כתם עדיפים להפחית לשבור של שומנים. אם נעשה בהצלחה, אותות ייחודיים המייצגים שונה שומן acyl methylester יקויימו לאחר GLC (איור 3). Methylester acyl שומן עם שרשרת פחמן קצרות יותר קשרים כפולים יש פחות זמן השמירה קצר באמצעות DB-23 טור. שומן פרופיל acyl methylester הוא כלי רגיש לזיהוי מוטציות עם הרכב השומנים שונה. באיור 4, MGDG18: 3 יחס חומצת שומן טוחנת הוא ירד מוטציה tgd4-1 לעומת סוג בר 18. על ידי חלוקת שומות של שומן acyl methylester עבור בכיתה אחת השומנים עם שומות של כל המעמדות שומנים בדם, יחס טוחנת של כל השומנים מחושבים. לדוגמה, כדי לחשב את יחס טוחנת של MGDG: (MGDG)% mol = Σ [FAMEs (MGDG)] / Σ [FAMEs (סה&quot;כ)] x100% יחס טוחנת וכתוצאה מכך של כל שיעור השומנים מסוג שני בר מוטציה ניתן להשוות. למשל, מוטציה tgd4-1 גדל כמויות היחסי של MGDG ו PG אבל ירד סכומי DGDG ו-PE (איור 5) 18. <img src="/files/ftp_upload/2518/2518fig1.jpg" alt="איור 1" /> 1. תרשים זרימה תרשים של ניתוח השומנים הקוטב באמצעות שתילים ארבידופסיס. שומנים סך המחולצים 4 שבועות בת שתילים ארבידופסיס ו מופרדים על ידי TLC. שומנים מופרדות ניתן מגורד מהצלחת TLC עבור transesterification ואחריו ניתוח GLC. <img src="/files/ftp_upload/2518/2518fig2.jpg" alt="איור 2" /> איור 2. ההפרדה של שומנים על צלחות TLC. תמציות של ליפידים של 35 מ&quot;ג (משקל טרי) שתילים סוג בר מופרדות TLC ומוכתמת על ידי חומצה גופריתית (A), α-naphthol (ב) או אדי יוד (C). שלוש חוזר מוצגים כל שיטה מכתים. DGDG, digalactosyldiacylglycerol;, MGDG monogalactosyldiacylglycerol: PC, phosphatidylcholine; PE, phosphatidylethanolamine: PG, phosphatidylglyceרול; PI, phosphatidylinositol; SQDG, sulfoquinovosyldiacylglycerol. <img src="/files/ftp_upload/2518/2518fig3.jpg" alt="איור 3" /> איור 3. ניתוח GLC Methylesters של חומצות שומן (FAMEs) נגזר MGDG מסוג בטבע. FAMEs מופרדים על עמודה מ 30 נימי זוהה על ידי יינון להבה. Pentadecanoic חומצה (15:00) משמש כסטנדרט פנימי. <img src="/files/ftp_upload/2518/2518fig4.jpg" alt="איור 4" /> איור 4. פרופיל חומצת שומן של MGDG בסוג בר col2 (עמודות לבן) ואת tgd4-1 מוטציה (עמודות שחורות). חומצות שומן מוצגים מספר פחמנים ואחריו מספר קשרים כפולים. שלוש חזרות הם ממוצעים וסטיות תקן מוצגים. <img src="/files/ftp_upload/2518/2518fig5.jpg" alt="איור 5" /> איור 5. הרכב שומנים פולאר מסוג בר col2 (עמודות לבן) ואת tgd4-1 מוטציה (עמודות שחורות). שלוש חזרות הם ממוצעים וסטיות תקן מוצגים על ידי בר שגיאה.

