עבודה זו נתמכה על ידי איגוד לב predoctoral 788,808-41,910 אחוות האמריקנית, NIH-NINDS NS-NS-ו066,001 055,832, והמרכז לחקר שמיעת NIH הדרכה גרנט 1T32DC010775-01.

1. התחלת עבודה: מכשירי ניתוח דרוש ראה איור 4 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקדח שיניים (Kavo ציוד דנטלי, דגם: UMXL-TM), תרגיל 2 סיביות, ותרגיל 3 סיביות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחטים תת עורי שתיים ~ 30 מד </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משונן פינצטה, מעוגל טיפ אופציונלי (יכולה להיות מועילה אך לא הכרחית) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שתי פינצטה קצה קנס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספרי תיל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חוט תפירה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספריים מיקרו </li></ol> 2. יצירת החלון כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדמה: נהלים עומדים בהנחיות NIH ואושרו על ידי טיפול בבעלי חי אירווין קליפורניה וועדת שימוש. נושאים ניסיוניים הם 295-400 גרם גברי ספראג Dawley חולדות (צ&#39;ארלס ריבר מעבדות, ווילמינגטון, מסצ&#39;וסטס, ארה&quot;ב) ואמור לשמש את הליך ההרדמה הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק intraperitoneally עכברוש עם בולוס pentobarbital נתרן (55 מ&quot;ג / ק&quot;ג BW) ואחרי זריקה תוך שרירית של אטרופין (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג, BW) בשעותרגל IND, ומנוהלים על 3.0 סמ&quot;ק של דקסטרוז 5% במים מתחת לעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוספת נתרן pentobarbital (27.5 מ&quot;ג / ק&quot;ג, BW) זריקות לפי צורך. לנהל משחה אנטיביוטית עיניים לעיניים כדי להגן על הקרניות במהלך ההליכים הבאים. לנהל 5% דקסטרוז (3 מ&quot;ל) ואטרופין (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג, BW) כל שש שעות להקטין הפרשות בדרכי הנשימה במהלך הרדמה. טמפרטורת גוף דרך אמצעי בדיקה רקטלית, ולשמור על טמפרטורת גוף על 37 מעלות צלזיוס בשמיכת תרמית ויסות עצמית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את MCA על ידי אחד מאלה: <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דילול 2 x 2 מ&quot;מ הדמיה / המחשת חלון מעל הקליפה החושית באמצעות גודל מקדח HP 3 עד הגולגולת היא כמעט שקופה ולאחר מכן דלילה לשקיפות מלאה באמצעות גודל של HP המקדח 2. המיקום של MCA ואז ניתן לראות דרך חלון זה ואת מסלולו הפרוקסימלי משמש למיקום המשוער של המגזר הראשוני. MCA בדרך כלל יפעל באלכסון זהבחלון מקורי לזנב / הגחון לכיוון גב (לדוגמה, משמאל לימין למטה / למעלה בעת צפייה באונה שמאלית מנקודת מבטו של המנתח). החלון כירורגית אז יכול להיות שנוצר מעל בי המשקיף מעריך מגזר M1 (פרוקסימלי להסתעפות קליפת המוח) כדי להיות ממוקם על בסיס ענפי דיסטלי הגלויים מבעד לחלון הראשון. על מנת לצמצם את כמות הגולגולת שהוסרה על מנת לקבל גישה לMCA, / חלון ההדמיה חזותי צריך להיות ממוקם קרוב, אך בנפרד מהחלון כירורגית. או </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלון כירורגי קטן צריך להיות ממוקם כ 3 מ&quot;מ קדמי ו1 מ&quot;מ לרוחב לovale הנקב או עצב הלסת, קרוב לבמת קשת 30,33,34. על מנת לגשת לגזע של MCA (הידוע גם במגזר M1) ביעילות, שריר temporalis משתקף באופן זמני ממשטח הגולגולת. (הערה: במקרה של ניתוחי הישרדות לטווח ארוך, הניסיון של המעבדה שלנו כבר thaלא על ידי המאפשר לשרירי temporalis להישאר מחובר בעוגן שלו, את השרירים מחדש לחשל פני הגולגולת, מה שמאפשרים להתנהגות אכילה בריאה ותחזוקה יעילה של משקל גוף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עקוב MCA לפינה מקורי, הגחון של חלון ההדמיה (אם משתמש בזה כהפניה) על מנת להעריך את מיקום סניף קליפת המוח הראשוני שלה שקרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יצירת אזור דק גולגולת חדשה (אנחנו קוראים לזה חלון כירורגית) מעט מקורי וגחון לחלון ההדמיה (אם משתמש בזה כהפניה) שבו מגזר M1 (מסעף מראש קליפת המוח) של MCA צריך להיות. הערה חשובה: להשאיר כ -2 מ&quot;מ פער בין חלון ההדמיה (אם משתמש בזה כהפניה) והחלון כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את הגזע של MCA (הידוע גם במגזר M1) רק לפני הסתעפות קליפת המוח של העורק כפי שמוצג ב1A ו-1B דמויות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בגודל של