כל הניסויים נעשו תחת פיקוחו של הטיפול בבעלי חי פרדו והשתמש ועדה ותכנית חי המעבדה באוניברסיטת Purdue. עבודה זו מומנה על ידי הגנת המחקר המתקדם פרויקטי הסוכנות (DARPA) Microsystems טכנולוגית המשרד (MTO), תחת חסותו של ד&quot;ר ג&#39;ק וו ג&#39;ודי (jack.judy @ darpa.mil) כחלק מתכנית לטכנולוגיה העצבית האמינה, דרך החלל וחיל ים Warfare מערכות פיקוד (SPAWAR) מערכות המרכז (SSC) השקט גרנט מס N66001-11-1-4013. המחברים מבקשים להודות למיכאל Slipchenko, דון מוכן, גרג ריכטר, אהרון טיילור, וקווין Eliceiri לשיתוף המומחיות המיקרוסקופית שלהם.

<ol>
	<li>Schwartz, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+Neural+Prosthetics.">Cortical Neural Prosthetics.</a> Annual Review of Neuroscience. 27, 487-507 (2004).</li><li>Normann, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+Insight:+future+neuroprosthetic+therapies+for+disorders+of+the+nervous+system.">Technology Insight: future neuroprosthetic therapies for disorders of the nervous system.</a> Nature Clinical Practice Neurology. 3, 444-452 (2007).</li><li>Rousche, P., Normann, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+recording+capability+of+the+Utah+Intracortical+Electrode+Array+in+cat+sensory+cortex.">Chronic recording capability of the Utah Intracortical Electrode Array in cat sensory cortex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 82, 1-15 (1998).</li><li>Koivuniemi, A., Wilks, S. J., Woolley, A. J., Otto, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodal,+longitudinal+assessment+of+intracortical+microstimulation.">Multimodal, longitudinal assessment of intracortical microstimulation.</a> Prog. Brain Res. 194, 131-144 (2011).</li><li>Otto, K. J., Rousche, P. J., Kipke, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstimulation+in+auditory+cortex+provides+a+substrate+for+detailed+behaviors.">Microstimulation in auditory cortex provides a substrate for detailed behaviors.</a> Hearing Research. 210, 112-117 (2005).</li><li>Drake, K., Wise, K., Farraye, J., Anderson, D., BeMent, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+planar+multisite+microprobes+in+recordingextracellular+single-unit+intracortical+activity.">Performance of planar multisite microprobes in recordingextracellular single-unit intracortical activity.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 35, 719-732 (1988).</li><li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+the+interface+between+neural+tissue+and+chronically+implanted+intracortical+microelectrodes.">Stability of the interface between neural tissue and chronically implanted intracortical microelectrodes.</a> IEEE Trans. Rehab. Eng. 7, 315-326 (1999).</li><li>Williams, J. C., Hippensteel, J. A., Dilgen, J., Shain, W., Kipke, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+impedance+spectroscopy+for+monitoring+tissue+responses+to+inserted+neural+implants.">Complex impedance spectroscopy for monitoring tissue responses to inserted neural implants.</a> J. Neural Eng. 4, 410-423 (2007).</li><li>Polikov, V., Tresco, P., Reichert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Response+of+brain+tissue+to+chronically+implanted+neural+electrodes.">Response of brain tissue to chronically implanted neural electrodes.</a> Journal of Neuroscience Methods. 148, 1-18 (2005).</li><li>Szarowski, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+responses+to+micro-machined+silicon+devices.">Brain responses to micro-machined silicon devices.</a> Brain Research. 983, 23-35 (2003).</li><li>McConnell, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implanted+neural+electrodes+cause+chronic,+local+inflammation+that+is+correlated+with+local+neurodegeneration.">Implanted neural electrodes cause chronic, local inflammation that is correlated with local neurodegeneration.</a> J. Neural Eng. 6, 056003 (2009).</li><li>Holecko, M. M., Williams, J. C., Massia, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+the+intact+interface+between+neural+tissue+and+implanted+microelectrode+arrays.">Visualization of the intact interface between neural tissue and implanted microelectrode arrays.</a> J. Neural Eng. 2, 97-102 (2005).</li><li>Pierce, A. L., Sommakia, S., Rickus, J. L., Otto, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin-film+silica+sol-gel+coatings+for+neural+microelectrodes.">Thin-film silica sol-gel coatings for neural microelectrodes.</a> J. Neurosci. Methods. 180, 106-110 (2009).</li><li>Wilks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(3,4-ethylene+dioxythiophene)+(PEDOT)+as+a+micro-neural+interface+material+for+electrostimulation.">Poly(3,4-ethylene dioxythiophene) (PEDOT) as a micro-neural interface material for electrostimulation.</a> Frontiers in Neuroengineering. 2, (2009).</li><li>Johnson, M. D., Otto, K. J., Kipke, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+voltage+biasing+improves+unit+recordings+by+reducing+resistive+tissue+impedances.">Repeated voltage biasing improves unit recordings by reducing resistive tissue impedances.</a> IEEE Trans Neural Syst. Rehabil. Eng. 13, 160-165 (2005).</li><li>Otto, K. J., Johnson, M. D., Kipke, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage+pulses+change+neural+interface+properties+and+improve+unit+recordings+with+chronically+implanted+microelectrodes.">Voltage pulses change neural interface properties and improve unit recordings with chronically implanted microelectrodes.</a> IEEE Trans. Biomed. Eng. 53, 333-340 (2006).</li><li>Hama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale:+a+chemical+approach+for+fluorescence+imaging+and+reconstruction+of+transparent+mouse+brain.">Scale: a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain.</a> Nature Neuroscience. 14, 1481-1488 (2011).</li><li>Woolley, A. J., Desai, H. A., Steckbeck, M. A., Patel, N. K., Otto, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+characterization+of+the+brain-microdevice+interface+using+Device+Capture+Histology.">In situ characterization of the brain-microdevice interface using Device Capture Histology.</a> Journal of Neuroscience Methods. 201, 67-77 (2011).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> J. Vis. Exp. (65), e3564 (2012).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+labeling+and+visualization+of+blood+vessels+with+lipophilic+carbocyanine+dye+DiI.">Direct labeling and visualization of blood vessels with lipophilic carbocyanine dye DiI.</a> Nature Protocols. 3, 1703-1708 (2008).</li><li>Clendenon, S. G., Young, P. A., Ferkowicz, M., Phillips, C., Dunn, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+Tissue+Fluorescent+Imaging+in+Scattering+Specimens+Using+Confocal+Microscopy.">Deep Tissue Fluorescent Imaging in Scattering Specimens Using Confocal Microscopy.</a> Microscopy and Microanalysis. 17, 614-617 (2011).</li><li>Wilks, S. J., Richner, T. J., Brodnick, S. K., Kipke, D. R., Williams, J. C., Otto, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage+Biasing,+Cyclic+Voltammetry,+&amp;+Electrical+Impedance+Spectroscopy+for+Neural+Interfaces.">Voltage Biasing, Cyclic Voltammetry, &amp; Electrical Impedance Spectroscopy for Neural Interfaces.</a> J. Vis. Exp. (60), e3566 (2012).</li></ol>

