עבודה זו נתמכה על ידי מענק DK078732 מ-NIH (עד פורומים בעברית).

1. פרידמן וקיבל הד עולמי culturing adenoviral של איי עכברוש <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 6-גם רקמת לא הצלחת התרבות מצופה על ידי הוספת 2 מ&quot;ל של התקשורת (RPMI 1640 Media המכילים גלוקוז 8 מ&quot;מ, 10% בסרום שור עוברית, 50 יחידות למ&quot;ל פניצילין, ו 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין) למספר הנדרש של וולס. לדוגמה, בניסוי טיפוסי עשוי לדרוש משלוש בארות - אחד עבור כל וירוס, בקרת וירוס (למשל, ה-GFP-להביע adenovirus), וכן קבוצת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את הצלחת כדי 37 מעלות צלזיוס ידי הצבתו בתוך רקמת התרבות בחממה דקות לפחות 30. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד לאחר איון עכברוש בידוד 18,19, במקום 100-200 איים לתוך בארות בודדים של צלחת רקמות בלתי-6-גם תרבות מצופה. איים שישים נדרשים עבור הפרשת אינסולין ההתאגדות מבחני תימידין. איים הנותרים ניתן להשתמש לצורך בידוד RNA לביטוי מחקרים גנטיים או בידוד חלבון עבור immunoblotting. </li></ol> [הערה: מכאן ואילך, בצע פרוטוקולים מוסדיים לטיפול, שימוש וסילוק של חומרים ביולוגית מסוכנת.] <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבולת בעדינות את הצלחת להביא את איים למרכז גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה adenovirus ישירות על גבי איים במרכז צלחת. השתמש 100-500 multiplicities של זיהום (משרד הפנים, היחס בין התאים היעד ל פלאק יוצרי יחידות ויראלי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן את שאר איים דקות 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצלחת התרבות רקמת אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 24 שעות, מערבולת בעדינות את הצלחת להביא את איים למרכזי הבארות ולהעביר את איים באמצעות micropipette P200 ל באר חדשה ובה התקשורת טריים. אם איים להתקשר לצלחת, הם יכולים להיות וחילצה בעדינות עם קצה פיפטה. </li></ol> [הערה: כדי לוודא efficien התמרה נאותהסי, את השימוש של ה-GFP השליטה וירוס ביטוי מועיל, כמו איים לאחר מכן ניתן צילמו באמצעות מיקרוסקופיה confocal לאמת את חדירת adenovirus לתוך הליבה איון.] <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות איים עבור שעות נוספות 24-72, תלוי העיתוי הרצוי של הניסוי ממחקרים טייס אופטימיזציה. כך, למשל, אינדוקציה של תגובת שגשוג עשוי לדרוש הזמנים החל 24-72 שעות או מציאה של הגן של עניין עשוי לדרוש 48 או 72 שעות. להעביר את איים למדיה טריים מדי יום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור H 24 הסופי של הניסוי, תרבות איים בתקשורת המכילים 1 μCi [מתיל-3 H] -thymidine/ml התקשורת (בדרך כלל 1 μl תימידין / מ&quot;ל התקשורת). </li></ol> [הערה: מכאן ואילך, בצע פרוטוקולים מוסדיים לטיפול, שימוש וסילוק של חומרים רדיואקטיביים.] 2. הפרשת אינסולין Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכין אתassay הפרשת חיץ (SAB) פתרון המניות 10X (1.14 M NaCl, KCl 47 מ&quot;מ, 12 מ&quot;מ KH 2 PO 4, 11.6 mM MgSO 4) ו - CaCl 2 פתרון המניות 100x (0.25 מ &#39;CaCl 2). פתרונות אלו המניות עשוי להיות מוכן מראש ולאחסן בטמפרטורת החדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרי להכין 50 מ&quot;ל של SAB עבודה (5 מ&quot;ל של SAB 10X, 1 מ&quot;ל של 1 HEPES M, 0.5 מ&quot;ל של 100x CaCl 2, 0.28 מ&quot;ל של BSA 35%, 0.11 גרם NaHCO 3, מים סטריליים עד 50 מ&quot;ל) ב 50 מ&quot;ל חרוטי הצינור חמים 37 ° C על ידי הצבת ב 37 ° C waterbath. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 10 מ&quot;ל של SAB עבודה לתוך צינור של 15 מ&quot;ל חרוטי ולהוסיף 66.8 μl של 2.5 גלוקוז-D M להכין גלוקוז גבוהה (16.7 mM) SAB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 44.8 μl של 2.5 גלוקוז-D M כדי מ&quot;ל 40 הנותרים של SAB לעבוד כדי להכין גלוקוז נמוכה (2.8 מ&quot;מ) SAB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלושה תווית 1.7-מ&quot;ל microcentrifuge צינורות עבור כל אחד גם צלחת 6-גם ולהוסיף 1 מ&quot;ל של פוספט שנאגרו מלוחים (PBS). </li></oאני&gt; [הערה: איים הם רדיואקטיבי, בצע פרוטוקולים מוסדיים לטיפול, שימוש וסילוק של חומרים רדיואקטיביים.] <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים 20 איים לתוך צינור אחד microcentrifuge. נעשה כל ניסיון להוסיף איים בגודל comparably לצינור כל microcentrifuge. כך, למשל, צינור זה עשוי להכיל 5 בינוני, קטן, 10 ו -5 גדולה בגודל איים (ראה איור 1). </li></ol> [הערה: איי ניתן דמיינו באמצעות אחת stereoscope לנתח או מיקרוסקופ רגיל.] <ol