HP-3 מקדח, רזה הגולגולת מעל למיקום קטע M1 המשוער. כשגולגולת הופכת שקופה מעט, לעבור בגודל קצת יותר העדין HP-2 תרגיל ודק הגולגולת עד שהוא שקוף לחלוטין. לאשר ויזואלית כאזור חלון כירורגית הופך דק מספיק כדי להציג את כלי הדם, ולהעריך את מיקומו של M1 בנקודה זו ולהשלים את החלון כזה שיש 2-3 מ&quot;מ משני צדי האורך של מגזר M1 (זה מאפשר מקום להחדרה ויציאה של מחט התפר בכל צד של MCA). </li></ol> הערה חשובה: להפסיק דליל כאשר העובי של הגולגולת הוא דומה לזו של ניילון נצמד. הכלי יהיה קרע אם התרגיל שובר דרך הגולגולת והדורה. אם הגולגולת היא לא רזה מספיק ומצד שני, להסיר אותו לחסימה יהיה קשה ועלול לגרום לניזק לקליפת המוח או העורק. <ol start="7" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח מחט מזרק 30 מד (30-G) ולכופף את קצה המחט, באמצעות משונן פינצטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במחט 30 גרם לנקב את טיפול הגולגולתבאופן מלא באזור שלא ישירות מעל עורק. השתמש חור לנקב זו כדי לאפשר פינצטה לתפוס גולגולת ולהסיר את האזור דליל של החלון כירורגית בזהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח G צורך חדש 30, לכופף את קצהו כמו בשלב 6, ולהסיר בזהירות את הדורה. </li></ol> הערה: חיתוך הדורה יגרום לו לקלף וMCA יהפוך בולט יותר, כתוצאה מלחץ מופחת. 3. Occluding MCA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספרי תיל לקצץ הפוך חצי עקום חיתוך מחט תפר (3/8 סיבוב, מחט תפר 16 מ&quot;מ) ועד כ 3-5 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשחיל חוט במחט התפר הגזוז כפי שמוצג בתמונה ב4E איור. הערה חשובה: חשוב שהמחט מושחלת כך את שני הקצוות של חוט התפירה באורך שווה. זה מאפשר מסתיימת משיכת החוט של שניהם תחת M1 באותו הזמן, את המחט לאחר מכן ניתן לחתוך חופשי השאירה את שני אורכים של חוט כדי לקשור את שני קשרים ברחבי MCA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש המשונן פינצטה להחליק את מחט התפר מתחת M1. הכנס עם כ 0.5-1 מ&quot;מ ממרחק MCA, להישאר כרדוד ככל האפשר, כדי למזער את נזק לקליפת המוח, אך הימנעות יותר מדי עומס על MCA גם כן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מחט התפר יוצאת בצד השני באופן שהוא נמצא תחת MCA, השתמש בפינצטה קצה קנס (כמוצג להלן) כדי למשוך את קצה מחט התפר מהצד הנגדי תוך המשך כדי להאכיל או דוחף את הקצה השני של התפר מחט עם הקצה המשונן פינצטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שמחט התפר הוא עבר לחלוטין תחת MCA וכבר הוציאה, ממשיך למשוך את מחט התפירה או חוט עד שאורכו של החוט הוא שווה בכל צד של MCA. לחיצה על החוט כפי שהוא מוזן דרך למזער את העומס על MCA יכולה להיות מועילה כדי למנוע קרע כחוט עובר מתחת לעורק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את החוט הקרוב למחט התפר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשני פינצטה נקודת הקנס להתיר את חוט התפירה וכתוצאה מכך שתייםכל כך שיש שני אשכולות עצמאיים מתוחים תחת MCA שאינם נוגעים ללב. באופן אידיאלי את החוטים יהיו כ 1 מ&quot;מ זה מזה שבו הם עוברים תחת MCA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשתי פינצטה נקודת הקנס לקשור שני קשרים נפרדים (שני חיבורי אותיות) עם האשכולות ברחבי MCA מנסים לשמור על ש~ 1 מ&quot;מ של רווח בין קשרים כדי לאפשר מקום לחיתוך רוחב. </li></ol> הערה: אם בקרה פנימית דמה היא רצויה, להכין את החסימה עוזב את קשרים רופפים החסימה, כך שהם לא להצר MCA בכלל ולאסוף נתונים שקדמו להידוק קשרים וחיתוך הכלי. חתוך את החוט כדי למנוע אותו תופס כל דבר לפני החסימה אבל להשאיר מספיק חוט כדי לאפשר הידוק הקשרים מאוחר יותר. בדרך זו, ניתן לבצע הדמיה כל בסיס או איסוף נתונים עם כל אותה הפלישה כירורגית כמו החסימה ולהדק את קשרים בנקודת הזמן המתאים עם עיכוב קטן. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שיש את קשרים להיותen מתוח, השתמש במספרי מיקרו לtransect M1 שבבין שני קשרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקרה של מחקרים ארוכי טווח, הישרדות: <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר חרות דש קרקפת אחורי במקום עם חוט כירורגית סטרילי או לאבטח את הרקמות באמצעות קליפים פצע סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל אנטיביוטיקה מקומית לאזור הפצע (כגון משחת הבסיטרצין) ומערכתי בזריקת מניעתי של אמפיצילין (150 מ&quot;ג / ק&quot;ג IM). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אמנם הנושא הוא עדיין מורדם לנהל משחה אנטיביוטית עיניים לעיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל משלימה אטרופין (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג IM) כדי להקטין את ההפרשות בדרכי הנשימה במהלך הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק flunixin meglumine (1.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) תת עורי בסיומו של ניתוח ושוב בבוקר שלמחרת (~ 12 שעות מאוחר יותר) לשליטה בכאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה על משטח יבש, חם, משופע כך שהאף של בעלי החיים הוא מעל זנבו בשיפוע (זה מקל על נשימה עד שהחיה היא ערה). &lt;/ P&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על בעלי החיים עד שהוא ער ולנוע בבטחה בכוחות עצמו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שבעלי החיים הוא חזרה בביבר, הפעילות של החיה, מראה, ניקוד, והאכלה ושתיית התנהגות צריכה להיות במעקב יומיומי. </li></ol></li></ol> 4. המתה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסיומו של כל ניסוי, צריכים להיות מורדמים חולדות עם נתרן pentobarbital (2-3 מ&quot;ל, intraperitoneally). </li></ol>

<ol>
	<li>Caplan, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Caplan's Stroke, A Clinical Approach. , (2009).</li><li>Blumenfeld, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuroanatomy Through Clinical Cases. , (2002).</li><li>Roger, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+Disease+and+Stroke+Statistics--2011+Update:+A+Report+From+the+American+Heart+Association.">Heart Disease and Stroke Statistics--2011 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. , (2011).</li><li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathobiology+of+ischaemic+stroke:+an+integrated+view.">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends Neurosci. 22, 391-397 (1999).</li><li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ischemic+stroke:+overview+of+major+experimental+rodent+models,+pathophysiology,+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia.">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li><li>Dietrich, W. D., Ginsberg, M. D., Busto, R., Watson, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cortical+infarction+in+the+rat.+2.+Acute+and+subacute+alterations+in+local+glucose+utilization.">Photochemically induced cortical infarction in the rat. 2. Acute and subacute alterations in local glucose utilization.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 6, 195-202 (1986).</li><li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis.">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Ann. Neurol. 17, 497-504 (1985).</li><li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema,+I:+a+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area.">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Japanese Journal of Stroke. 8, 1-8 (1986).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Howells, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+strokes+for+different+folks:+the+rich+diversity+of+animal+models+of+focal+cerebral+ischemia.">Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).</li><li>Trueman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Critical+Re-Examination+of+the+Intraluminal+Filament+MCAO+Model:+Impact+of+External+Carotid+Artery+Transection.">A Critical Re-Examination of the Intraluminal Filament MCAO Model: Impact of External Carotid Artery Transection.</a> Transl. Stroke Res. 2, (2011).</li><li>Dirnagl, U., Waiz, W. o. l. f. g. a. n. g. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuromethods. , (2010).</li><li>Cirstea, M. C., Levin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+strategies+for+reaching+in+stroke.">Compensatory strategies for reaching in stroke.</a> Brain. 123 (Pt. 5), 940-953 (2000).</li><li>Nakayama, H., Jorgensen, H. S., Raaschou, H. O., Olsen, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+age+on+stroke+outcome.