המחקר הנוכחי נתמך על ידי צ&#39;ארלס ריבר.

<ol>
	<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> JAALAS. 50, 600-613 (2011).</li><li>Diehl, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).</li><li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taming+anxiety+in+laboratory+mice.">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nat. Methods. 7, 825-826 (2010).</li><li>Maurer, B. M., D&#246;ring, D., Scheipl, F., K&#252;chenhoff, H., Erhard, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+gentling+programme+on+the+behaviour+of+laboratory+rats+towards+humans.">Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 111, 329-341 (2008).</li><li>Cloutier, S., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+conditioning+technique+to+reduce+stress+associated+with+repeated+intra-peritoneal+injections+in+laboratory+rats.">Use of a conditioning technique to reduce stress associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 112, 158-173 (2008).</li><li>Romanovsky, A. A., Kulchitsky, V. A., Simons, C. T., Sugimoto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methodology+of+fever+research:+why+are+polyphasic+fevers+often+thought+to+be+biphasic.">Methodology of fever research: why are polyphasic fevers often thought to be biphasic.</a> Am. J. Physiol. 275, 332-338 (1998).</li><li>Turner, P. V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., Brabb, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+equipment+considerations,+vehicle+selection,+and+solute+preparation.">Administration of substances to laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute preparation.</a> JAALAS. 50, 614-627 (2011).</li><li>Lukas, G., Brindle, S. D., Greengard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+route+of+absorption+of+intraperitoneally+administered+compounds.">The route of absorption of intraperitoneally administered compounds.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 178, 562-564 (1971).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Mouse Handbook. , (2009).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> LAT Training Manual. , (2009).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> LATg Training Manual. , (2009).</li><li>Barnett, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Animal Technology. , 440 (2007).</li><li>Baumans, V., Pekow, C. A., Hau, J., Schapiro, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Laboratory Animal Science. 1, 401-446 (2010).</li><li>Bogdanske, J. J., Hubbard-Van Stelle, S., Riley, M. R., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Mouse Procedural Techniques. , (2011).</li><li>Danneman, P., Suckow, M. A., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2000).</li><li>Sharp, P. E., La Regina, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Rat. , (1998).</li></ol>

הכותבים הם עובדי צ&#39;ארלס ריבר.