<ol>
	<li>Ajjawi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+reverse+genetics+in+Arabidopsis:+case+studies+from+the+Chloroplast+2010+Project.">Large-scale reverse genetics in Arabidopsis: case studies from the Chloroplast 2010 Project.</a> Plant Physiol. 152, 529-529 (2010).</li><li>Andersson, M. X., Kjellberg, J. M., Sandelius, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+involvement+of+cytosolic+lipases+in+converting+phosphatidyl+choline+to+substrate+for+galactolipid+synthesis+in+the+chloroplast+envelope.">The involvement of cytosolic lipases in converting phosphatidyl choline to substrate for galactolipid synthesis in the chloroplast envelope.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1684, 46-46 (2004).</li><li>Awai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidic+acid-binding+protein+of+the+chloroplast+inner+envelope+membrane+involved+in+lipid+trafficking.">A phosphatidic acid-binding protein of the chloroplast inner envelope membrane involved in lipid trafficking.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, e10817-e10817 (2006).</li><li>Benning, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+lipid+transport+involved+in+organelle+biogenesis+in+plant+cells.">Mechanisms of lipid transport involved in organelle biogenesis in plant cells.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 25, 71-71 (2009).</li><li>Browse, J., McCourt, P. J., Somerville, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+composition+of+leaf+lipids+determined+after+combined+digestion+and+fatty+acid+methyl+ester+formation+from+fresh+tissue.">Fatty acid composition of leaf lipids determined after combined digestion and fatty acid methyl ester formation from fresh tissue.</a> Anal. Biochem. 152, 141-141 (1986).</li><li>Dormann, P., Balbo, I., Benning, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+galactolipid+biosynthesis+and+lipid+trafficking+mediated+by+DGD1.">Arabidopsis galactolipid biosynthesis and lipid trafficking mediated by DGD1.</a> Science. 284, 2181-2181 (1999).</li><li>Guskov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyanobacterial+photosystem+II+at+2.9-A+resolution+and+the+role+of+quinones,+lipids,+channels+and+chloride.">Cyanobacterial photosystem II at 2.9-A resolution and the role of quinones, lipids, channels and chloride.</a> 16, 334-334 (2009).</li><li>Hartel, H., Dormann, P., Benning, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DGD1-independent+biosynthesis+of+extraplastidic+galactolipids+after+phosphate+deprivation+in+Arabidopsis.">DGD1-independent biosynthesis of extraplastidic galactolipids after phosphate deprivation in Arabidopsis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97, 10649-10649 (2000).</li><li>James, A. T., MARTIN, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas-liquid+partition+chromatography;+the+separation+and+micro-estimation+of+volatile+fatty+acids+from+formic+acid+to+dodecanoic+acid.">Gas-liquid partition chromatography; the separation and micro-estimation of volatile fatty acids from formic acid to dodecanoic acid.</a> Biochem. J. 50, 679-679 (1952).</li><li>Jordan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+structure+of+cyanobacterial+photosystem+I+at+2.5+A+resolution.">Three-dimensional structure of cyanobacterial photosystem I at 2.5 A resolution.</a> Nature. 411, 909-909 (2001).</li><li>Kobayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type-B+monogalactosyldiacylglycerol+synthases+are+involved+in+phosphate+starvation-induced+lipid+remodeling,+and+are+crucial+for+low-phosphate+adaptation.">Type-B monogalactosyldiacylglycerol synthases are involved in phosphate starvation-induced lipid remodeling, and are crucial for low-phosphate adaptation.</a> Plant J. 57, 322-322 (2009).</li><li>Lu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+small+ATPase+protein+of+Arabidopsis,+TGD3,+involved+in+chloroplast+lipid+import.">A small ATPase protein of Arabidopsis, TGD3, involved in chloroplast lipid import.</a> J. Biol. Chem. 282, 35945-35945 (2007).</li><li>Ohlrogge, J., Browse, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+biosynthesis.">Lipid biosynthesis.</a> Plant Cell. 7, 957-957 (1995).</li><li>Stahl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin-layer+chromatography;+methods,+influencing+factors+and+an+example+of+its+use.">Thin-layer chromatography; methods, influencing factors and an example of its use.</a> Pharmazie. 11, 633-633 (1956).</li><li>Stoffel, W., INSULL, W., AHRENS, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gas-liquid+chromatography+of+highly+unsaturated+fatty+acid+methyl+esters.">Gas-liquid chromatography of highly unsaturated fatty acid methyl esters.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 99, 238-238 (1958).</li><li>Welti, R., Wang, X., Williams, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospray+ionization+tandem+mass+spectrometry+scan+modes+for+plant+chloroplast+lipids.">Electrospray ionization tandem mass spectrometry scan modes for plant chloroplast lipids.</a> Anal. Biochem. 314, 149-149 (2003).</li><li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+trafficking+between+the+endoplasmic+reticulum+and+the+plastid+in+Arabidopsis+requires+the+extraplastidic+TGD4+protein.">Lipid trafficking between the endoplasmic reticulum and the plastid in Arabidopsis requires the extraplastidic TGD4 protein.</a> Plant Cell. 20, 2190-2190 (2008).</li><li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutation+of+the+TGD1+chloroplast+envelope+protein+affects+phosphatidate+metabolism+in+Arabidopsis.">Mutation of the TGD1 chloroplast envelope protein affects phosphatidate metabolism in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 17, 3094-3094 (2005).</li><li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+permease-like+protein+involved+in+ER+to+thylakoid+lipid+transfer+in+Arabidopsis.">A permease-like protein involved in ER to thylakoid lipid transfer in Arabidopsis.</a> EMBO J. 22, 2370-2370 (2003).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