+The+Copenhagen+Stroke+Study.">The influence of age on stroke outcome. The Copenhagen Stroke Study.</a> Stroke. 25, 808-813 (1994).</li><li>Nudo, R. J., Plautz, E. J., Frost, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+adaptive+plasticity+in+recovery+of+function+after+damage+to+motor+cortex.">Role of adaptive plasticity in recovery of function after damage to motor cortex.</a> Muscle Nerve. 24, 1000-1019 (2001).</li><li>Chiganos, T. C., Jensen, W., Rousche, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+response+dynamics+during+focal+cortical+infarction.">Electrophysiological response dynamics during focal cortical infarction.</a> J. Neural Eng. 3, 15-22 (2006).</li><li>Traversa, R., Cicinelli, P., Bassi, A., Rossini, P. M., Bernardi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+of+motor+cortical+reorganization+after+stroke.+A+brain+stimulation+study+with+focal+magnetic+pulses.">Mapping of motor cortical reorganization after stroke. A brain stimulation study with focal magnetic pulses.</a> Stroke. 28, 110-117 (1997).</li><li>Weber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+prediction+of+functional+recovery+after+experimental+stroke:+functional+magnetic+resonance+imaging,+electrophysiology,+and+behavioral+testing+in+rats.">Early prediction of functional recovery after experimental stroke: functional magnetic resonance imaging, electrophysiology, and behavioral testing in rats.</a> J. Neurosci. 28, 1022-1029 (2008).</li><li>Dirnagl, U., Kaplan, B., Jacewicz, M., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+measurement+of+cerebral+cortical+blood+flow+by+laser-Doppler+flowmetry+in+a+rat+stroke+model.">Continuous measurement of cerebral cortical blood flow by laser-Doppler flowmetry in a rat stroke model.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 9, 589-596 (1989).</li><li>Wintermark, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+admission+perfusion+computed+tomography+and+qualitative+diffusion-+and+perfusion-weighted+magnetic+resonance+imaging+in+acute+stroke+patients.">Comparison of admission perfusion computed tomography and qualitative diffusion- and perfusion-weighted magnetic resonance imaging in acute stroke patients.</a> Stroke. 33, 2025-2031 (2002).</li><li>Crafton, K. R., Mark, A. N., Cramer, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+understanding+of+cortical+injury+by+incorporating+measures+of+functional+anatomy.">Improved understanding of cortical injury by incorporating measures of functional anatomy.</a> Brain. 126, 1650-1659 (2003).</li><li>Nudo, R. J., Eisner-Janowicz, I., Lomber, S. t. e. p. h. e. n., Eggermont, J. o. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+12.">Ch. 12.</a> Reprogramming the Cerebral Cortex. , (2006).</li><li>Davis, M. F., Lay, C. C., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amount+but+not+pattern+of+protective+sensory+stimulation+alters+recovery+after+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Amount but not pattern of protective sensory stimulation alters recovery after permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Stroke. 42, 792-798 (2011).</li><li>Lay, C. C., Davis, M. F., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+sensory+stimulation+completely+protects+the+adult+rodent+cortex+from+ischemic+stroke.">Mild sensory stimulation completely protects the adult rodent cortex from ischemic stroke.</a> PLoS One. 5, e11270 (2010).</li><li>Lay, C. C., Davis, M. F., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+sensory+stimulation+reestablishes+cortical+function+during+the+acute+phase+of+ischemia.">Mild sensory stimulation reestablishes cortical function during the acute phase of ischemia.</a> J. Neurosci. 31, 11495-11504 (2011).</li><li>Coyle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+young+rat.">Middle cerebral artery occlusion in the young rat.