פרוטוקול זה יש לראות כמבוא לטיפול בבעלי חיים וממשל חומר שנועד להשלים את הידות על אימונים ספקו במתקן של החוקר. אמצעי הריסון שישמש ואת המסלולים של ממשל חומר יש לשקול בעיצוב הניסיון וכאשר המחקר או פרוטוקול ועדת אתיקת הפרוטוקול כתוב. הדרכה בנהלים הקשורים לבעלי חיים היא חיונית להצלחתו של מחקר. כדי לבצע את רוב הניסויים, בעלי חיים חייבים להיות מטופלים על ידי צוות מחקר, וטיפול בבעלי החיים הטוב יותר, פחות לחוץ בעלי החיים 3. הרגיל את בעלי חיים למגע אנושי עדין יכול להפחית את הלחץ ולעשות חי נבדקים צייתנים יותר 4,5. מתח טיפול הוכח להשפיע על כמה סוגים של 6 מחקר וזה אפשרי זה יכול להשפיע גם על אחרים. איפוק של מכרסמים צריך להתבצע בזהירות, אבל טיפול חברה (לא סופיאחיזה עשויה לגרום לפציעה למכרסם ומטפל) וצריכה להיות לכל תקופה הקצרה ביותר המעשית. שיטות ריסון בדרך כלל נבחרו על סמך גודלו של בעל החיים או הגישה בקשה. לדוגמה, טיפול בחולדות בוגרות בעורפו, אם כי ניתן, לעתים קרובות נתקל בהתנגדות חזקה של העכברוש, במיוחד אם המטפל הוא חסר ניסיון. מחזיק עכבר או חולדה ביד יכולה להפוך את הגישה לורידי הזנב קשה ומכשיר איפוק לעתים קרובות בחר לשמור את החיה בשקט ככל האפשר. כאשר חוקרים להתמודד עם בעלי חיים, לעתים קרובות הם מבקשים לנהל את מתחם או ביולוגי למחקר נוסף. המסלול של מתן חומרים יכול להשפיע על קליטה, זמינותו ביולוגית, והתאמת לניסוי מסוים. היכרות עם מסלולים שונים צריכה לספק לחוקרים עם היכולת לניהול החומר שלהם בצורה הטובה ביותר האפשרית עבור המחקר שלהם. לדוגמה, במסלול שמקדם ספיגה מהירה של חומר, כמו ורידים או intraperitoneal, אין להשתמש אם החוקר רוצה לנהל את החומר באופן איטי יותר טווח. הביקורות האחרונות של חלק מהטכניקות האלה ושיקולים לנפח, ציוד, ומומס ניתן למצוא בשני מסמכים של טרנר ואח&#39;. 1,7 בכל פעם שהם חומרים שניתן למכרסמים במעבדה, יש להתחשב בגודל הנכון של ציוד ונפח של חומר (המפורטים בטבלה 1). כיאות ציוד בגודל או בכמויות גדולות עלול לגרום לחוסר נוחות, פציעה או מוות של בעל החיים. באופן כללי, חומרים המנוהלים parenterally הם עקרים, אלא אם מטרות המחקר היינו להפוך את זה בלתי אפשרי (כלומר, מחקרי חיידקים). תרכובות ביולוגיות וצריכות להיות במומס או רכב שתהיה ההשפעה לפחות על החיה. PH פיסיולוגי (7.3 -7.4) הוא מקובל היטב, במיוחד עבור תת עורית, תוך שרירית, וintrapeמסלולי ritoneal. רמות ה-pH ללא פיסיולוגיות בחומרים המנוהלים על ידי נתיבים אלו עלולות לגרום לכאב או נימק וניזק לרקמות. טווחים רחבים של pH נסבלים עם מסלולי intragastric ווריד 7. במכרסמים קטנים, שיקול חשוב נוסף הוא האפשרות של מצמרר אם כמויות גדולות של נוזלים בטמפרטורת חדר מקבלות. אם נוזלים מתבצעים בהזרקה לוריד או intraperitoneally, במיוחד בתמיכה של בעלי חיים חולים, הם צריכים להיות חממו לטמפרטורת גוף (37 מעלות צלזיוס). את המסלולים של ממשל שנדונו בפרוטוקול זה הם אלה ששמשו בדרך כלל בתכניות מחקר רבות, הם פשוטים להורים, ובדרך כלל לא דורש הרדמה. מגוון כמעט אינסופי של מסלולים של ממשל הוא אפשרי, עם זאת, כולל תוך גולגולתי, intrathecal, אפידורל, intratracheal, intraosseous, וintraarticular אבל לתת שם כמה. הדרכה במסלולים מיוחדים אלה של ממשל צריכה להיות בקשה מאנשי WHo יש ניסיון רב עם המסלול ותוצאות טובות. במכרסמים, המסלול אפי משמש בדרך כלל כדי ללמוד חומרים שהוכנסו לריאות דרך &quot;טבעית&quot; יותר; שיטה מהחדרת intratracheal. עכברים וחולדות הם נושמים אף מחייבים את, כך שפיתו אותם לשאוף כמויות קטנות מאוד של נוזל זה לא קשה, גם בבעלי חיים מודעים. מאז רירית האף היא מצוידת היטב בכלי דם, מנהל אפי של כמה חומרים יכול להיות דומה לעירוי לוריד. מסלול זה אינו מומלץ בבעלי חיים עם נזלת, עם זאת, כפי שעלול לפגוע בספיגה. ניסיונות לנהל כמויות גדולות על ידי התוואים אפי עלולים