TLC יחד עם GLC מספק כלי חזק ומהיר עבור ניתוח כמותי של שומנים קוטביים בצמחים. שינויים קטנים בהרכב השומנים ניתן לזהות, ולכן בשיטה זו נעשה שימוש להקרנה בקנה מידה גדול של מוטנטים לקויי הקוטב מסלולים מטבוליים השומנים 1,20. שיטה זו היא גם בשימוש נרחב עבור פעילויות ניטור של אנזימים ניצול שומנים קוטבי כמו המצע. 2,6,7 מלבד עלים, הרכב השומנים של רקמות הצמח אחרים כמו שורשים וזרעים או שברים subcellular כגון כלורופלסטים ואת המיטוכונדריה יכול להיות גם נקבע באותו אופן. המערכת ממיס (אצטון, טולואן, מים), המשמש כאן הוא מותאם להפרדת glycolipids ו פוספוליפידים בצמחים. עם זאת, tgd1, 2,3,4 ו מוטנטים כלורופלסטים מבודדים, TGDG פועל יחד עם PE בעוד tetragalactosyldiacylglycerol רץ עם מחשב. במקרה זה מערכת ממס עם חומצה כלורופורם, מתנול אצטית ומים (85: 20: 10: 4, v / v / v / v) משמש 13. לפעמים דו מימדי TLC באמצעות שתי מערכות שונות ממס מבוצע על glycolipids נפרד נוסף פוספוליפידים 19. בנוסף, רקמות הצמח יכול להיות כפופים ישירות התגובה תהילה ואחריו GLC כדי לקבוע את פרופיל הכולל חומצת שומן ללא הפרדה ראשונית על TLC 5. לצד TLC-GLC הפגינו מערכת, שיטה נוספת המשמשת פרופיל השומנים מבוסס על יינון ישיר מסה electrospray טנדם ספקטרומטריית 17. בשיטה זו ההפרדה chromatographic ראשוני של שומנים לחלץ את מושמט. עם זאת, שיטה זו דורשת ציוד יקר וכוח אדם מנוסה, מה שהופך אותו פחות שימושי עבור ניתוחים שגרתי במעבדה או להקרנה מוטציה.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>&alpha;-naphthol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>N1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methanolic HCL 3N</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>33050-U</td>
<td>Dilute to 1N by methanol</td>
</tr>
<tr>
<td>Si250-PA TLC plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>J.T.Baker</td>
<td>7003-04</td>
<td>With pre-absorbent </td>
</tr>
<tr>
<td>TLC chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>Z266000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Screw cap tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>53283-800</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scew caps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sun Sri</td>
<td>13-425</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PTFE disk</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sun Sri</td>
<td>200 608</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GLC system</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hewlett Packard</td>
<td>HP6890</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DB-23 column</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>J&amp;W Scientific</td>
<td>122-2332</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GLC vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sun Sri</td>
<td>500 132</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Caps of GLC vials</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sun Sri</td>
<td>201 828</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chemstation software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Agilent</td>
<td>G2070AA</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

arabidopsis thaliana polar glycerolipid profiling by thin layer chromatography (tlc) coupled with gas-liquid chromatography (glc)

