שיטה זו יכולה לסייע לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח על ידי מתן שיטה פשוטה יותר, פחות נוטה לשגיאות, ושיטה כמותית יותר לאימות נגעים ואיתור מיקומי אלקטרודה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת אימות של נגעים ואתרי אלקטרודה במוח כולו ללא צורך בניתוח. המוצר הסופי הוא נפח תלת-מימדי דיגיטלי של המוח ומוחות מרובים יכולים להיות מעובדים במקביל.
למרות שיטה זו יוכח בחולדה, זה יכול להיות מיושם גם על אורגניזמים אחרים, כגון עכברים פרושים זברה. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו כי כמה צעדים דורשים טיפול מסוים כדי להבטיח את התוצאות הטובות ביותר. כדי להתחיל, למקם מוח שחולץ בתת פתרון שפע בצינור חרוט 50 מיליליטר.
אחסן את הדגימה במשך יומיים עד שלושה עם רעידות עדינות בארבע מעלות צלזיוס. ודא כי אוסמיניום מדולל במים ולא חיץ. הסיבה לכך היא כי המים יפעלו כמו דטרגנט מתון, המאפשר אוסמיניום לחדור עמוק לתוך הרקמה.
הכינו 50 מיליליטר של 2% אוסיום טטרוקסיד במים מזוקקים כפולים. ואז למקם את המוח בצינור חרוט חדש 50 מיליליטר ולהוסיף את פתרון אוסיום tetroxide. סגור את הצינור ואתום אותו עם סרט פרפין כדי למנוע דליפות.
אחסן את הצינור האטום בארבע מעלות צלזיוס עם רעידות עדינות במשך שבועיים. ודא כי הצינור ממוקם אופקית. המוח עבה מאוד ודרכים ארוכות לנסוע על ידי דיפוזיה.
הצבת הצינור אופקית תאפשר לאוסמיניום לנוע עמוק יותר לתוך הרקמה. לאחר הדגירה מדגם במשך שבועיים, לשטוף אותו עם מים מזוקקים פעמיים חמש פעמים כדי להסיר את כל osmium tetroxide מאוגד מהדגימה. לאחר מכן, לשטוף את המדגם עם מים מזוקקים כפול במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס.
החלף את המים מזוקקים כפול עם ארבעה דילול של אתנול כדי לייבש את המדגם. כדי להתחיל את תהליך חדירת שף, להעביר את המדגם דרך שלושה אצטון ושלושה דילולים אצטון שף, ולאחר מכן לטבול את המדגם ב 100% שף בטמפרטורת החדר כדי להמשיך את תהליך החדירה. לאחר מכן, להעביר את הדגימה לתבנית חד פעמית.
להחדיר את המדגם עם טרי 100% שדון במשך ארבע שעות בטמפרטורת החדר. דגה את הדגימה בתנור ואקום במשך 15 דקות ב 45 מעלות צלזיוס. ואז לרפא את הדגימה בתנור במשך 48 שעות ב 60 מעלות צלזיוס.
לבסוף, כאשר המדגם סיים לרפא, לקלף את התבנית החד פעמית ולסרוק אותו עם מכונת מיקרו CT. בניתוח מסורתי, יש לציין מראש את כיוון המוח. באמצעות שיטת מיקרו-CT זו, ניתן לתפעל את הנפח הדיגיטלי של המוח המדגם בשלושה ממדים ולמעשה לחתוך אותו לכל כיוון.
סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים של מוח החולדה המוכן מאשרת כי הרקמה לא נפגעה באופן משמעותי לצורך הדמיית מיקרו-CT. מוח פרוש זברה היה גם מוכן נסרק על פי פרוטוקול זה כדי לבדוק את התועלת של שיטה זו על מוחות בעלי חיים קטנים אחרים. טכניקה זו יכולה לשמש כדי למצוא נגעים פני השטח במוח, כמו גם נגעים עמוק בתוך המוח.
טכניקה זו יכולה להיות מיושמת גם על המיקום של טטרודים בודדים במקום, נגעים אלקטרוליטיים, מסלולי אלקטרודה, מערכי טטרודה במקום, ובדיקות סיליקון במקום. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לאפשר למוח דגירה מספיק זמן עם מספיק תסיסה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו אופטוגנטיקה והדמיה של שני פוטון על מנת לענות על שאלות נוספות על התפקיד של אזורי מוח שונים בהתנהגויות שונות.
טכניקה זו יכולה לאפשר לחוקרים בתחום מדעי המוח לחקור טוב יותר את יחסי המבנה-תפקוד בין המוח להתנהגות בחולדות, עכברים, ציפורי שיר ובעלי חיים קטנים אחרים. אל תשכח כי עבודה עם אוסמיניום יכול להיות מסוכן מאוד אמצעי זהירות, כגון ללבוש כפפות ולעבוד במכסה המנוע ואקום תמיד צריך לקחת בעת ביצוע הליך זה.