לגרום לקוצר נשימה או בטביעתו של בעל החיים. זריקות תוך שרירית לספק ספיגה מהירה של חומרים. זריקות לשריר יכולות להיות מאתגרות בחולדות ועכברים, בשל גודלם הקטן והשרירים בהתאמה קטנים. הם מבוצעים ברגל האחוריתs. בשל הפוטנציאל לניזק של עצב הירך, femoris הארבעה הראשיים הוא השריר של בחירה. למרות שגם תת עורית ומסלולי intradermal כרוך בעור, יש הבדלים בין הזמינות הביולוגית של חומרים הממוקמים בעור לעומת subcutis. תת עורית ממשל נחשב לעתים קרובות מסלול &quot;תצהיר&quot;, עם ספיגה איטית יותר ממסלולים אחרים, כגון תוך ורידית או intraperitoneal. ממשל intradermal משמש לנפחים קטנים מאוד של חומרים, בדרך כלל חומרי immunostimulatory כגון תערובות אדג&#39;ובנט-אנטיגן. בשני המקרים, את החומרים המנוהלים צריכים להיות של pH הפיזיולוגי ולא מעצבן. לא צריך להתבצע intradermal או תת עורית זריקות בעורף, שכן מדוברים באתר בשימוש נפוץ לריסון המכרסם. עירוי לוריד וintraperitoneal נחשבים לעתים קרובות מקביל במכרסמים. נתיבים תוך ורידים של מינון לספק יותר rספיגת apid של תרכובות, עם זאת, בעוד שממשל intraperitoneal צריך להיחשב שווה בערך לנטילה דרך פה 8. יש להקפיד עם intraperitoneally תרכובות מנוהל כפי שהם עלולים לגרום לכאב אם נאגרו לא תקין. המסלול המשותף של ממשל בולוס תוך ורידים במכרסמים הוא דרך ורידי הזנב. אם עירוי לוריד כרוני של חומר הוא רצוי, השתלה של ורידים או עורקי cannulae צריכה להיחשב. חומרי הזרקה לוריד צריכים להיות מועברים נקי מחיידקים, וצריך להיות מוצגים כדי להיות בטוח כדי לנהל דרך וריד. לדוגמה, חומרים שעלולות לגרום המוליזה, פקק או דלקת כלי דם אינם מתאימים לעירוי לוריד. מסלול gavage intragastric או בעל פה משמש לעתים קרובות לחקות מסלול מינון נפוץ בבני אדם. זה גם מאפשר מינון מדויק של חומרים בהשוואה לנטילה דרך פה באמצעות מזון או מים. זמינות ביולוגית של תרכובותמנוהל באמצעות gavage ישתנה בהתאם למדינה הנמאסת / צום של בעלי החיים, כמו גם מומס או הרכב של המתחם או הביולוגי. מחטי Gavage או האכלה צריכות להיות בגודל המתאים לבעלי החיים בשימוש, ויש לנקות בין חיות, אם מחטים חד פעמיות gavage אינן מעשיות. פציעות שנגרמו על ידי gavage אינן נדירות וכוללות תצהיר של החומר לתוך הריאות או הקרע בקיבה או הוושט. אימון צריך להיות מפוקח על ידי צד מנוסה והתחייב על בעלי חיים מורדמים ראשונה, ואז חיות מורדמות (שיהיה מורדם) לפני gavage בעודם ערים הוא ניסה. ניסיונות gavage ראשונים על חיות ערות צריכים לערב חיות בגודל ממוצע ונפחים קטנים של חומר, כגון מי מלח, שלא יגרמו לפגיעה אם ההליך משתבש. בעלי חיים יש להעריך באופן הדוק לסימני מצוקה, כגון מתנשף, פונים, דימום כחול, או ריור העודף, לאחר gavage ולהרדים במקרה צורך. אם euthanasia נדרש, בעלי החיים צריכים שלאחר מוות כדי לקבוע מדוע הליך gavage נכשל.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מחטים </td><td> שונה </td><td> שונה </td><td> מחטים נמכרות על ידי שני מד ואורך. בדקו גם לפני ביצוע ההזמנה. </td></tr><tr><td> מזרקים </td><td> שונה </td><td> שונה </td><td> תמיד לבחור גודל מתאים להיקף להינתן. </td></tr><tr><td> DecapiCones </td><td> בריינטרי מדעי </td><td> DC-200, מת&quot;ק-120, MDC-200 </td><td> זמין בעכבר ובגדלי חולדה. </td></tr><tr><td> עוצר מכרסם </td><td> הרווארד Apparatus, Braintree Scientific, Plas-Labs, אחרים </td><td></td><td> זמין בפרספקס השקוף, פלסטיק מתכוונן, וגודל לעכברים וחולדות. </td></tr><tr><td> צינור 50 מ&quot;ל חרוטים </td><td> שונה </td><td> &amp; Nbsp; </td><td></td></tr><tr><td> מחטי האכלה </td><td> VWR, פופר ובניו </td><td> שונה </td><td> Fit מד המחט ואורך לבעלי החיים כמתוארים לעיל. שני מחטי האכלה חד פעמיות לשימוש חוזר זמינות. </td></tr></tbody></table>