</a> Stroke. 13, 855-859 (1982).</li><li>Risedal, A., Zeng, J., Johansson, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+training+may+exacerbate+brain+damage+after+focal+brain+ischemia+in+the+rat.">Early training may exacerbate brain damage after focal brain ischemia in the rat.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 19, 997-1003 (1999).</li><li>Lay, C. C., Davis, M. F., Chen-Bee, C. H., Frostig, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mild+sensory+stimulation+protects+the+aged+rodent+from+cortical+ischemic+stroke+following+permanent+middle+cerebral+artery+occlusion.">Mild sensory stimulation protects the aged rodent from cortical ischemic stroke following permanent middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of the American Heart Association Cardiovascular and Cerebrovascular Disease. , (2012).</li><li>Niiro, M., Simon, R. P., Kadota, K., Asakura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+branching+patterns+of+middle+cerebral+artery+(MCA)+in+rats+and+their+influence+on+the+infarct+size+produced+by+MCA+occlusion.">Proximal branching patterns of middle cerebral artery (MCA) in rats and their influence on the infarct size produced by MCA occlusion.</a> J. Neurosci Methods. 64, 19-23 (1996).</li><li>Wang-Fischer, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Stroke Models in Rats. , 17-30 (2009).</li><li>Quinn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+rat's+to+human's+age:+how+old+is+my+rat+in+people+years?.">Comparing rat's to human's age: how old is my rat in people years?.</a> Nutrition. 21, 775-777 (2005).</li><li>Wei, L., Rovainen, C. M., Woolsey, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ministrokes+in+rat+barrel+cortex.">Ministrokes in rat barrel cortex.</a> Stroke. 26, 1459-1462 (1995).</li><li>Brint, S., Jacewicz, M., Kiessling, M., Tanabe, J., Pulsinelli, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+brain+ischemia+in+the+rat:+methods+for+reproducible+neocortical+infarction+using+tandem+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+and+ipsilateral+common+carotid+arteries.">Focal brain ischemia in the rat: methods for reproducible neocortical infarction using tandem occlusion of the distal middle cerebral and ipsilateral common carotid arteries.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 8, 474-485 (1988).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).</li><li>Dittmar, M., Spruss, T., Schuierer, G., Horn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=External+carotid+artery+territory+ischemia+impairs+outcome+in+the+endovascular+filament+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">External carotid artery territory ischemia impairs outcome in the endovascular filament model of middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 34, 2252-2257 (2003).</li><li>Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+blood+flow+and+cerebral+perfusion+pressure+in+a+new+noncraniotomy+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat.">Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat.</a> Stroke. 26, 1086-1091 (1995).</li><li>Kuge, Y., Minematsu, K., Yamaguchi, T., Miyake, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nylon+monofilament+for+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Nylon monofilament for intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 26, 1655-1657 (1995).</li><li>Laing, R. J., Jakubowski, J., Laing, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.+Which+method+works+best?.">Middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Which method works best?.</a> Stroke. 24, 294-297 (1993).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia:+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry.">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li></ol>

המחברים אין לחשוף בשלב זה.