start="7" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר איים התיישבו על החלק התחתון של הצינור על ידי כוח הכבידה (~ 2 דקות), לשאוב PBS עם micropipette וזורקים. </li></ol> [הערה: כחלופה ליישוב על ידי כוח המשיכה, את הצינורות ניתן centrifuged ב XG 300 דקות 1.] <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על דגירה מראש, הוסף 400 μl של Glu נמוכהcose SAB, למקם את צינורות (עם כובעי שלהם פתוח) אל התרבות רקמת אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2), מראש דגירה של 60 דקות. Aspirate מראש הדגירה גלוקוז SAB נמוך וזורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על הפרשת האינסולין הבזאלי, הוסף 400 μl של גלוקוז SAB נמוך, למקם את צינורות (עם כובעי שלהם פתוח) אל התרבות רקמת אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2), דגירה של 60 דקות. איסוף SAB גלוקוז נמוכה ולשמור על radioimmunoassay אינסולין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על הפרשת אינסולין מגורה, הוסף 400 μl של SAB גלוקוז גבוהה, למקם את צינורות (עם כובעי שלהם פתוח) אל התרבות רקמת אינקובטור (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2), דגירה של 60 דקות. איסוף SAB גלוקוז גבוהה ולשמור על radioimmunoassay אינסולין. </li></ol> 3. התאגדות תימידין Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ל PBS, לאחר איים התיישבו על החלק התחתון של הצינור על ידי כוח הכבידה, לשאוב PBS עם micropipette, למחוק, ולחזור על זהלדרוך פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 500 μl קרח קר חומצה Trichloroacetic (TCA, 10% w / v) ו - דגירה על קרח למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצנטריפוגה צינורות ב 000 XG 16 דקות 3 על 4 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aspirate TCA, הוסף 80 μl של 0.3 N NaOH, ו דגירה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. במהלך תקופה זו, מערבולת במרץ דגימות של 5-10 עבור כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 4 מ&quot;ל של קוקטייל Econo כספת לספור עד 7 מ&quot;ל נוזל צינורות נצנץ הספירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 50 μl של המדגם כדי צינור הנצנץ ספירה, מכסה את הצינור, ללחוץ בקצרה, ולספור על הדלפק נצנץ נוזלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את ריכוז החלבון באמצעות חומצה assay bicinchoninic (BCA) ו - 10 μl של מדגם לפי הפרוטוקול של היצרן. </li></ol> 4. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע radioimmunoassay אינסולין בעקבות פרוטוקול של היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנרמל את הפרשת האינסולין ושילוב נתונים תימידין קונצרט כלשהו עם חלבוןentration. </li></ol> 5. נציג תוצאות למשל הניסוי להעריך איון שכפול של התא פונקציה בטא איים חולדה מוצג באיור 2. דוגמה זו מראה כי overexpression adenoviral של &quot;גן # 6&quot; היפותטית וחסונה מגרה שכפול איון מבלי לשנות את תפקוד התא בטא. בלוח העליון, התוצאות assay שילוב תימידין להוכיח כי הגברת הביטוי של &quot;גן # 6&quot; מגביר סינתזה של DNA, כפי שנמדד על ידי שילוב של תימידין. כי רוב התאים איון עכברוש הם תאים בטא, סביר להניח כי עלייה זו מצביעה על שילוב תימידין עלייה שכפול התא בטא. עם זאת, ניסויים מאשרות יש לבצע ביסוס זה. בלוח התחתונה, התוצאות assay הפרשת אינסולין להוכיח כי ביטוי יתר של &quot;גן מס &#39;6&quot; לא שינה אחד התפקידים העיקריים תא בטא, כלומר, אניnsulin על הפרשת גלוקוז נמוך וגבוה. איכות הבידוד איון והבריאות של איים בעקבות טיפול adenoviruses מצוין על ידי עלייה של פי הפרשת אינסולין בריכוזים גלוקוז נמוך וגבוה. אם מגדילים את ביטוי &quot;# 6 ין&quot; תפקוד לקוי תא הבטא, זה עלול לבוא לידי ביטוי כמו ירידה האינסולין מופרש על ריכוזי גלוקוז גבוהות, גירוי (16.7 mM). עקומת מנה תגובה עבור ריכוזים שונים הגלוקוז יכולה גם להתבצע. <img src="/files/ftp_upload/4080/4080fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. סקירה כללית של פרוטוקול להעריך שכפול איון ותפקוד התא בטא עכברוש איים מבודדים בעקבות adenoviral בתיווך שינויים בביטוי הגנים. איים מבודדים עכברים שזה עתה נחשפים adenoviruses במשך 24 שעות ולאחר מכן בתרבית עד 96 שעות. שילוב תימידין מוערך ב 24 שעות הסופי, ואחריו המדידה של הפרשת אינסוליןנמוך וגבוה גלוקוז. <img src="/files/ftp_upload/4080/4080fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. תוצאות הניסוי באמצעות adenovirus מלאה adenovirus overexpressing גן היפותטי שכותרתו &quot;גן # 6&quot;. הפאנל העליון מציג שילוב תימידין ואת הפאנל התחתון הפרשת אינסולין.