ביולוגית ממברנות תאים נפרדים מהסביבה. מתא יחיד צמחים ובעלי חיים תאיים, glycerolipids, כגון phosphatidylcholine או phosphatidylethanolamine, bilayer טופס ממברנות אשר ישמש הן גבולות וממשקים לחילופי כימית בין התאים וסביבתם. שלא כמו בעלי חיים, בתאי צמח יש אברון מיוחד הפוטוסינתזה, הכלורופלסט. מערכת קרום המורכב של הכלורופלסט מכיל glycerolipids ייחודי, כלומר glycolipids חסר זרחן: monogalactosyldiacylglycerol (MGDG), digalactosyldiacylglycerol (DGDG), sulfoquinovosyldiacylglycerol (SQDG) 4. התפקידים של שומנים אלה הם מעבר מבניים פשוט. Glycolipids אלה glycerolipids אחרים נמצאו מבנים גבישיים של photosystem I ו-II המעידים על מעורבות של glycerolipids בפוטוסינתזה 8,11. במהלך רעב פוספט, DGDG מועבר ממברנות extraplastidic כדי לפצות על אובדן פוספוליפידים 9,12. רוב הידע שלנו על ביוסינתזה והתפקוד של שומנים אלה כבר נגזר משילוב של מחקרים גנטיים ביוכימיים עם 14 thaliana ארבידופסיס. במהלך מחקרים אלו, הליך פשוט לניתוח של שומנים קוטביים כבר חיוני ההקרנה וניתוח של מוטנטים שומנים יפורטו בפירוט. תמצית השומנים עלה מופרד לראשונה על ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC) ו glycerolipids מוכתמות הפיך עם אדי יוד. שומנים בודדים מגורד מהצלחת TLC המרה methylesters acyl שומן (FAMEs), אשר מנותחות על ידי גז כרומטוגרפיה נוזלית, יחד עם גילוי אש יינון (FID-GLC) (איור 1). שיטה זו הוכחה להיות כלי אמין להקרנה מוטציה. לדוגמה, tgd1, 2,3,4 endoplasmic reticulum-to-plastid סחר מוטנטים השומנים התגלו על בסיס הצטברות של galactoglycerolipid חריג: trigalactosyldiacylglycerol (TGDG) וירידה בשיעור היחסי של 18:03 (פחמנים: כפול אג&quot;ח) קבוצות acyl שומן שומנים קרום 3,13,18,20. שיטה זו היא גם רלוונטי לקביעת פעילות אנזימטית של חלבונים באמצעות שומנים כמו המצע 6.

Watch this Scientific Journal Video about Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling by Thin Layer Chromatography TLC Coupled with Gas-Liquid Chromatography GLC at JoVE.com

Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling by Thin Layer Chromatography TLC Coupled with Gas-Liquid Chromatography GLC

הרכב תמציות השומנים הקוטב הרכב חומצות שומן של glycerolipids הפרט נקבעים ניסוי פשוט חזקים פרופיל השומנים. לענין זה, glycerolipids מבודדים על ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה נתונה transmethylation של קבוצות acyl שלהם. Methylesters acyl שומן הם לכמת ידי כרומטוגרפיה גז נוזלי.