פרוטוקול זה פותח על מנת לגרום לאיסכמיה בתוך קליפת המכרסם, ולעשות זאת עם השפעה מינימאלית היקפית לנושאים ניסיוני. החסימה הכפולה ושיטת חיתוך רוחב מאפשרת אישור ויזואלי כי הכלי כבר האפיל באופן קבוע, ועשויות להתבצע ללא פלישה מוגזמת או נזק לרקמות, ועם שיעור הישרדות גבוה. פר...

כדי לגרום לתנאי איסכמי שמחקים בצורה יעילה שבץ איסכמי אנושי, מספר דגמי שבץ בבעלי חיים מועסקים באופן נרחב, עם משתנה כרכים של אוטם כתוצאה מכך. במודל photothrombotic, המוח הוא מוקרן דרך הגולגולת השלמה באמצעות תאורת לייזר לאחר הזרקה תוך ורידית של חומר רגיש לאור (כמו ורד בנגל), וכתוצאה מקרישת פוטו, חסימה של כלי המוקרנים, ואיסכמיה ברקמה הסובבת 6, 7. Photothrombosis יכול לגרום באזורים קטנים מאוד ומבודדים של אוטם ומשמש בדרך כלל כאמצעי לדוגמנות &quot;מיני שבץ&quot;, או &quot;מיקרו שבץ&quot;. הטכניקה באופן נרחב יותר אימצה לגרימת שבץ מוחי איסכמי, בעיקר בעורק המוח אמצעי (MCA), היא מודל intraluminal חוט חד 8, שבו חוט להט הוא הציג ניתוח לתוך עורק הצוואר החיצוני והתקדם עד לקצה חוסם את הבסיס של MCA. פריאתגר מרי של חסימת נימה intraluminal הוא שיעור התמותה הגבוה (70%, כאשר MCA הוא האפיל על 3 שעות, נקודת זמן רלוונטית למחקר שבץ) 9. בעיות אחרות עם השיטה כללו דימום תת עכבישי אפשרי, חסימה לא שלמה, ונפח אוטם משתנה 10,11. תוצאות מודל זה במידה רבה של אוטם הן בקליפת המוח ו12 subcortically ומודלים אנושי שבץ מסיבי. למרות שדגמי שבץ גם מיקרו והסיביים הם חשובים, משיכות אדם הן בדרך כלל איפשהו באמצע. במחקרים קליניים גדולים, טווחי אוטם שבץ בגודל 28-80 ס&quot;מ 3, המתרגם ל4.5-14% בחצי כדור ipsi-ishemic 9. לשם השוואה, הטווחים שלנו עכברוש pMCAO אוטם גודל מ כ 9-35 3 מ&quot;מ, שמהווה 3 עד 12% בחצי כדור ipsi-ishemic. מודל pMCAO שלנו, אם כן, דומה כרכי אוטם שבץ איסכמי אדם באופן הדוק על ידי אחוז מהמוחנפח. בנוסף לדוגמנות נזק מבנים של תוצאות שבץ, pMCAO בליקויים תפקודיים והתנהגותי דומים למצבו של האדם. לכל הפחות, מודל אפקטיבי של תוצאות שבץ בגירעונות תנועה נגדיות לנזקים שבץ 13-15, אובדן או שיבוש של מנוע ותפקוד חושי 16,17, אובדן או שיבוש של פעילות עצבית עוררה 16,18, ירידה בזרימת דם במוח 19, 20, והאוטם 21,22. בהתאם לכך, המודלים שלנו pMCAO חסימה רצינית של MCA וכתוצאה מכך נכות פיזית, אובדן התפקוד בתוך הקליפה המוטורית (קליפת מוח ושכנות), הפרעה בפעילות עצבית, ירידה חמורה בזרימת