<ol>
	<li>Ferrannini, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Cell+function+in+subjects+spanning+the+range+from+normal+glucose+tolerance+to+overt+diabetes:+a+new+analysis.">beta-Cell function in subjects spanning the range from normal glucose tolerance to overt diabetes: a new analysis.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 90, 493-500 (2005).</li><li>Weyer, C., Bogardus, C., Mott, D. M., Pratley, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+insulin+secretory+dysfunction+and+insulin+resistance+in+the+pathogenesis+of+type+2+diabetes+mellitus.">The natural history of insulin secretory dysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus.</a> J. Clin. Invest. 104, 787-794 (1999).</li><li>Keenan, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+insulin+production+and+pancreatic+ss-cell+turnover+after+50+years+of+diabetes:+Joslin+Medalist+Study.">Residual insulin production and pancreatic ss-cell turnover after 50 years of diabetes: Joslin Medalist Study.</a> Diabetes. 59, 2846-2853 (2010).</li><li>Bain, J. R., Schisler, J. C., Takeuchi, K., Newgard, C. B., Becker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+adenovirus+vector+for+efficient+RNA+interference-mediated+suppression+of+target+genes+in+insulinoma+cells+and+pancreatic+islets+of+langerhans.">An adenovirus vector for efficient RNA interference-mediated suppression of target genes in insulinoma cells and pancreatic islets of langerhans.</a> Diabetes. 53, 2190-2194 (2004).</li><li>Fueger, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trefoil+factor+3+stimulates+human+and+rodent+pancreatic+islet+beta-cell+replication+with+retention+of+function.">Trefoil factor 3 stimulates human and rodent pancreatic islet beta-cell replication with retention of function.</a> Mol. Endocrinol. 22, 1251-1259 (2008).</li><li>Schisler, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+human+and+rat+islet+beta-cell+proliferation+with+retention+of+function+by+the+homeodomain+transcription+factor+Nkx6.1.">Stimulation of human and rat islet beta-cell proliferation with retention of function by the homeodomain transcription factor Nkx6.1.</a> Mol. Cell Biol. 28, 3465-3476 (2008).</li><li>Chan, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+uncoupling+protein+2+inhibits+glucose-stimulated+insulin+secretion+from+rat+islets.">Overexpression of uncoupling protein 2 inhibits glucose-stimulated insulin secretion from rat islets.</a> Diabetes. 48, 1482-1486 (1999).</li><li>Cozar-Castellano, I., Takane, K. K., Bottino, R., Balamurugan, A. N., Stewart, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+beta-cell+proliferation+and+retinoblastoma+protein+phosphorylation+in+rat+and+human+islets+using+adenovirus-mediated+transfer+of+cyclin-dependent+kinase-4+and+cyclin+D1.">Induction of beta-cell proliferation and retinoblastoma protein phosphorylation in rat and human islets using adenovirus-mediated transfer of cyclin-dependent kinase-4 and cyclin D1.</a> Diabetes. 53, 149-159 (2004).</li><li>Icyuz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenovirus+infection+activates+akt1+and+induces+cell+proliferation+in+pancreatic+islets1.">Adenovirus infection activates akt1 and induces cell proliferation in pancreatic islets1.</a> Transplantation. 87, 821-824 (2009).</li><li>Kaneto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+hexosamine+pathway+leads+to+deterioration+of+pancreatic+beta-cell+function+through+the+induction+of+oxidative+stress.">Activation of the hexosamine pathway leads to deterioration of pancreatic beta-cell function through the induction of oxidative stress.</a> J. Biol. Chem. 276, 31099-31104 (2001).</li><li>Antinozzi, P. A., Berman, H. K., O'Doherty, R. M., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+with+recombinant+adenoviruses.">Metabolic engineering with recombinant adenoviruses.</a> Annu. Rev. Nutr. 19, 511-544 (1999).</li><li>Newgard, C. B., Becker, T. C., Berman, H. K., O'Doherty, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+overexpressed+hexokinases+in+liver+and+islet+cells.">Regulation of overexpressed hexokinases in liver and islet cells.</a> Biochem. Soc. Trans. 25, 118-122 (1997).</li><li>Becker, T. C., BeltrandelRio, H., Noel, R. J., Johnson, J. H., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+hexokinase+I+in+isolated+islets+of+Langerhans+via+recombinant+adenovirus.+Enhancement+of+glucose+metabolism+and+insulin+secretion+at+basal+but+not+stimulatory+glucose+levels.">Overexpression of hexokinase I in isolated islets of Langerhans via recombinant adenovirus. Enhancement of glucose metabolism and insulin secretion at basal but not stimulatory glucose levels.</a> J. Biol. Chem. 269, 21234-21238 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral-mediated+gene+transfer+to+pancreatic+islets+does+not+alter+islet+function.">Adenoviral-mediated gene transfer to pancreatic islets does not alter islet function.</a> Transplant Proc. 26, 756-757 (1994).</li><li>Csete, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+to+pancreatic+islets+mediated+by+adenoviral+vectors.">Efficient gene transfer to pancreatic islets mediated by adenoviral vectors.</a> Transplantation. 59, 263-268 (1995).</li><li>Meng, Z. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+liver+X+receptors+inhibits+pancreatic+islet+beta+cell+proliferation+through+cell+cycle+arrest.">Activation of liver X receptors inhibits pancreatic islet beta cell proliferation through cell cycle arrest.</a> Diabetologia. 52, 125-135 (2009).</li><li>Ronnebaum, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyruvate+cycling+pathway+involving+cytosolic+NADP-dependent+isocitrate+dehydrogenase+regulates+glucose-stimulated+insulin+secretion.">A pyruvate cycling pathway involving cytosolic NADP-dependent isocitrate dehydrogenase regulates glucose-stimulated insulin secretion.</a> J. Biol. Chem. , (2006).</li><li>Milburn, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+beta-cells+in+obesity.+Evidence+for+induction+of+functional,+morphologic,+and+metabolic+abnormalities+by+increased+long+chain+fatty+acids.">Pancreatic beta-cells in obesity. Evidence for induction of functional, morphologic, and metabolic abnormalities by increased long chain fatty acids.</a> J. Biol. Chem. 270, 1295-1299 (1995).</li><li>Szot, G., Koudria, P., Bluestone, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Pancreatic+Islet+Isolation.">Murine Pancreatic Islet Isolation.</a> J. Vis. Exp. (7), e255 (2007).</li></ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