manual restraint and common compound administration routes in mice and rats

היכולת הבטוחה ויעילה לריסון עכברים וחולדות היא חלק חשוב של מחקר. עבודה בביטחון ובאנושיות עם עכברים וחולדות דורשת מיומנות בסיסית בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בבעלי חיים בבטחה. בשתי ידות, ואיפוק ביד אחת, עם חפצי ריסון תוכננו במיוחד יומחש. לעתים קרובות, חלק אחר של המחקר או בדיקה של השימוש בבעלי חיים הוא הממשל היעיל של תרכובות לעכברים וחולדות. למרות שיש מספר רב של מסלולים אפשריים ניהול (מוגבל רק על ידי הגודל והאיברים של בעלי החיים), רובם לא השתמשו באופן קבוע במחקר. וידאו זה מדגים כמה מהמסלולים הנפוצים יותר, לרבות תוך ורידים, תוך שרירית, תת עורית, וgavage האוראלי. המטרה של מאמר זה היא לחשוף את צופה מכירה את הטכניקות האלה לאיפוק בסיסי ונתיבי ממשל בסמים. וידאו זהלא מחליף ידות על הכשרה נדרשות במתקן שלך, אך נועד כדי להגדיל ולהשלים את ההכשרה הזאת.

Watch this Scientific Journal Video about Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats at JoVE.com

Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.

איפוק ידני ומסלולי מנהל מתחם נפוצים בעכברים וחולדות

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

manual-restraint-common-compound-administration-routes-mice

Google

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Biology

Unit 1

General Pharmacological Principles

SCIENTISTS IN ACTION

288.2K Views.  Charles River. עבודה בצורה בטוחה ואנושית עם מכרסמי מחקר דורשת מיומנות ליבה בשיטות טיפול ובאיפוק. מאמר זה יציג את העקרונות הבסיסיים הנדרשים לטיפול בצורה בטוחה ויעילים לנהל תרכובות לעכברים וחולדות.

Video: Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland undergoes extensive modeling and re-modeling, alter susceptibility to carcinogen-induced mammary tumors. Similar findings have been described in humans: for example, high birthweight increases later risk of developing breast cancer, and dietary intake of soy during childhood decreases breast cancer risk. It is thought that these prenatal and postnatal dietary modifications induce persistent morphological changes in the mammary gland that in turn modify breast cancer risk later in life. These morphological changes likely reflect epigenetic modifications, such as changes in DNA methylation, histones and miRNA expression that then affect gene transcription . In this article we describe how changes in mammary gland morphology can predict mammary cancer risk in rats. Our protocol specifically describes how to dissect and remove the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology according to three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use the data to predict risk of developing mammary cancer.

Our protocol describes how to dissect the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology using three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use these results to predict mammary cancer risk in rats which were exposed to dietary modifications in utero or during prepuberty.