המחברים אין גילויים רלוונטיים להכריז, כספי או אחר.

שיטה &quot;התקן-Capture היסטולוגיה&quot; (DCHist) הפגינה כאן מאפשרת הערכה היסטולוגית הקרובה של אינטראקציות השתמרו מורפולוגית בין רקמת מוח ושתלי רקמות. אוסף רקמות DCHist דורש הפרדה זהירה של רכיבי מכשיר גולגולת רכובה מרכיבים המושתלים במוח. DCHist דורש גם אוסף של פרוסת רקמה היסטולוגית עבה (&gt; 250 מיקרומטר). סעיפי רקמות אלה, שכותרתו פעם אחת, פינה, משובצים, והדמיה, יכולים לספק תובנה חדשות לפציעה או השתלת תגובה כרונית לאחר התקני שכינה. שימוש בכלים מתקדמים מיקרוסקופיה, בממשק בין רקמות ומכשיר יכול להיות צלם ונתח בפירוט גבוה כפי שמוצג במספרי 3-5. את הטכניקות שהוצגו בצורתם הנוכחית מסתמכות על היכולת לחפור לאט headcap עשוי מבטון בשני חלקי שיניים וKwik-סיל עד לנקודה של השתלת מכשיר.ניצול מלט שיניים שניתן נשרף או אחר הוסר ואלסטומר סיליקון ברור שדרכו ניתן להנחות מספריים קטנים חזותי לסייע מאוד בהפרדת המכשיר המושתל בהצלחה ממרכיביה גולגולת רכובה. מנסה לחתוך את המכשיר תחת הגולגולת ומעל למוח על מנת לאסוף אותו באתרם אינו מומלץ, כמו שתל גולגולת הרכובה יהיה נשלף ממוח כמות משמעותית. אמנם רזים שתלים, קטנים יותר, כגון MEAs סבך בודד מטכנולוגיות NeuroNexus, ניתנים ביותר DCHist, העקרונות אינם מוגבלים למכשיר אחד שאנקס או מערכי microelectrode. אוסף ואסטרטגיות הדמיה הם רחב החל על מכשירים רב סבך ושתלים גדולים יותר כגון cannulas, בדרישות להיות שהם חייבים להיות מופרדים מכל הר גולגולת ואספו בתוך קטע רקמה עבה. למרות שהכותבים מתמקדים בניתוח של רקמהשתלי קליפת מוח שמסביב, מכשירים המונעים עמוק יותר לתוך המוח יכולים גם להיות שנאספו וצלמו. עומק החדרת שתל לא אמור להשפיע על לכידתו של השתל בפרוסה ספקה המכשיר אינו חורג בפראות מהזווית הידועה של כניסה. מגבלות קיימות ליישום היעיל של שיטת DCHist. חלקי רקמת המוח מאתגרים לתמונה באמצעות מאה מיקרומטרים, במיוחד באזורים של חומר לבן, אם כי פתרוני סליקה אופטיים יכולים לשפר מעמקי הדמיה ברקמות שונות 21 באופן משמעותי. כדי לשפר עוד יותר את עומק הדמיה, מיקרוסקופיה העירור שני פוטונים יכולה להיות מועסקת יחד עם הסליקה האופטית תארה. מגבלה אפשרית נוספת של השיטה שתוארה יכולה להיות השיטות הספציפיות ניאון אימונוהיסטוכימיה ונוגדנים המועסקים על ידי חוקרים. דיפוזיה פסיבית בדרך כלל מניעה את השילוב של סמנים אלה דרך רקמות קבועותועל אתרי אנטיגן מחייבים. ריכוזים עובדים נוגדנים סופיים צריכים להיקבע על ידי חוקרים בכל מקרה לגוף על מנת למקסם את חדירת תווית תוך הימנעות רמות גבוהות של תיוג רקע. תיוג נוגדן לא צריך להיות משתנה בין פרוסות המעובדות באופן זהה, אך נוגדנים שונים עשויים להשתנות במידה ניכרת ביכולתם לחדור ולתייג אנטיגן שלהם, עם כמה נוגדני תיוג קלות אנטיגנים מאה רבות של מיקרומטר עמוקות ואחרים תיוג אנטיגנים רק עשרות של מיקרומטרים עמוקים. אנו מתארים שיפור דיפוזיה זו על ידי החלת תוויות נוגדנים בריכוזים גבוהים יותר מרגילים, לימים מרובים של יישום, ובתמיסה המכילות חומר ניקוי מהול וחסימה בסרום. מעת לעת מרפרף את הפרוסות גם מקדם אף תיוג. צעדי אחזור Antigen ותהליכי קיבעון חלופיים (glutaraldehyde, מיקרוגל, וכו &#39;למשל) עשויים להיות מתאימים לאנטיגנים ספציפיים. נוגדני fluoroch משניconjugates rome עשוי גם להשתנות בביצועים שלהם תיוג חלקים עבים, למרות שזה לא נצפה על ידי המחברים באמצעות תוויות Alexa פלואוריד מInvitrogen. לחלופין, נושאי בעלי חיים מהונדסים המבטאים חלבוני ניאון בסוגי התאים של עניין עשויים להיות מנוצלים כדי למנוע בעיות עם חדירת תווית נוגדנים, כמו חלבוני ניאון רבים, כגון eGFP, לשמור הקרינה שלהם לאחר טיפול פורמלדהיד, ועלול להיות מייד דמיינו בסעיפי רקמות. DCHist היא קבוצה חזקה של טכניקות כדי ללכוד ולנתח את ההשפעה של microdevices מושתל ברקמת המוח. צימוד זה עם פרוטוקול היסטולוגית בהערכת vivo של איכות electrophysiology ונתוני עכבת אלקטרודה 22 יכול לשפר באופן משמעותי את הבנתנו את המקורות הביולוגיים של השתנות פיזיולוגיה והשפלה שלנו. התחום תותב עצבי מושתל בפרט עשוי ליהנות מDCHist ima המפורטגינג של ממשק שלמות המכשיר / רקמות להודיע ​​פיתוח נוסף של מכשירי MEA ביולוגי ניטראליים.