מסלולים הקובע כי יכול להיות מאופנן כדי לעורר את השכפול ולשפר את תפקוד תאים בטא רלוונטיים בשתי צורות עיקריות של סוכרת. בגלל המסה התפקודית תא בטא תלויה בקיומו והתפקוד של האינסולין בתאים, להערכת הגורמים הללו בעת ובעונה אחת יש יתרונות משלה. פרוטוקול זה מתאר פרוטוקול יעי?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> RPMI 1640 התקשורת </td><td> Gibco </td><td> 11879 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr><tr><td> 6 גם צלחת </td><td> BD-Falcon </td><td> 35-1146 </td><td> Non-TC טיפול </td></tr><tr><td> [מתיל H-3], תימידין </td><td> פרקין אלמר </td><td> NET027Z001MC </td><td> 1 mCi / ml </td></tr><tr><td> מיקרו צנטריפוגות צינורות </td><td> Denville </td><td> C2170 </td><td> 1.7 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> סיגמא </td><td> 59888 </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td> Acros </td><td> 42409 </td><td></td></tr><tr><td> KH 2 &lt;/ Sub&gt; PO 4 </td><td> Acros </td><td> 20592 </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Acros </td><td> 41348 </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> Acros </td><td> 34961 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> סיגמא </td><td> H0887 </td><td> 1 M פתרון </td></tr><tr><td> 35% BSA </td><td> סיגמא </td><td> A7979 </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Acros </td><td> 42427 </td><td></td></tr><tr><td> D-גלוקוז </td><td> סיגמא </td><td> G8769 </td><td></td></tr><tr><td> TCA </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> SA9410-1 </td><td> 10% w / v </td></tr><tr><td> NaOH </td><td> Acros </td><td> 12426 </td><td></td></tr><tr><td> נצנץ לספור צינור </td><td> Sarstedt </td><td> 58.536 </td><td> 7 מ&quot;ל, PP </td&gt; </tr><tr><td> ספירת נצנץ צינור כובע </td><td> Sarstedt </td><td> 65.816 </td><td></td></tr><tr><td> Econo-Safe לספור קוקטייל </td><td> RPI </td><td> 111175 </td><td></td></tr><tr><td> אינסולין RIA </td><td> סימנס </td><td> TKIN2 </td><td></td></tr><tr><td> BCA Assay Kit </td><td> Thermo Scientific </td><td> 23250 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ציוד </td></tr><tr><td> סרכזת </td><td> Eppendorf </td><td> 5415R </td><td></td></tr><tr><td> נצנץ לספור מתלה צינור </td><td> Sarstedt </td><td> 93.1431.001 </td><td></td></tr><tr><td> נצנץ נוזלי נגד </td><td> פרקין אלמר </td><td> Tri-Carb 2910TR </td><td></td></tr></tbody></table>

assessing replication and beta cell function in adenovirally-transduced isolated rodent islets