Thaliana ארבידופסיס פולאר Glycerolipid פרופיל ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC) יחד עם כרומטוגרפיה גז נוזלי (GLC)

Biological membranes separate cells from the environment. From a single cell to multicellular plants and animals, glycerolipids, such as ...

arabidopsis-thaliana-polar-glycerolipid-profiling-thin-layer

Research

JoVE Journal

Biology

Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling by Thin Layer Chromatography (TLC) Coupled with Gas-Liquid Chromatography (GLC)

36.4K Views.  Michigan State University. הרכב תמציות השומנים הקוטב הרכב חומצות שומן של glycerolipids הפרט נקבעים ניסוי פשוט חזקים פרופיל השומנים. לענין זה, glycerolipids מבודדים על ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה נתונה transmethylation של קבוצות acyl שלהם. Methylesters acyl שומן הם לכמת ידי כרומטוגרפיה גז נוזלי.

Video: Arabidopsis thaliana Polar Glycerolipid Profiling by Thin Layer Chromatography TLC Coupled with Gas-Liquid Chromatography GLC

MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass Spectrometry (MALDI-MS) 1,2. The ultra-thin layer method involves the production of a substrate layer of matrix crystals (alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid) on the sample plate, which serves as a seeding ground for subsequent crystallization of a matrix/analyte mixture. Advantages of the ultra-thin layer method over other sample deposition approaches (e.g. dried droplet) are that it provides (i) greater tolerance to impurities such as salts and detergents, (ii) better resolution, and (iii) higher spatial uniformity. This method is especially useful for the accurate mass determination of proteins. The protocol was initially developed and optimized for the analysis of membrane proteins and used to successfully analyze ion channels, metabolite transporters, and receptors, containing between 2 and 12 transmembrane domains 2. Since the original publication, it has also shown to be equally useful for the analysis of soluble proteins. Indeed, we have used it for a large number of proteins having a wide range of properties, including those with molecular masses as high as 380 kDa 3. It is currently our method of choice for the molecular mass analysis of all proteins. The described procedure consistently produces high-quality spectra, and it is sensitive, robust, and easy to implement.

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Mass Spectrometry (MALDI-MS).

MALDI הכנה לדוגמא: שיטת אולטרה שכבה דקה

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

Light mediates an array of developmental and adaptive processes throughout the life cycle of a plant. Plants utilize light-absorbing molecules called photoreceptors to sense and adapt to light. The red/far-red light-absorbing phytochrome photoreceptors have been studied extensively. Phytochromes exist as a family of proteins with distinct and overlapping functions in all higher plant systems in which they have been studied1. Phytochrome-mediated light responses, which range from seed germination through flowering and senescence, are often localized to specific plant tissues or organs2. Despite the discovery and elucidation of individual and redundant phytochrome functions through mutational analyses, conclusive reports on distinct sites of photoperception and the molecular mechanisms of localized pools of phytochromes that mediate spatial-specific phytochrome responses are limited. We designed experiments based on the hypotheses that specific sites of phytochrome photoperception regulate tissue- and organ-specific aspects of photomorphogenesis, and that localized phytochrome pools engage distinct subsets of downstream target genes in cell-to-cell signaling. We developed a biochemical approach to selectively reduce functional phytochromes in an organ- or tissue-specific manner within transgenic plants. Our studies are based on a bipartite enhancer-trap approach that results in transactivation of the expression of a gene under control of the Upstream Activation Sequence (UAS) element by the transcriptional activator GAL43. The biliverdin reductase (BVR) gene under the control of the UAS is silently maintained in the absence of GAL4 transactivation in the UAS-BVR parent4. Genetic crosses between a UAS-BVR transgenic line and a GAL4-GFP enhancer trap line result in specific expression of the BVR gene in cells marked by GFP expression4. BVR accumulation in Arabidopsis plants results in phytochrome chromophore deficiency in planta5-7. Thus, transgenic plants that we have produced exhibit GAL4-dependent activation of the BVR gene, resulting in the biochemical inactivation of phytochrome, as well as GAL4-dependent GFP expression. Photobiological and molecular genetic analyses of BVR transgenic lines are yielding insight into tissue- and organ-specific phytochrome-mediated responses that have been associated with corresponding sites of photoperception4, 7, 8. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) of GFP-positive, enhancer-trap-induced BVR-expressing plant protoplasts coupled with cell-type-specific gene expression profiling through microarray analysis is being used to identify putative downstream target genes involved in mediating spatial-specific phytochrome responses. This research is expanding our understanding of sites of light perception, the mechanisms through which various tissues or organs cooperate in light-regulated plant growth and development, and advancing the molecular dissection of complex phytochrome-mediated cell-to-cell signaling cascades.