תחום neuroprosthetic המחקר נועד לסייע לאנשים הסובלים ממוגבלויות והפרעות שונות, תוך עקיפת מבנים חולים או פגומים בגוף דרך מערכת העצבים מרכזיים המשיקה 1,2 התקנים. microdevices מוח מושתל-, כגון מערכי microelectrode (MEAs), ניתן להשתמש בו כדי להקליט או לגרות מבנים מוחיים, וכך תאפשר את הקמת ממשקים ארוכי טווח בין אלקטרוניקה ורקמות CNS 3-5. MEAs החודרני, מכשירים המונעים לרקמת המוח, לקיים הבטחה מסוימת כממשקים דו כיווניים בשל סמיכות שבמסגרתו הם מציגים את האלקטרודות לקבוצה קטנה יחסית של נוירונים סמוכים 6. עם זאת, תוצאה מורכבת רקמת תגובות מהשתלה לטווח הארוך של MEAs הנוקב, לעתים קרובות וכתוצאה מכך יחסים אלקטרופזיולוגים משתנים ובהדרגה משפילים אות לרעש מעל ימים עד חודשים, ועלייה בimped החשמליאהה בין אתרים אלקטרודה והקרקע 7,8. מקורותיה המשוערים של שינויים אלה כוללים הפעלה של מיקרוגליאה, astrocytosis תגובה לאורך microdevices, והפסד או הגירה של תאי עצב מהרקמה הסובבת להתקנים מושתלים 9-11. אתגר מרכזי להבנת שינויים ברקמות מסביב, MEAs חדירה הכרוני הוא הקושי בלכידת נתונים היסטולוגית של ממשק הרקמה השלם מסביב התקנים מושתלים כרוני 12. ניתוח היסטולוגית של הרקמה עם הממשק עדיין קיים מכשיר / רקמות הייתי לשפר את הפרוטוקולים היסטולוגית מכשיר להסרה הנוכחיות. עם מכשיר ללא הפרעה שנותר ברקמה, ההשפעה הביולוגית של אינטראקציות יחסית עדינות, כגון ניצול של ציפויים ביולוגיים 13,14 או סליקה החשמלית של משטח אלקטרודה 15,16, יכולה להיות צלמה ונתחה ביחס לשתל. Hפה אנחנו מדגימים שיטה לאסוף, לעבד, ותמונת ממשק microdevice השלם לניתוח מפורט מבוסס מיקרוסקופיה של רקמת המוח שמסביב. בשיטה זו, המכשיר ורקמות מוח נאספים בתוך עבה (&gt; 250 מיקרומטר) סעיף רקמות באמצעות vibratome. כדי לשפר את חדירת תווית היסטולוגית לפרוסות עבות האלה, תוויות וhistochemical immunohistochemical ניאון מיושמות בריכוזים גבוהים בפתרונות המכילים סרום וחומר ניקוי חסימה למספר רבים של ימים. פתרון סליקה אופטית מועסק לשפר מעמקי הדמיה מיקרוסקופית, והרקמה היא רכובה בתאים 2-צדדיים למיקרוסקופיית ליזר לאחר confocal 17. כדי ללכוד את הממשק היסטולוגית המלא, שלב translational מבוקר מחשב משמש במהלך ההדמיה לאסוף פנורמות Z-מחסנית לאורכו של שתלים. בנוסף להדמיה להחיל תוויות רקמות, איסוף החזרת ליזר חזרה משתליםוהעברת אור דרך הרקמה הן לסייע בתרגום ממשק המכשיר ביחס לרקמות. רקמה הוכנה באמצעות &quot;התקן-Capture היסטולוגיה&quot; זה (DCHist) פרוטוקול מספק גישת הדמיה לאינטראקציות השתמרה מורפולוגית הרקמות / מכשיר, ובכך משפר עם פרוטוקולי מכשיר להסרה היסטולוגית קודמים 18.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> ריאגנטים </td></tr><tr><td> Hoechst 33342 </td><td> Invitrogen </td><td> 14533 </td><td> הדנ&quot;א סמן </td></tr><tr><td> ארנב נגד Iba1 </td><td> Wako (יפן) </td><td> 019-19741 </td><td> נוגדן Monocyte </td></tr><tr><td> אקריליק שיניים </td><td> לאנג שיניים (מפיצים שונים) </td><td> אבקת סילון שן תיקון ונוזלי </td><td> Headcap הבנייה </td></tr><tr><td> Kwik-סיל </td><td> מכשירי Precision העולם </td><td> KWIK-SIL </td><td> כיסוי שתלי גולגולת חשופה </td></tr><tr><td> סרום עיזים רגיל </td><td> ImmunoResearch ג&#39;קסון </td><td> 005-000-121 </td><td> עיבוד רקמות </td></tr><tr><td> טריטון X-100 </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> X100-500ml </td><td> עיבוד רקמות </td></tr><tr><td> אוריאה </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> U4883 </td><td> ניקוי פתרון </td></tr><tr><td> גליצרול </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> G20225 </td><td> ניקוי פתרון </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> ציוד </td></tr><tr><td> מייקרו מספריים מעוגלים </td><td> מכשירי Precision העולם </td><td> 14208 </td><td> חיתוך שתל לפני הסרת המוח </td></tr><tr><td> סכיני גילוח </td><td> טד פלה </td><td> (גדלים שונים) </td><td> לשימוש עם בלוק המוח </td></tr><tr><td> אקריליק המוח Matrice </td><td> טד פלה </td><td> 15054 </td><td> בלוק מוח כדי ליצור מטוס ראשוני ברקמה </td></tr><tr><td> מגלשות פלסטיק </td><td> טד פלה </td><td> 260225 </td><td> רקמת הרכבה </td></tr><tr><td> כיסוי זכוכית </td><td> טד פלה </td><td> (גדלים שונים) </td><td> רקמת הרכבה </td></tr><tr><td> מערכים אלקטרודה </td><td> טכנולוגיות NeuroNexus </td><td> (עיצובים שונים) </td><td> MEAs דוגמה </td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> ליקה </td><td> VT1000 S </td><td> מערכת ספציפית בשימוש בשיטה שהוצגה </td></tr><tr><td> להבי vibratome </td><td> (ספקים שונים) </td><td></td><td> איסוף פרוסות </td></tr><tr><td> צלחות 24 גם </td><td> (ספקים שונים) </td><td></td><td> אחסון ועיבוד פרוסות רקמות </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ confocal עם שלב ממונע XY לסריקה </td><td> מיקרוסקופיה Carl Zeiss </td><td> תוכנת Zeiss LSM 710 ו &#39;זן 2010&#39; </td><td> מערכת ספציפית בשימוש בשיטה שהוצגה </td></tr><tr><td> מלחם </td><td> (ספקים שונים) </td><td></td><td> חפירת headcap </td></tr></tbody></table>