הומאוסטזיס הגלוקוז נשלטת בעיקר על ידי אינסולין האנדוקרינית ההורמונים גלוקגון, המופרש מן הלבלב ביתא מתאי אלפא, בהתאמה. מסת התפקוד תא הבטא נקבעת על ידי מסת תאים אנטומי בטא, כמו גם את יכולתם של תאים בטא להגיב עומס התזונתי. אובדן מסת בטא תפקודית תא מרכזי שני צורות עיקריות של סוכרת 1-3. ואילו ירידה תפקודית תאים בטא תוצאות המונית התקפה אוטואימונית סוכרת מסוג 1, סוכרת מסוג 2, הפחתה זו מפתחת גם מחוסר היכולת של תאים בטא להפריש אינסולין כראוי והרס תאים בטא מתוך קאדר של מנגנונים. לפיכך, המאמצים לשקם תא תפקודית המוני ביתא הם עליונה לטיפול טוב יותר ותרופות פוטנציאל לסוכרת. נערכים מאמצים לזהות מסלולים מולקולריים, שניתן לנצלן כדי לעורר את השכפול ולשפר את תפקוד תאים בטא.באופן אידיאלי, מטרות טיפוליות תשפר גם את גדילת התאים לתפקד בטא. אולי חשוב יותר אף היא לזהות אם האסטרטגיה מעורר צמיחת תאים בטא מגיע במחיר של תפקוד התא ופגיעה בטא (כמו עם אונקוגנים מסוימים), ולהיפך. על ידי ביטוי בדיכוי שיטתי או overexpressing של גני מטרה של איים מבודדים חולדה, אפשר לזהות מטרות טיפוליות פוטנציאל הגדלת מסת תאים פונקציונלית בטא 4-6. וקטורים adenoviral יכול להיות מועסק על חלבונים overexpress ביעילות או מציאה של איים מבודדים 4,7-15 חולדה. כאן, אנו מציגים שיטה לתפעל ביטוי גנים ניצול התמרה adenoviral ולהעריך איון שכפול של התא פונקציה בטא עכברוש איים מבודדים (איור 1). בשיטה זו נעשה שימוש בעבר כדי לזהות מטרות חדשות, כי לווסת את שכפול התא בטא או פונקציה 5,6,8,9,16,17.

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets at JoVE.com

Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets

פרוטוקול זה מאפשר לזהות את הגורמים לווסת את תפקודי התא המוני ביתא למצוא מטרות טיפוליות אפשריות לטיפול בסוכרת. פרוטוקול מורכבת השיטה יעילה להעריך איון שכפול של התא פונקציה בטא עכברוש איים מבודדים בעקבות מניפולציה של ביטוי גנים עם adenoviruses.

מכרסם איי הערכת שכפול של התא פונקציה בטא Adenovirally-transduced מבודדים

Glucose homeostasis is primarily controlled by the endocrine hormones insulin and glucagon, secreted from the pancreatic beta and alpha cells, ...

assessing-replication-beta-cell-function-adenovirally-transduced

Research

JoVE Journal

Medicine

13.9K Views.  Indiana University School of Medicine. פרוטוקול זה מאפשר לזהות את הגורמים לווסת את תפקודי התא המוני ביתא למצוא מטרות טיפוליות אפשריות לטיפול בסוכרת. פרוטוקול מורכבת השיטה יעילה להעריך איון שכפול של התא פונקציה בטא עכברוש איים מבודדים בעקבות מניפולציה של ביטוי גנים עם adenoviruses.

Video: Assessing Replication and Beta Cell Function in Adenovirally-transduced Isolated Rodent Islets

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

Bioengineered mouse models have become powerful research tools in determining causal relationships between molecular alterations and models of cardiovascular disease. Although molecular biology is necessary in identifying key changes in the signaling pathway, it is not a surrogate for functional significance. While physiology can provide answers to the question of function, combining physiology with biochemical assessment of metabolites in the intact, beating heart allows for a complete picture of cardiac function and energetics. For years, our laboratory has utilized isolated heart perfusions combined with nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy to accomplish this task. Left ventricular function is assessed by Langendorff-mode isolated heart perfusions while cardiac energetics is measured by performing 31P magnetic resonance spectroscopy of the perfused hearts. With these techniques, indices of cardiac function in combination with levels of phosphocreatine and ATP can be measured simultaneously in beating hearts. Furthermore, these parameters can be monitored while physiologic or pathologic stressors are instituted. For example, ischemia/reperfusion or high workload challenge protocols can be adopted. The use of aortic banding or other models of cardiac pathology are apt as well. Regardless of the variants within the protocol, the functional and energetic significance of molecular modifications of transgenic mouse models can be adequately described, leading to new insights into the associated enzymatic and metabolic pathways. Therefore, 31P NMR spectroscopy in the isolated perfused heart is a valuable research technique in animal models of cardiovascular disease.

Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy

Langendorff-mode isolated heart perfusion, in conjunction with 31P NMR spectroscopy, combines the fields of biochemistry and physiology into one experiment. The protocol allows for the dynamic measurement of high energy phosphate content and turnover in the heart while concurrently monitoring physiologic function. When performed correctly, this is a valuable technique in the assessment of cardiac energetics.

הערכה של תפקוד הלב Energetics בלבבות עכבר בודדות שימוש 31 P NMR ספקטרוסקופיה

Bioengineered mouse models have become powerful research tools in determining causal relationships between molecular alterations and models of ...

Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT 2000

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of the panoply of paracrine factors that it secretes, the endothelium regulates the contractile and proliferative state of the underlying vascular smooth muscle, as well as the interaction of the vessel wall with circulating blood elements. Because of its central role in mediating vessel tone and growth, its position as gateway to circulating immune cells, and its local regulation of hemostasis and coagulation, the the properly functioning endothelium is the key to cardiovascular health. Conversely, the earliest disorder in most vascular diseases is endothelial dysfunction.
In the arterial circulation, the healthy endothelium generally exerts a vasodilator influence on the vascular smooth muscle. There are a number of methods to assess endothelial vasodilator function. The Endo-PAT 2000 is a new device that is used to assess endothelial vasodilator function in a rapid and non-invasive fashion. Unlike the commonly used technique of duplex ultra-sonography to assess flow-mediated vasodilation, it is totally non-operator-dependent, and the equipment is an order of magnitude less expensive. The device records endothelium-mediated changes in the digital pulse waveform known as the PAT ( peripheral Arterial Tone) signal, measured with a pair of novel modified plethysmographic probes situated on the finger index of each hand. Endothelium-mediated changes in the PAT signal are elicited by creating a downstream hyperemic response. Hyperemia is induced by occluding blood flow through the brachial artery for 5 minutes using an inflatable cuff on one hand. The response to reactive hyperemia is calculated automatically by the system. A PAT ratio is created using the post and pre occlusion values. These values are normalized to measurements from the contra-lateral arm, which serves as control for non-endothelial dependent systemic effects. Most notably, this normalization controls for fluctuations in sympathetic nerve outflow that may induce changes in peripheral arterial tone that are superimposed on the hyperemic response.
In this video we demonstrate how to use the Endo-PAT 2000 to perform a clinically relevant assessment of endothelial vasodilator function.

A noninvasive procedure to assess endothelial function is demonstrated using the Endo-PAT 2000.

הערכת תפקוד האנדותל vasodilator עם 2000 Endo-PAT

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of ...

Myo-mechanical Analysis of Isolated Skeletal Muscle

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force generation and fatigability in treated muscle. We describe a detailed approach to evaluating myo-mechanical properties in freshly explanted hindlimb muscle from the mouse. We describe the atraumatic harvest of mouse extensor digitorum longus muscle, mounting the muscle in a muscle strip myograph (Model 820MS; Danish Myo Technology), and the measurement of maximal twitch and tetanic tension, contraction time, and half-relaxation time, using a square pulse stimulator (Model S48; Grass Technologies). Using these measurements, we demonstrate the calculation of specific twitch and tetanic tension normalized to muscle cross-sectional area, the twitch-to-tetanic tension ratio, the force-frequency relationship curve and the low frequency fatigue curve 4. This analysis provides a method for quantitative comparison between therapeutic interventions in mouse models of muscle disease 1,2,3,5, as well as comparison of the effects of genetic modification on muscle function 6,7,8,9.

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for muscle disease, methods are needed to quantitate force generation and fatigability in treated muscle. We detail an approach to evaluating myo-mechanical properties in explanted mouse hindlimb muscle. This analysis provides a robust approach to quantitating the effects of genetic modification on muscle function, as well as comparison of therapies in mouse models of muscle disease.

מיו מכני ניתוח בשרירי השלד מבודדת

To assess the in vivo effects of therapeutic interventions for the treatment of muscle disease 1,2,3, quantitative methods are needed that measure force ...