שינויים במורפולוגיה בלוטת החלב ואת הסיכון לסרטן השד אצל חולדות

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Necropsy לאבחון רקמות אוסף נבחר מדגם של חולדות ועכברים

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are commonly ovariectomized in order to ablate the rapidly cycling hormone production, replacing the 17&beta;-estradiol exogenously. There is, however, lack of consensus regarding how the hormone should be administered to obtain physiological serum concentrations. This is crucial since the 17&beta;-estradiol level/administration method profoundly influences the experimental results1-3. We have in a series of studies characterized the different modes of 17&beta;-estradiol administration, finding that subcutaneous silastic capsules and per-oral nut-cream Nutella are superior to commercially available slow-release pellets (produced by the company Innovative Research of America) and daily injections in terms of producing physiological serum concentrations of 17&beta;-estradiol4-6. Amongst the advantages of the nut-cream method, that previously has been used for buprenorphine administration7, is that when used for estrogen administration it resembles peroral hormone replacement therapy and is non-invasive. The subcutaneous silastic capsules are convenient and produce the most stable serum concentrations. This video article contains step-by-step demonstrations of ovariectomy and 17&beta;-estradiol hormone replacement by silastic capsules and peroral Nutella in rats and mice, followed by a discussion of important aspects of the administration procedures.

Ovariectomy and 17&amp;#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and subsequent replacement of 17&beta;-estradiol by means of silastic capsules and peroral Nutella are demonstrated in rats and mice.

Ovariectomy ו-17β אסטרדיול החלפת בחולדות ועכברים: הפגנה חזותית

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. coli O157:H7 by targeting ORF Z3276. With this assay, we can detect as low as a few copies of the genome of DNA of E. coli O157:H7. The sensitivity and specificity of the assay were confirmed by intensive validation tests with a large number of E. coli O157:H7 strains (n = 369) and non-O157 strains (n = 112). Furthermore, we have combined propidium monoazide (PMA) procedure with the newly developed qPCR protocol for selective detection of live cells from dead cells. Amplification of DNA from PMA-treated dead cells was almost completely inhibited in contrast to virtually unaffected amplification of DNA from PMA-treated live cells. Additionally, the protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for an easy and consistent handling of a large number of samples. This method is expected to have an impact on accurate microbiological and epidemiological monitoring of food safety and environmental source.

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A qPCR assay was developed for detection of Escherichia coli O157:H7 targeting a unique genetic marker, Z3276. The qPCR was combined with propidium monoazide (PMA) treatment for live cell detection. This protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for easy and consistent handling of numerous samples

איתור של שידור חי<em&gt; חיידקי Escherichia</em&gt; O157: H7 תאים על ידי PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Plant Promoter Analysis: Identification and Characterization of Root Nodule Specific Promoter in the Common Bean

The upstream sequences of gene coding sequences are termed as promoter sequences. Studying the expression patterns of promoters are very significant in understanding the gene regulation and spatiotemporal expression patterns of target genes. On the other hand, it is also critical to establish promoter evaluation tools and genetic transformation techniques that are fast, efficient, and reproducible. In this study, we investigated the spatiotemporal expression pattern of the rhizobial symbiosis-specific nodule inception (NIN) promoter of Phaseolus vulgaris in the transgenic hairy roots. Using plant genome databases and analysis tools we identified, isolated, and cloned the P. vulgaris NIN promoter in a transcriptional fusion to the chimeric reporter &#946;-glucuronidase (GUS) GUS-enhanced::GFP. Further, this protocol describes a rapid and versatile system of genetic transformation in the P. vulgaris using Agrobacterium rhizogenes induced hairy roots. This system generates &#8805;2 cm hairy roots at 10 to 12 days after transformation. Next, we assessed the spatiotemporal expression of NIN promoter in Rhizobium inoculated hairy roots at periodic intervals of post-inoculation. Our results depicted by GUS activity show that the NIN promoter was active during the process of nodulation. Together, the present protocol demonstrates how to identify, isolate, clone, and characterize a plant promoter in the common bean hairy roots. Moreover, this protocol is easy to use in non-specialized laboratories.

Promoter expression analyses are crucial to improving the understanding of gene regulation and the spatiotemporal expression of target genes. Herein we present a protocol to identify, isolate, and clone a plant promoter. Further, we describe the characterization of the nodule-specific promoter in the common bean hairy roots.

מי קולחין יזם: זיהוי ואפיון של השורש גולה יזם ספציפי בתוך השעועית נפוצות

The upstream sequences of gene coding sequences are termed as promoter sequences. Studying the expression patterns of promoters are very significant in ...