intact histological characterization of brain-implanted microdevices and surrounding tissue

מחקר לעיצוב והניצול של microdevices מוח מושתל-, כגון מערכי microelectrode, שואף לייצר מכשירים רלוונטיים קליני כי ממשק כרוני עם רקמות מוח. רקמה הסובבת שתלים אלה היא חשב להגיב לנוכחות של המכשירים לאורך זמן, הכוללת את הקמתה של &quot;צלקת גלייה&quot; בידוד סביב את המכשירים. עם זאת, ניתוח היסטולוגית של רקמות שינויים אלה מבוצע בדרך כלל לאחר explanting המכשיר, בתהליך שיכול לשבש את המורפולוגיה של הרקמה של עניין. כאן אנו מדגימים פרוטוקול שבו התקנים מושתלים-קליפת המוח נאספים שלמים ברקמות מוח מכרסם. אנו מתארים כיצד, perfused פעם אחת עם מייצב, מוח מוסרים ופרוסים בדרך שתמנע מכשירי explanting. אנחנו נתווה תיוג נוגדן ניאון ושיטות סליקה אופטיות שימושיות לייצור רקמות אינפורמטיבי, עדיין עבותסעיף. לבסוף, אנחנו מדגימים את ההרכבה וההדמיה של חלקי רקמות אלו על מנת לחקור את הממשק הביולוגי סביב מכשירי מוח מושתל.