Investigating Tissue- and Organ-specific Phytochrome Responses using FACS-assisted Cell-type Specific Expression Profiling in Arabidopsis thaliana

The molecular basis of spatial-specific phytochrome responses is being investigated using transgenic plants that exhibit tissue- and organ-specific phytochrome deficiencies. The isolation of specific cells exhibiting induced phytochrome chromophore depletion by Fluorescence-Activated Cell Sorting followed by microarray analyses is being utilized to identify genes involved in spatial-specific phytochrome responses.

חקירת רקמות ו איברים ספציפיים התגובות Phytochrome באמצעות FACS בסיוע נייד מסוג פרופיל ביטוי ספציפי ארבידופסיס thaliana</em

Light mediates an array of developmental and adaptive processes throughout the life cycle of a plant. Plants utilize light-absorbing molecules called ...

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&beta;-glucuronidase Reporter Gene Expression

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis thaliana, the floral-dip transformation method1-2 has replaced all previous methods because of its simplicity, efficiency, and low cost. Specifically, shoots of young flowering Arabidopsis plants are dipped in a solution of Agrobacterium tumefaciens carrying specific plasmid constructs. After dipping, the plants are returned to normal growth and yield seeds, a small percentage of which are transformed with the foreign gene and can be selected for on medium containing antibiotics. This floral-dip method significantly facilitated Arabidopsis research and contributed greatly to our understanding of plant gene function. In this study, we use the floral-dip method to transform a reporter gene, &beta;-glucuronidase (GUS), under the control of TSO2 promoter. TSO2, coding for the Ribonucleotide Reductase (RNR) small subunit3, is a cell cycle regulated gene essential for dNDP biosynthesis in the S-phase of the cell cycle. Examination of GUS expression in transgenic Arabidopsis seedlings shows that TSO2 is expressed in actively dividing tissues. The reported experimental method and materials can be easily adapted not only for research but also for education at high school and college levels.

Floral-dip Transformation of Arabidopsis thaliana to Examine pTSO2::&amp;#946;-glucuronidase Reporter Gene Expression

This article illustrates the floral-dip method of Agrobacterium tumefaciens -mediated transformation of Arabidopsis thaliana. By introducing a cell-cycle regulated promoter-reporter, pTSO2::&beta;-glucuronidase (GUS), into Arabidopsis, we illustrates how one detects GUS reporter expression in transgenic seedlings.

Floral-לטבול טרנספורמציה של ארבידופסיס thaliana לבדיקת PTSO2: β-glucuronidase Gene Expression Reporter

The ability to introduce foreign genes into an organism is the foundation for modern biology and biotechnology. In the model flowering plant Arabidopsis ...

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a consequence, the isolation of plant embryos at early stages (1 cell to globular stage) is technically challenging due to their relative inaccessibility. Efficient manual dissection at early stages is strongly impaired by the small size of young Arabidopsis seeds and the adhesiveness of the embryo to the surrounding tissues. Here, we describe a method that allows the efficient isolation of young Arabidopsis embryos, yielding up to 40 embryos in 1 hr to 4 hr, depending on the downstream application. Embryos are released into isolation buffer by slightly crushing 250-750 seeds with a plastic pestle in an Eppendorf tube. A glass microcapillary attached to either a standard laboratory pipette (via a rubber tube) or a hydraulically controlled microinjector is used to collect embryos from droplets placed on a multi-well slide on an inverted light microscope. The technical skills required are simple and easily transferable, and the basic setup does not require costly equipment. Collected embryos are suitable for a variety of downstream applications such as RT-PCR, RNA sequencing, DNA methylation analyses, fluorescence in situ hybridization (FISH), immunostaining, and reporter gene assays.