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also termed the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The reproductive axis is a key integrator of environmental and internal input adapting fertility to favorable conditions for reproduction. Prior to embarking upon a fertility study in mice and rats, sexual maturity is evaluated to exclude the possibility that the observed reproductive phenotypes are caused by delayed or absent pubertal onset. This protocol describes a non-invasive approach to assess pubertal onset in males through the determination of preputial separation, and in females through vaginal opening and first estrus. After the confirmation of the completion of puberty and the achievement of sexual maturity, a fertility study can be initiated. The procedure describes the optimal breeding conditions for mice and rats, how to set up a fertility study, and what parameters to evaluate and determine if the treatment or gene deletion has an impact on fertility.

Many treatments and genetic mutations impact the timing of sexual maturity and fertility. This protocol describes a non-invasive method to evaluate pubertal onset in mice and rats prior to setting up a fertility study in sexually mature animals.

קביעת כשירות הרבייה על-ידי המאשר תחילת המתבגר וביצוע וזמינותו של פוריות ב עכברים וחולדות

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, fungal, parasitic, and viral agents. Salmonella is a bacterial pathogen of worldwide food safety concern, including food for animals. Presented here is a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol that can be used to rapidly screen animal food for the presence of Salmonella contamination and can also be used to confirm presumptive Salmonella isolates recovered from all food categories. The LAMP assay specifically targets the Salmonella invasion gene (invA) and is rapid, sensitive, and highly specific. Template DNAs are prepared from enrichment broths of animal food or pure cultures of presumptive Salmonella isolates. The LAMP reagent mixture is prepared by combining an isothermal master mix, primers, DNA template, and water. The LAMP assay runs at a constant temperature of 65 &#176;C for 30 min. Positive results are monitored via real-time fluorescence and can be detected as early as 5 min. The LAMP assay exhibits high tolerance to inhibitors in animal food or culture medium, serving as a rapid, reliable, robust, cost-effective, and user-friendly method for screening and confirming Salmonella. The LAMP method has recently been incorporated into the U.S. Food and Drug Administration&#8217;s Bacteriological Analytical Manual (BAM) Chapter 5.

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is an isothermal nucleic acid amplification test (iNAAT) that has attracted broad interest in the pathogen detection field. Here, we present a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol as a rapid, reliable, and robust method for screening Salmonella in animal food and confirming presumptive Salmonella from culture isolation.

הגברה איזותרמית בתיווך לולאה להקרנת סלמונלה במזון לבעלי חיים ואישור סלמונלה מבידוד תרבות

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, ...

Divergence of Root Microbiota in Different Habitats based on Weighted Correlation Networks

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, which can effectively explore the interaction relationship or co-occurrence model of different microbial species in different environments. The purpose of this manuscript is to provide details on how to use the weighted correlation network algorithm to analyze different co-occurrence networks that may occur in microbial communities due to different ecological environments. All analysis of the experiment is performed in the WGCNA package. WGCNA is an R package for weighted correlation network analysis. The experimental data used to demonstrate these methods were microbial community data from the NCBI (National Center for Biotechnology Information) database for three niches of the rice (Oryza sativa) root system. We used the weighted correlation network algorithm to construct co-abundance networks of microbial community in each of the three niches. Then, differential co-abundance networks among endosphere, rhizoplane and rhizosphere soil were identified. In addition, the core genera in network were obtained by the "WGCNA" package, which plays an important regulated role in network functions. These methods enable researchers to analyze the response of microbial network to environmental disturbance and verify different microbial ecological response theories. The results of these methods show that the significant differential microbial networks identified in the endosphere, rhizoplane and rhizosphere soil of rice.

Network analysis was applied to evaluate the association of various ecological microbial communities, such as soil, water and rhizosphere. Presented here is a protocol on how to use the WGCNA algorithm to analyze different co-occurrence networks that may occur in the microbial communities due to different ecological environments.

סטייה של מיקרוביוטה שורש בבתי גידול שונים המבוססת על רשתות מתאם משוקללים

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, ...