MEAs מוח מושתל-ניתן לאסוף בפרוסות רקמה על ידי הפרדת רכיבים כלשהם גולגולת רכובה ראשונה ממרכיבי המוח המשובץ-. 2a האיור מציג את התוצאות של הסרת צד אחד של מלט headcap שיניים וחלק מKwik-סיל מקיף MEA כבל בגולגולת חולדה. מלחם רגיל מסיר מלט השיניים וKwik-סיל במנדף. הכבלים וכל מבנים שאינם מושתלים MEA-קוצצו הבאים עם מספרי מייקרו בחפירות באיטיות דרך Kwik-סיל מטה אל פני השטח של המוח הקבוע. אחרי שחתך, תיוג, וניקוי רקמות, שקופיות פשוטות מחוייט שימושיות להרכבה על פרוסות רקמה העבות (האיור 2b). פרוסת מוח רכוב מכילה microdevice מושתל מוצגת באיור 2 ג. דימות באמצעות שני הצדדים של השקופית יכולה לאפשר לך להעריך את הממשק סביב מכשיר, כפי שמודגם באיור 3 </strong&gt;, שם המיקרוגליאה לאורך הגיבוי של סיליקון MEA גלויה מצד אחד (איור 3 א) והמיקרוגליאה יחד אתרים אלקטרודה ועקבות גלויים בצד השני (איור 3 ב). ברגע שעלה, רקמה יכולה להיות צלמה באמצעות תרגום במת XY. סקירה של תוויות ניאון ברחבי פרוסות רקמות שלמות יכולה להיוצר בכל הרזולוציה הרצויה (איור 4). בחינה מפורטת של ממשק הרקמה נשמר מורפולוגית סביב microdevices המושתל ניתן לאסוף בהגדלה חזקה לניתוח של תגובת הרקמות המקומית (איור 5). <img src="/files/ftp_upload/50126/50126fig1.jpg" alt="איור 1" fo:content-width="6.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50126/50126fig1highres.jpg"/> איור 1. ניתוחי מוח סקירה כללי של הליך. (AC) מייקרו שתל הם finalized בשכבת Kwik-סיל פולימר המקיף את המכשיר באופן מיידי, ולאחר מכן כיסוי בטון אקרילי. (ד, ה) המתת חסד להלן, שכבת אקריליק נשרפה, ורכיבי גולגולת רכובה של המכשיר מופרדים מרכיבים מושתלים על ידי חיתוך באמצעות סיליקון אלסטומר. (ו, ז) המוח אז הוסר מהגולגולת והוא חתך ועלה לבמת vibratome. (HK) פרוסות רקמות נאספות, כוללת פרוסת רקמה המכילה את המכשיר. (יב) רקמות אז יכולות להיות מעובד ורכובות בתאים מותאמים אישית למיקרוסקופיה המפורטת. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50126/50126fig1large.jpg" target="_blank">לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.</a> <img src="/files/ftp_upload/50126/50126fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. () למחוק su סיליקון אלסטומר Kwik-סילrrounding כבל האלקטרודה מערך (חץ) נחשף על ידי שריפה את החלון בכיפת בטון השיניים בראש מכרסם perfused באמצעות מלחם. (ב) כדי להתאים את ההדמיה לכל צד של פרוסת רקמה עבה, פשוט &quot;Slide-תאים&quot; יכול להתבצע על ידי גזירת שקופיות פלסטיק ודבקות coverglass לכל צד סביב הרקמות והרכבת פתרון. (ג) פרוסת רקמת מוח חולדה עם שתל שלם (חץ אדום) מוצגת לאחר ההרכבה. כל הצד של הרקמה הוא במהירות נגיש להדמיה מיקרוסקופית עם ההגדרה הזאת. לקנה מידה, פנל (א) הוא 25 מ&quot;מ לרוחב בתחתית, בעוד שפנלים (ב, ג) הם 80 מ&quot;מ לרוחב בתחתית. <img src="/files/ftp_upload/50126/50126fig3.jpg" alt="איור 3" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50126/50126fig3highres.jpg"/> איור 3. Int המקסימאליZ-תחזיות של 40 ערימות של תמונות עבות מיקרומטר, ensity נאסף מסביב לחלק האחורי (א) ו (ב) מול מערך microelectrode מושתל. Microglia (מסומן עם אנטי Iba1 וAlexa פלואוריד 633, לבן) והחזרת אור ליזר (אדום), שנאספה מפני השטח של המכשיר, שצלמו ברצף משני הצדדים של פרוסת רקמה 400 מיקרומטר עבה. ככל שהשתלים במוח הם לעתים קרובות אטומים, גובר עם גישה אופטית לשני הצדדים מספק תצוגה ברורה של מבני שכותרתו &quot;מאחורי רקמות&quot; השתל ביחס למטרת מיקרוסקופ. 50 מיקרומטר סרגל קנה מידה. <img src="/files/ftp_upload/50126/50126fig4.jpg" alt="איור 4"/> איור 4. פרוסת DCHist מתויגת צלמה באמצעות שלב מבוקר מחשב בסריקת ליזר מיקרוסקופ confocal. (א) גרעין תא (מוכתם בHoechst 33342) וכן (ב) מונוציטים / מיקרוגליאה(מסומן באנטי Iba1) היו צלם במקביל בערוצים נפרדים. (ג) העברת אור וההחזרה היו גם נאספו, המראים את המיקום של השתל 4-השבוע ביחס לHoechst וIba1 נתונים. (ד) כיסוי של כל ערוצי שידור, אלא מצוין גם כן. אזור המלבן הלבן הרחיב בתמונות המופיעות בצד ימין. מ&quot;מ היקף בר 1. <img src="/files/ftp_upload/50126/50126fig5.jpg" alt="איור 5" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50126/50126fig5highres.jpg"/> איור 5. שימוש במיקרוסקופ הבמה מבוקר מחשב ותוכנה מתאימה, נתוני הדמיה פנורמי ניתן לאסוף סביב השתל. החזרה () והעברה (ב) לאפשר לוקליזציה של המכשיר, בעוד תוויות נוגדנים או כימיות ניאון (ג, תיוג אנטי Iba1 של המיקרוגליאה ומקrophages) לאפשר הדמיה מפורטת של מרכיבי רקמות לאורך ממשק הרקמה השלמה. 200 מיקרומטר סרגל קנה מידה.

Watch this Scientific Journal Video about Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue at JoVE.com

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

כאן אנו מציגים שיטה היסטולוגית ללכיד, סימון, ניקוי אופטי, והדמית ממשק רקמת המוח השלם סביב microdevices המושתל כרוני ברקמת מוח מכרסם. תוצאות מהטכניקות הכוללות בשיטה זו הן שימושיות להבנת ההשפעה של-שתלים במוח חודרניים שונים ברקמות המקיפות אותם.

אפיון היסטולוגית שלם של Microdevices מוח מושתלים-ורקמה סובבת

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

intact-histological-characterization-brain-implanted-microdevices

Research

JoVE Journal

Neuroscience

16.7K Views.  Purdue University. כאן אנו מציגים שיטה היסטולוגית ללכיד, סימון, ניקוי אופטי, והדמית ממשק רקמת המוח השלם סביב microdevices המושתל כרוני ברקמת מוח מכרסם. תוצאות מהטכניקות הכוללות בשיטה זו הן שימושיות להבנת ההשפעה של-שתלים במוח חודרניים שונים ברקמות המקיפות אותם.