Efficient and Rapid Isolation of Early-stage Embryos from Arabidopsis thaliana Seeds

We report an efficient and simple method to isolate embryos at early stages of development from Arabidopsis thaliana seeds. Up to 40 embryos can be isolated in 1 hr to 4 hr, depending on the downstream application. The procedure is suitable for transcriptome, DNA methylation, reporter gene expression, immunostaining and fluorescence in situ hybridization analyses.

בידוד יעיל ומהיר של עוברים משלבים מוקדמים<em&gt; Thaliana ארבידופסיס</em&gt; זרעים

In flowering plants, the embryo develops within a nourishing tissue - the endosperm - surrounded by the maternal seed integuments (or seed coat). As a ...

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively in the study of secondary cell wall formation. Secondary cell wall deposition occurs after the primary cell wall is laid down, a process carried out exclusively by specialized cells such as those forming vessel and fiber tissues. Most secondary cell walls are composed of cellulose (40&#8211;50%), hemicellulose (25&#8211;30%), and lignin (20&#8211;30%). Several mutations affecting secondary cell wall biosynthesis have been isolated, and the corresponding mutants may or may not exhibit obvious biochemical composition changes or visual phenotypes since these mutations could be masked by compensatory responses. Staining procedures have historically been used to show differences on a cellular basis. These methods are exclusively visual means of analysis; nevertheless their role in rapid and critical analysis is of great importance. Congo red and calcofluor white are stains used to detect polysaccharides, whereas M&#228;ule and phloroglucinol are commonly used to determine differences in lignin, and toluidine blue O is used to differentially stain polysaccharides and lignin. The seemingly simple techniques of sectioning, staining, and imaging can be a challenge for beginners. Starting with sample preparation using the A. thaliana model, this study details the protocols of a variety of staining methodologies that can be easily implemented for observation of cell and tissue organization in secondary cell walls of plants.

Histochemical Staining of Arabidopsis thaliana Secondary Cell Wall Elements

Plant cell wall composition varies between tissue types and can include lignin, cellulose, hemicelluloses, and pectin. Various staining techniques have been developed to visualize differences at the cell-type level. This paper is a compilation of commonly used cell wall staining techniques.

הכתמה histochemical של<em&gt; Thaliana ארבידופסיס</em&gt; תא המשני בוול אלמנטים

Arabidopsis thaliana is a model organism commonly used to understand and manipulate various cellular processes in plants, and it has been used extensively ...

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light conditions, which are preferably variable in quantity and quality so that studies under different setups can be conducted. These requirements are met by climatic chambers featuring light emitting diodes (LED) lights, which can &#8211; in contrast to fluorescent lights &#8211; be set to different wavelengths. LEDs are energy conserving and emit virtually no heat even at light intensities, which often constitutes a problem with other light sources. The presented protocol provides a step-by-step guidance of how to program a climatic chamber equipped with variable LED lights as well as describing several approaches for in depth analysis of growth phenotypes. Depending on the experimental set-up various characteristics of the growing plants can be observed and analyzed. Here we describe how to determine fresh weight, leaf area, photosynthetic activity, and stomatal density. We demonstrate that in order to obtain reliable data and draw valid conclusions it is mandatory to use a sufficient number of individuals for statistical evaluation. Taking too few plants for this kind of analysis results in high statistical errors and consequently in less clear interpretations of the data.

Analysis of Arabidopsis thaliana Growth Behavior in Different Light Qualities

Here, we present a protocol for studying plant growth behavior and especially phenotypes in a reproducible manner. We show how to provide variable and at the same time stable light conditions. Proper analyses depend on sufficient sample numbers and valid statistical evaluations.

ניתוח התנהגות גדילה תודרנית לבנה באיכויות שונות אור

Plant biologists often need to observe the growth behavior of their chosen species. To this end, the plants need constant environmental and stable light ...