Determination of Self-(In)compatibility and Inter-(In)compatibility Relationships in Citrus Using Manual Pollination, Microscopy, and S-Genotype Analyses

Citrus uses S-RNase-based self-incompatibility to reject self-pollen and, therefore, requires nearby pollinizer trees for successful pollination and fertilization. However, identifying suitable varieties to serve as pollinizers is a time-consuming process. To solve this problem, we have developed a rapid method for identifying pollination-compatible citrus cultivars that utilizes agarose gel electrophoresis and aniline blue staining. Pollen compatibility is determined based on the identification of S genotypes by extracting total DNA and performing PCR-based genotyping assays with specific primers. Additionally, styles are collected 3-4 days after manual pollination, and aniline blue staining is performed. Finally, the growth status of the pollen tubes is observed with a fluorescence microscope. Pollen compatibility and incompatibility can be established by observing whether the pollen tube growth is normal or suppressed, respectively. Due to its simplicity and cost-effectiveness, this method is an effective tool for determining the pollen compatibility and incompatibility of different citrus varieties to establish incompatibility groups and incompatibility relationships between different cultivars. This method provides information essential for the successful selection of suitable pollinizer trees and, thus, facilitates the establishment of new orchards and the selection of appropriate parents for breeding programs.

Determination of Self-Incompatibility and Inter-Incompatibility Relationships in Citrus Using Manual Pollination, Microscopy, and S-Genotype Analyses

This protocol provides a rapid method for determining pollen compatibility and incompatibility in citrus cultivars.

קביעת יחסי תאימות עצמית (In) ותאימות בין (In) בהדרים באמצעות האבקה ידנית, מיקרוסקופיה וניתוח גנוטיפ S

Citrus uses S-RNase-based self-incompatibility to reject self-pollen and, therefore, requires nearby pollinizer trees for successful pollination and ...

https://cloudfront.jove.com/CDNSource/teasers/65056.jpg

פיתוח טרנספורמציה גנטית ושיטות עריכה בבמבוק

In Planta Gene Expression and Gene Editing in Moso Bamboo Leaves

A novel in planta gene transformation method was developed for bamboo, which avoids the need for time-consuming and labor-intensive callus induction and regeneration processes. This method involves Agrobacterium-mediated gene expression via wounding and vacuum for bamboo seedlings. It successfully demonstrated the expression of exogenous genes, such as the RUBY reporter and Cas9 gene, in bamboo leaves. The highest transformation efficiency for the accumulation of betalain in RUBY seedlings was achieved using the GV3101 strain, with a percentage of 85.2% after infection. Although the foreign DNA did not integrate into the bamboo genome, the method was efficient in expressing the exogenous genes. Furthermore, a gene editing system has also been developed with a native reporter using this method, from which an in situ mutant generated by the edited bamboo violaxanthin de-epoxidase gene (PeVDE) in bamboo leaves, with a mutation rate of 17.33%. The mutation of PeVDE resulted in decreased non-photochemical quenching (NPQ) values under high light, which can be accurately detected by a fluorometer. This makes the edited PeVDE a potential native reporter for both exogenous and endogenous genes in bamboo. With the reporter of PeVDE, a cinnamoyl-CoA reductase gene was successfully edited with a mutation rate of 8.3%. This operation avoids the process of tissue culture or callus induction, which is quick and efficient for expressing exogenous genes and endogenous gene editing in bamboo. This method can improve the efficiency of gene function verification and will help reveal the molecular mechanisms of key metabolic pathways in bamboo.

מחבר זרקור: קידום עריכה גנטית בעלי במבוק לתחליפי פלסטיק בני קיימא 

In this study, a novel in planta gene expression and gene editing method mediated by Agrobacterium was developed in bamboo. This method greatly improved the efficiency of gene function validation in bamboo, which has significant implications for accelerating the process of bamboo breeding.

ב Planta ביטוי גנים ועריכת גנים בעלי במבוק מוסו

A novel in planta gene transformation method was developed for bamboo, which avoids the need for time-consuming and labor-intensive callus induction and ...