Video: Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

Scalable Fluidic Injector Arrays for Viral Targeting of Intact 3-D Brain Circuits

Our understanding of neural circuits--how they mediate the computations that subserve sensation, thought, emotion, and action, and how they are corrupted in neurological and psychiatric disorders--would be greatly facilitated by a technology for rapidly targeting genes to complex 3-dimensional neural circuits, enabling fast creation of "circuit-level transgenics." We have recently developed methods in which viruses encoding for light-sensitive proteins can sensitize specific cell types to millisecond-timescale activation and silencing in the intact brain. We here present the design and implementation of an injector array capable of delivering viruses (or other fluids) to dozens of defined points within the 3-dimensional structure of the brain (Figure. 1A, 1B). The injector array comprises one or more displacement pumps that each drive a set of syringes, each of which feeds into a polyimide/fused-silica capillary via a high-pressure-tolerant connector. The capillaries are sized, and then inserted into, desired locations specified by custom-milling a stereotactic positioning board, thus allowing viruses or other reagents to be delivered to the desired set of brain regions. To use the device, the surgeon first fills the fluidic subsystem entirely with oil, backfills the capillaries with the virus, inserts the device into the brain, and infuses reagents slowly (&lt;0.1 microliters/min). The parallel nature of the injector array facilitates rapid, accurate, and robust labeling of entire neural circuits with viral payloads such as optical sensitizers to enable light-activation and silencing of defined brain circuits. Along with other technologies, such as optical fiber arrays for light delivery to desired sets of brain regions, we hope to create a toolbox that enables the systematic probing of causal neural functions in the intact brain. This technology may not only open up such systematic approaches to circuit-focused neuroscience in mammals, and facilitate labeling of brain regions in large animals such as non-human primates, but may also open up a clinical translational path for cell-specific optical control prosthetics, whose precision may enable improved treatment of intractable brain disorders. Finally, such devices as described here may facilitate precisely-timed fluidic delivery of other payloads, such as stem cells and pharmacological agents, to 3-dimensional structures, in an easily user-customizable fashion.

Controlling and analyzing neural circuits in vivo would be facilitated by a technology for delivery of viruses and other reagents to desired 3-dimensional sets of brain regions. We demonstrate customized fluidic injector array fabrication, and delivery of virally-encoded optical sensitizers, enabling optical manipulation of complex brain circuits.

Scalable Fluidic Injector מערכים עבור ויראלי הכוונת של 3-D מעגלים פגוע המוח

Our understanding of neural circuits--how they mediate the computations that subserve sensation, thought, emotion, and action, and how they are corrupted ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding fundamental biological mechanisms. Striking progress has been particularly evident in Drosophila, whose extensive toolkit of mutants and transgenic lines provides a convenient model to study evolutionarily-conserved developmental and cell biological mechanisms. We are interested in understanding the mechanisms that control cell fate specification in the adult peripheral nervous system (PNS) in Drosophila. Bristles that cover the head, thorax, abdomen, legs and wings of the adult fly are individual mechanosensory organs, and have been studied as a model system for understanding mechanisms of Notch-dependent cell fate decisions. Sensory organ precursor (SOP) cells of the microchaetes (or small bristles), are distributed throughout the epithelium of the pupal thorax, and are specified during the first 12 hours after the onset of pupariation. After specification, the SOP cells begin to divide, segregating the cell fate determinant Numb to one daughter cell during mitosis. Numb functions as a cell-autonomous inhibitor of the Notch signaling pathway.
Here, we show a method to follow protein dynamics in SOP cell and its progeny within the intact pupal thorax using a combination of tissue-specific Gal4 drivers and GFP-tagged fusion proteins 1,2.This technique has the advantage over fixed tissue or cultured explants because it allows us to follow the entire development of an organ from specification of the neural precursor to growth and terminal differentiation of the organ. We can therefore directly correlate changes in cell behavior to changes in terminal differentiation. Moreover, we can combine the live imaging technique with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) system to assess the dynamics of tagged proteins in mitotic SOPs under mutant or wildtype conditions. Using this technique, we and others have revealed novel insights into regulation of asymmetric cell division and the control of Notch signaling activation in SOP cells (examples include references 1-6,7 ,8).

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

In this video, we describe a method for live cell imaging of asymmetrically dividing sensory organ progenitor cells and epidermal cells in intact Drosophila pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Electrophysiological Characterization of GFP-Expressing Cell Populations in the Intact Retina

Studying the physiological properties and synaptic connections of specific neurons in the intact tissue is a challenge for those cells that lack conspicuous morphological features or show a low population density. This applies particularly to retinal amacrine cells, an exceptionally multiform class of interneurons that comprise roughly 30 subtypes in mammals1. Though being a crucial part of the visual processing by shaping the retinal output2, most of these subtypes have not been studied up to now in a functional context because encountering these cells with a recording electrode is a rare event.
Recently, a multitude of transgenic mouse lines is available that express fluorescent markers like green fluorescent protein (GFP) under the control of promoters for membrane receptors or enzymes that are specific to only a subset of neurons in a given tissue3,4. These pre-labeled cells are therefore accessible to directed microelectrode targeting under microscopic control, permitting the systematic study of their physiological properties in situ. However, excitation of fluorescent markers is accompanied by the risk of phototoxicity for the living tissue. In the retina, this approach is additionally hampered by the problem that excitation light causes appropriate stimulation of the photoreceptors, thus inflicting photopigment bleaching and transferring the retinal circuits into a light-adapted condition. These drawbacks are overcome by using infrared excitation delivered by a mode-locked laser in short pulses of the femtosecond range. Two-photon excitation provides energy sufficient for fluorophore excitation and at the same time restricts the excitation to a small tissue volume minimizing the hazards of photodamage5. Also, it leaves the retina responsive to visual stimuli since infrared light (&gt;850 nm) is only poorly absorbed by photopigments6.
In this article we demonstrate the use of a transgenic mouse retina to attain electrophysiological in situ recordings from GFP-expressing cells that are visually targeted by two-photon excitation. The retina is prepared and maintained in darkness and can be subjected to optical stimuli which are projected through the condenser of the microscope (Figure 1). Patch-clamp recording of light responses can be combined with dye filling to reveal the morphology and to check for gap junction-mediated dye coupling to neighboring cells, so that the target cell can by studied on different experimental levels.