Using Microtiter Dish Radiolabeling for Multiple In Vivo Measurements Of Escherichia coli (p)ppGpp Followed by Thin Layer Chromatography

The (p)ppGpp nucleotide functions as a global regulator in bacteria in response to a variety of physical and nutritional stress. It has a rapid onset, in seconds, which leads to accumulation of levels that approach or exceed those of GTP pools. Stress reversal occasions a rapid disappearance of (p)ppGpp, often with a half-life of less than a minute. The presence of (p)ppGpp results in alterations of cellular gene expression and metabolism that counter the damaging effects of stress. Gram-negative and Gram-positive bacteria have different response mechanisms, but both depend on (p)ppGpp concentration. In any event, there is a need to simultaneously monitor many radiolabeled bacterial cultures at time intervals that may vary from 10 seconds to hours during critical stress transition periods. This protocol addresses this technical challenge. The method takes advantage of temperature- and shaker-controlled microtiter dish incubators that allow parallel monitoring of growth (absorbance) and rapid sampling of uniformly phosphate-radiolabeled cultures to resolve and quantitate nucleotide pools by thin-layer chromatography on PEI-cellulose. Small amounts of sample are needed for multiple technical and biological replicates of analyses. Complex growth transitions, such as diauxic growth and rapid (p)ppGpp turnover rates can be quantitatively assessed by this method.

Using Microtiter Dish Radiolabeling for Multiple In Vivo Measurements Of Escherichia coli pppGpp Followed by Thin Layer Chromatography

The growth of radiolabeled bacterial cultures in microtiter dishes facilitates high throughput sampling that allows multiple technical and biological replicate assays of nucleotide pool abundance, including that of (p)ppGpp. The effects of growth transitions provoked by sources of physiological stress as well as recovery from stress can be monitored.

באמצעות Microtiter צלחת Radiolabeling עבור מספר מדידות Vivo של es, coli (p) ppGpp ואחריו כרומטוגרפיה שכבה דקה

The (p)ppGpp nucleotide functions as a global regulator in bacteria in response to a variety of physical and nutritional stress. It has a rapid onset, in ...

חקירה מרחבית-זמנית של דינמיקת ERL1 באמצעות הדמיה קונפוקלית

Image-Based Methods to Study Membrane Trafficking Events in Stomatal Lineage Cells

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane system. This includes the secretory transport of newly synthesized proteins to the cell surface or the outside of the cell, the endocytic transport of extracellular cargoes or plasma membrane components into the cell, and the recycling or shuttling transport of cargoes between the subcellular organelles, etc. Membrane trafficking events are crucial to the development, growth, and environmental adaptation of all eukaryotic cells and, thus, are under stringent regulation. Cell-surface receptor kinases, which perceive ligand signals from the extracellular space, undergo both secretory and endocytic transport. Commonly used approaches to study the membrane trafficking events using a plasma membrane-localized leucine-rich-repeat receptor kinase, ERL1, are described here. The approaches include plant material preparation, pharmacological treatment, and confocal imaging setup. To monitor the spatiotemporal regulation of ERL1, this study describes the co-localization analysis between ERL1 and a multi-vesicular body marker protein, RFP-Ara7, the time series analysis of these two proteins, and the z-stack analysis of ERL1-YFP treated with the membrane trafficking inhibitors brefeldin A and wortmannin.

Author Spotlight: שיטות מבוססות תמונה לחקר אירועי סחר בממברנות בתאי שושלת סטומאטלית  

Several commonly used methods are introduced here to study the membrane trafficking events of a plasma membrane receptor kinase. This manuscript describes detailed protocols including the plant material preparation, pharmacological treatment, and confocal imaging setup.

שיטות מבוססות תמונה לחקר אירועי סחר בממברנות בתאי שושלת סטומאטלית

In eukaryotic cells, membrane components, including proteins and lipids, are spatiotemporally transported to their destination within the endomembrane ...