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 diabetic islets from organ donors2. Here we share our protocol for isolating islets from human pancreatic tissue obtained from type 2 diabetic and non-diabetic patients who have undergone partial pancreatectomy due to different pancreatic diseases (benign or malignant pancreatic tumors, chronic pancreatitis, and common bile duct or duodenal tumors). All patients involved gave their consent to this study, which had also been approved by the local ethics committee. The surgical specimens were immediately delivered to the pathologist who selected soft and healthy appearing pancreatic tissue for islet isolation, retaining the damaged tissue for diagnostic purposes. We found that to isolate more than 1,000 islets, we had to begin with at least 2 g of pancreatic tissue. Also essential to our protocol was to visibly distend the tissue when injecting the enzyme-containing media and subsequently mince it to aid digestion by increasing the surface area.
To extend the applicability of our protocol to include the occasional case in which a large amount (&gt;15g) of human pancreatic tissue is available , we used a Ricordi chamber (50 ml) to digest the tissue. During digestion, we manually shook the Ricordi chamber3 at an intensity that varied by specimen according to its level of tissue fibrosis. A discontinous Ficoll gradient was then used to separate the islets from acinar tissue. We noted that the tissue pellet should be small enough to be homogenously resuspended in Ficoll medium with a density of 1.125 g/ml. After isolation, we cultured the islets under stress free conditions (no shaking or rotation) with 5% CO2 at 37 &deg;C for at least 48 h in order to facilitate their functional recovery. Widespread application of our protocol and its future improvement could enable the timely harvesting of large quantities of human islets from diabetic and clinically matched non-diabetic subjects, greatly advancing type 2 diabetes research.

The supply of type 2 diabetic islets for research is insufficient. Here we share our protocol for isolating islets from patients undergoing partial pancreatectomy. This approach represents a unique venue for obtaining islets from type 2 diabetic and clinically matched non-diabetic subjects in adequate numbers for basic and clinical studies.

הבידוד של איי האדם מן המטופלים Pancreatectomized חלקית

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

הערכת שינויים teratogenic במודל דג הזברה של חשיפה אלכוהול עוברית

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and beta mass ranges from 500 to 1500 mg 1-3. With this known heterogeneity, a standard processing and staining procedure was developed so that pancreatic regions were clearly defined and islets characterized using rigorous histopathology and immunolocalization examinations. 
Standardized procedures for processing human pancreas recovered from organ donors are described in part 1 of this series. The pancreas is processed into 3 main regions (head, body, tail) followed by transverse sections. Transverse sections from the pancreas head are further divided, as indicated based on size, and numbered alphabetically to denote subsections. This standardization allows for a complete cross sectional analysis of the head region including the uncinate region which contains islets composed primarily of pancreatic polypeptide cells to the tail region.
The current report comprises part 2 of this series and describes the procedures used for serial sectioning and histopathological characterization of the pancreatic paraffin sections with an emphasis on islet endocrine cells, replication, and T-cell infiltrates. Pathology of pancreatic sections is intended to characterize both exocrine, ductular, and endocrine components. The exocrine compartment is evaluated for the presence of pancreatitis (active or chronic), atrophy, fibrosis, and fat, as well as the duct system, particularly in relationship to the presence of pancreatic intraductal neoplasia4. Islets are evaluated for morphology, size, and density, endocrine cells, inflammation, fibrosis, amyloid, and the presence of replicating or apoptotic cells using H&amp;E and IHC stains. 
The final component described in part 2 is the provision of the stained slides as digitized whole slide images. The digitized slides are organized by case and pancreas region in an online pathology database creating a virtual biobank. Access to this online collection is currently provided to over 200 clinicians and scientists involved in type 1 diabetes research. The online database provides a means for rapid and complete data sharing and for investigators to select blocks for paraffin or frozen serial sections.

This video demonstrates procedures for characterization of human pancreatic islets using hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry (IHC). Pancreatic sections from head, body, and tail regions are stained by both H&amp;E and IHC to determine islet endocrine composition (insulin, glucagon, and pancreatic polypeptide), cell replication (Ki67), and inflammatory infiltrates (H&E, CD3). The uncinate region is localized using IHC for pancreatic polypeptide.

הפרוטוקולים מכתים עבור איי הלבלב אדם

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, the role of beta-cell dysfunction in type 2 diabetes has been clearly established 2. Research progress has required methods for the isolation of pancreatic islets. The protocol of the islet isolation presented here shares many common steps with protocols from other groups, with some modifications to improve the yield and quality of isolated islets from both the wild type and diabetic Leprdb (db/db) mice. A live-cell 2-photon imaging method is then presented that can be used to investigate the control of insulin secretion within islets.

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

We present here a protocol for the isolation of islets from the mouse model of type 2 diabetes, Leprdb and details of a live-cell assay for measurement of insulin secretion from intact islets that utilizes 2 photon microscopy.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; עכבר דגם של סוכרת מסוג 2: בידוד לבלב וLive- תא 2-פוטון הדמיה של איי שלמים