This article depicts the recording of individual cells from fluorescently tagged neuronal populations in the intact mouse retina. By using two-photon infrared excitation transgenetically labeled cells were targeted for patch-clamp recording to study their light responses, receptive field properties, and morphology.

אפיון אלקטרו של ה-GFP, הבעת אוכלוסיות תאים ברשתית אינטקט

Studying the physiological properties and synaptic connections of specific neurons in the intact tissue is a challenge for those cells that lack ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram recordings. This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments, allowing recording of neural activity. Immobilization of the adult requires a mechanism to deliver dissolved oxygen to the gills in lieu of buccal and opercular movement. With our technique, animals are immobilized and perfused with habitat water to fulfill this requirement. A craniotomy is performed under tricaine methanesulfonate (MS-222; tricaine) anesthesia to provide access to the brain. The primary electrode is then positioned within the craniotomy window to record extracellular brain activity. Through the use of a multitube perfusion system, a variety of pharmacological compounds can be administered to the adult fish and any alterations in the neural activity can be observed. The methodology not only allows for observations to be made regarding changes in neurological activity, but it also allows for comparisons to be made between larval and adult zebrafish. This gives researchers the ability to identify the alterations in neurological activity due to the introduction of various compounds at different life stages.

This paper describes how an adult zebrafish can be immobilized, intubated, and used for in vivo electrophysiological experiments to allow recordings and manipulation of neural activity in an intact animal.

הקלטת אלקטרו במוח של דג הזברה למבוגר שלמה

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first neural circuit in the AOS pathway, called the accessory olfactory bulb (AOB), plays an important role in establishing sex-typical behaviors such as territorial aggression and mating. This small (&#60;1 mm3) circuit possesses the capacity to distinguish unique behavioral states, such as sex, strain, and stress from chemosensory cues in the secretions and excretions of conspecifics. While the compact organization of this system presents unique opportunities for recording from large portions of the circuit simultaneously, investigation of sensory processing in the AOB remains challenging, largely due to its experimentally disadvantageous location in the brain. Here, we demonstrate a multi-stage dissection that removes the intact AOB inside a single hemisphere of the anterior mouse skull, leaving connections to both the peripheral vomeronasal sensory neurons (VSNs) and local neuronal circuitry intact. The procedure exposes the AOB surface to direct visual inspection, facilitating electrophysiological and optical recordings from AOB circuit elements in the absence of anesthetics. Upon inserting a thin cannula into the vomeronasal organ (VNO), which houses the VSNs, one can directly expose the periphery to social odors and pheromones while recording downstream activity in the AOB. This procedure enables controlled inquiries into AOS information processing, which can shed light on mechanisms linking pheromone exposure to changes in behavior.

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

The mouse accessory olfactory bulb (AOB) has been difficult to study in the context of sensory coding. Here, we demonstrate a dissection that produces an ex vivo preparation in which AOB neurons remain functionally connected to their peripheral inputs, facilitating research into information processing of mouse pheromones and kairomones.

Ex Vivo הכנות של הנורה Vomeronasal האיברים ואבזר חוש הריח הפגועה

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

3D Modeling of the Lateral Ventricles and Histological Characterization of Periventricular Tissue in Humans and Mouse

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional units of the ventricles are ciliated epithelial cells termed ependymal cells, which line the ventricles and through ciliary action are capable of generating laminar flow of CSF at the ventricle surface. This monolayer of ependymal cells also provides barrier and filtration functions that promote exchange between brain interstitial fluids (ISF) and circulating CSF. Biochemical changes in the brain are thereby reflected in the composition of the CSF and destruction of the ependyma can disrupt the delicate balance of CSF and ISF exchange. In humans there is a strong correlation between lateral ventricle expansion and aging. Age-associated ventriculomegaly can occur even in the absence of dementia or obstruction of CSF flow. The exact cause and progression of ventriculomegaly is often unknown; however, enlarged ventricles can show regional and, often, extensive loss of ependymal cell coverage with ventricle surface astrogliosis and associated periventricular edema replacing the functional ependymal cell monolayer. Using MRI scans together with postmortem human brain tissue, we describe how to prepare, image and compile 3D renderings of lateral ventricle volumes, calculate lateral ventricle volumes, and characterize periventricular tissue through immunohistochemical analysis of en face lateral ventricle wall tissue preparations. Corresponding analyses of mouse brain tissue are also presented supporting the use of mouse models as a means to evaluate changes to the lateral ventricles and periventricular tissue found in human aging and disease. Together, these protocols allow investigations into the cause and effect of ventriculomegaly and highlight techniques to study ventricular system health and its important barrier and filtration functions within the brain.

Using MRI scans (human), 3D imaging software, and immunohistological analysis, we document changes to the brain&#8217;s lateral ventricles. Longitudinal 3D mapping of lateral ventricle volume changes and characterization of periventricular cellular changes that occur in the human brain due to aging or disease are then modeled in mice.

3D דוגמנות של רוחב החדרים והיסטולוגית אפיון רקמות סביב חדרי מוח בבני אדם ועכבר

The ventricular system carries and circulates cerebral spinal fluid (CSF) and facilitates clearance of solutes and toxins from the brain. The functional ...

Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

Pigs have become increasingly popular in large-animal translational neuroscience research as an economically and ethically feasible substitute to non-human primates. The large brain size of the pig allows the use of conventional clinical brain imagers and the direct use and testing of neurosurgical procedures and equipment from the human clinic. Further macroscopic and histological analysis, however, requires postmortem exposure of the pig central nervous system (CNS) and subsequent brain removal. This is not an easy task, as the pig CNS is encapsulated by a thick, bony skull and spinal column. The goal of this paper and instructional video is to describe how to expose and remove the postmortem pig brain and the pituitary gland in an intact state, suitable for subsequent macroscopic and histological analysis.

The goal of this paper and instructional video is to describe how to expose and remove the postmortem pig brain and pituitary gland in an intact state, suitable for subsequent macroscopic and histological analysis.

הסרת &quot;חוברת הדרכת עריפת הראש, פתיחת גולגולת, ו Brain: חשיפה של החזיר CNS לניתוח היסטולוגית

Pigs have become increasingly popular in large-animal translational neuroscience research as an economically and ethically feasible substitute to ...

Electroencephalographic, Heart Rate, and Galvanic Skin Response Assessment for an Advertising Perception Study: Application to Antismoking Public Service Announcements

The evaluation of advertising, products, and packaging is traditionally performed through methods based on self-reports and focus groups, but these approaches often appear poorly accurate in scientific terms. Neuroscience is increasingly applied to the investigation of the neurophysiological bases of the perception of and reaction to commercial stimuli to support traditional marketing methods. In this context, a particular sector or marketing is represented by public service announcements (PSAs). The objective of this protocol is to apply electroencephalography (EEG) and autonomic signal analysis to study responses to selected antismoking PSAs. Two EEG indices were employed: the frontal alpha band EEG asymmetry (the Approach Withdrawal (AW) index) and the frontal theta (effort index). Furthermore, the autonomic Emotional Index (EI) was calculated, as derived from the Galvanic Skin Response (GSR) and Heart Rate (HR) signals. The present protocol describes a series of operational and computational steps required to properly estimate, through the aforementioned indices, the emotional and cerebral reaction of a group of subjects towards a selected number of antismoking PSAs. In particular, a campaign characterized by a symbolic communication style (classified as "awarded" on the basis of the prizes received by specialized committees) obtained the highest approach values, as estimated by the AW index. A spot and an image belonging to the same PSA campaign based on the "fear arousing appeal" and with a narrative/experiential communication style (classified as "effective" on the basis of the economical/health-related improvements promoted) reported the lowest and highest effort values, respectively. This is probably due to the complexity of the storytelling (spot) and to the immediateness of the image (a lady who underwent a tracheotomy). Finally, the same "effective" campaign showed the highest EI values, possibly because of the empathy induced by the testimonial and the explicitness of the message.

The following protocol describes a series of operational and computational steps required to properly estimate the emotional and cerebral reaction of a group of subjects towards a selected number of Public Service Announcements (PSAs) against smoking, aired in the USA and Europe during the period between 1998 and 2015.

Electroencephalographic, קצב הלב, והערכה בעור על התפיסה פרסום מחקר: ליישום תשדירי שירות תדמית

The evaluation of advertising, products, and packaging is traditionally performed through methods based on self-reports and focus groups, but these ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies of this phenomenon have been performed in either models with severe intrauterine ischemia or models with gradient degree of intrauterine hypoperfusion. No study has been performed in a model on uniform mild intrauterine hypoperfusion (MIUH). Two models have been used for studies of MIUH: a model based on suture ligation of either side of the arterial arcade formed with the uterine and ovarian arteries, and a transient model based on clipping the bilateral ovarian arteries and aorta having patency. Those two rodent models of MIUH have some limitations, e.g., not all fetuses are subjected to MIUH, depending on their position in the uterine horn. In our MIUH model, all fetuses are subjected to a comparable level of intrauterine hypoperfusion. MIUH was achieved by mild stenosis of all four arteries feeding the uterus, i.e., the bilateral uterine and ovarian arteries.
Arterial stenosis was induced by metal microcoils wrapped around the feeding arteries. Producing arterial stenosis with microcoils allowed us to control, optimize, and reproduce decreased blood flow with very little inter-animal variability and a low mortality rate, thus enabling accurate evaluation. When microcoils with an inner diameter of 0.24 mm were used, the blood flow in both the placenta and fetus was mildly decreased (approximately 30% from the pre-stenosis level in the placenta). The offspring of our MIUH model clearly demonstrates long-lasting alterations in neurological, neuroanatomical and behavioral test results.

Mild intrauterine hypoperfusion was produced by artery stenosis with metal microcoils wrapped around the uterine and ovarian arteries in rats at embryonic day 17. This procedure produced prenatal hypoperfusion and intrauterine growth restriction.

מודל עכברוש של זילוח תוך רחמי קלה עם היצרות Microcoil

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and motor phenotypes involved in different patterns of neurotrophic factor gene expression and other biological processes, affecting nerve regeneration. The present study has established a protocol to obtain highly purified rat sensory and motor SCs and fibroblasts more rapidly. The ventral root (motor nerve) and the dorsal root (sensory nerve) of neonatal rats (7-days-old) were dissociated and the cells were cultured for 4-5 days, followed by isolation of sensory and motor fibroblasts and SCs by combining differential digestion and differential adherence methods sequentially. The results of immunocytochemistry and flow cytometry analyses showed that the purity of the sensory and motor SCs and fibroblasts were &#62;90%. This protocol can be used to obtain a large number of sensory and motor fibroblasts/SCs more rapidly, contributing to the exploration of sensory and motor nerve regeneration.

Here, we present a method to purify fibroblasts and Schwann cells from sensory and motor nerves in vitro.

טיהור של פיברותקיעות ותאי Schwann מפני חושים ומוטוריים עצבים בחוץ גופית

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...