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion of endogenous insulin-producing pancreatic islet &#946;-cells remains an attractive strategy. &#946;-cells have limited spontaneous regenerative activity; consequently, a crucial research effort is to develop a precise understanding of the molecular pathways that restrain &#946;-cell growth and to identify drugs capable of overcoming these restraints. Herein an automated high-content image-based primary-cell screening method to identify &#946;-cell replication-promoting small molecules is presented. Several, limitations of prior methodologies are surmounted. First, use of primary islet cells rather than an immortalized cell-line maximizes retention of in vivo growth restraints. Second, use of mixed-composition islet-cell cultures rather than a &#946;-cell-line allows identification of both lineage-restricted and general growth stimulators. Third, the technique makes practical the use of primary islets, a limiting resource, through use of a 384-well format. Fourth, detrimental experimental variability associated with erratic islet culture quality is overcome through optimization of isolation, dispersion, plating and culture parameters. Fifth, the difficulties of accurately and consistently measuring the low basal replication rate of islet endocrine-cells are surmounted with optimized immunostaining parameters, automated data acquisition and data analysis; automation simultaneously enhances throughput and limits experimenter bias. Notable limitations of this assay are the use of dispersed islet cultures which disrupts islet architecture, the use of rodent rather than human islets and the inherent limitations of throughput and cost associated with the use of primary cells. Importantly, the strategy is easily adapted for human islet replication studies. This assay is well suited for investigating the mitogenic effect of substances on &#946;-cells and the molecular mechanisms that regulate &#946;-cell growth.

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &amp;#946;-cell Replication Discovery Platform

Critical challenges for the diabetes research field are to understand the molecular mechanisms that regulate islet &#946;-cell replication and to develop methods for stimulating &#946;-cell regeneration. Herein a high-content screening method to identify and assess the &#946;-cell replication-promoting activity of small molecules is presented.

A-תכולה גבוהה<em&gt; במבחנה</em&gt; פלטפורמת Discovery הלבלב איילט β-cell שכפול

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion ...

Quantitative 3D In Silico Modeling (q3DISM) of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer's Disease

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible for phagocytosis and clearance of debris and detritus. These cells include CNS-resident macrophages known as microglia, and mononuclear phagocytes infiltrating from the periphery. Light microscopy has generally been used to visualize phagocytosis in rodent or human brain specimens. However, qualitative methods have not provided definitive evidence of in vivo phagocytosis. Here, we describe quantitative 3D in silico modeling (q3DISM), a robust method allowing for true 3D quantitation of amyloid-&#946; (A&#946;) phagocytosis by mononuclear phagocytes in rodent Alzheimer&#39;s Disease (AD) models. The method involves fluorescently visualizing A&#946; encapsulated within phagolysosomes in rodent brain sections. Large z-dimensional confocal datasets are then 3D reconstructed for quantitation of A&#946; spatially colocalized within the phagolysosome. We demonstrate the successful application of q3DISM to mouse and rat brains, but this methodology can be extended to virtually any phagocytic event in any tissue.

Quantitative 3D In Silico Modeling q3DISM of Cerebral Amyloid-beta Phagocytosis in Rodent Models of Alzheimer&#039;s Disease

We developed a methodology for quantitative 3D in silico modeling (q3DISM) of cerebral amyloid-&#946; (A&#946;) phagocytosis by mononuclear phagocytes in rodent models of Alzheimer&#39;s disease. This method can be generalized for the quantitation of virtually any phagocytic event in vivo.

3D כמוני<em&gt; סיליקו</em&gt; דוגמנות (q3DISM) של Phagocytosis עמילואיד-ביתא מוחין במודלים של מכרסמים של מחלת אלצהיימר

Neuroinflammation is now recognized as a major etiological factor in neurodegenerative disease. Mononuclear phagocytes are innate immune cells responsible ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal model to investigate bladder remodeling in pBOO are female rodents undergoing partial obstruction at the proximal urethra. Variability in the degree of obstruction and animal mortality are major concerns with proximal obstruction. Furthermore, dissecting around the proximal urethra and bladder neck jeopardizes bladder innervation.
We developed a nerve-sparing mid-urethral obstruction (NeMO) model for pBOO avoiding the disadvantages of the traditional model. We approached the urethra just inferior to the pubic symphysis, which obviated the need for laparotomy as well as for dissection in this area; also, the striated urethral sphincter remained untouched. We performed NeMO in female Sprague-Dawley rats (12 obstructions, 6 sham animals) as well as in female C57/bl6 mice (20 obstructions, 18 sham animals). After two weeks, we evaluated bladder function, bladder mass, and body mass.
We had no mortalities among obstructed- or sham-operated female rats; as described for the traditional proximal pBOO-method, we tied the suture around the proximal urethra and a temporarily placed 0.9 mm metal rod. NeMO induced an 85% increase in bladder mass after two weeks, average residual urine volume was 0.4 mL in partially obstructed rats while only 0.03 mL in sham animals. In mice, we tested 3 sizes of cannulas that we placed along the urethra when tying the suture. We found that using a 27-gauge cannula resulted in over 50% animal mortality; placing the 25-gauge cannula did not yield the desired response in increasing bladder mass; utilizing a 26-gauge cannula yielded favorable results with minimal animal mortality (1/8) yet a significant 2-fold increase in bladder mass.

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Traditional modeling of partial bladder outlet obstruction in rodents is fraught with animal mortality. A denervation injury from dissection around the proximal urethra and bladder neck is also of major concern. We developed and evaluated a safe and reliable mid-urethral obstruction model, avoiding the shortcomings of the traditional model.

עצב-מקמץ חסימת אמצע שופכה (Nemo) ב הנקבה קטנה מכרסם

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...