דם MCA, ותכונות אוטם-היכר של שבץ איסכמי 23 -25, ולכן משמשים כמודל יעיל של שבץ מוחי אנושי. פרוצדוראלית, pMCAO כרוך craniotomy קטן שבו אנחנו מסירים את הגולגולת והדורה בזהירות ממ&quot;מ &quot;חלון כירורגית&quot; 2 X 2 על המגזר (M1) הראשוני של MCA, רק לפני הסתעפות העיקרית של MCA לענפי קליפת המוח הקדמיים ואת אחורי (האיורים 1A ו-1B). אנחנו עוברים מחט חצי עקומה הפוך חיתוך תפר וחוט (6-0 משי) דרך שכבת pial של קרומי המוח, מתחת MCA ומעל פני השטח של קליפת המוח (ראה טבלה של חומרים כימיים וציוד ספציפיים עבור הציוד הדרוש כדי לבצע את ניתוח pMCAO ). לאחר מכן, אנו קושרים קשירה כפולה, להדק את קשרים שני ברחבי MCA, וtransect הכלי בין שני קשרים. הקשירה הכפולה וחיתוך הרוחב דרך M1 מתרחש דיסטלי רק להסתעפות lenticulostriate, כזה שרק את ענפי קליפת המוח של MCA-מושפעים ובכך רק אוטם קליפת המוח (לא נגרם נזק subcortical) מתרחש 26,27 (איור 2). למרות ששבץ מוחי אנושי כרוך לעתים קרובות אוטם subcortical, דוגמנות זה במכרסמים דורשת הפולשנות גדלה (occluding כלי מוחיים לפני branchi קליפת המוחng דורש גישה לעורקים דרך העורק הראשי בצוואר ומחייב occlusions נוסף) בטכניקה והשתנות מוגברת בגודל אוטם. המודל שתואר כאן לא ניתן לבצע יותר proximally כגישה לסניפים קודמים של MCA אינה אפשרית באמצעות craniotomy פשוט. למרות שזה עשוי להיות אפשרי בניתוח כדי לגרום לאוטם subcortical דרך pMCAO, חסימה תהיה כרוכה הליך מאוד פולשני ולכן אינו אידיאלית. יעילות של חסימה ניתן לאשר באמצעות לייזר דופלר, או לייזר רבב הדמיה 12,24,25 (איור 3), או בהיסטולוגיה נתיחה שלאחר מוות (איור 2). יש לציין שמחקרים קודמים הראו שגירוי חושי יכול לשחק תפקיד מרכזי בהתפתחות והתוצאה של אוטם; הענקת הגנה מפני נזקים כאשר מנוהלים בתוך 2 שעות של pMCAO וגורם לעלייה בנזק שבץ כאשר מנוהלים ב3 שעות ההודעה pMCAO 24,25,28. יש לנו אישר כי בשעה 5 הודעה pMCAO-, גירוי כבר אין לו השפעה על תוצאה (נתונים שלא פורסמו). לכן, גירוי חושי של נושאים צריך להיות ממוזער של 5 שעות לאחר pMCAO להשיג כרכי אוטם עם שונות מינימאלית. בהתאם לכך, הקבוצה שלנו פועלת &quot;ביקורת שלא טופל&quot; מסוג זה על ידי שמירה על חולדות מורדמת במשך 5 שעות הודעה pMCAO-, בחושך, עם גירוי חושי מינימאלי, ובמפורש לא גירוי זיף. יש לציין עוד, כי מדי פעם בוריאצית מבנה MCA, כולל הסתעפות מוגזמת, מגזרים עיקריים מרובים, או עדר עורקי תקשורת יכולה להתרחש בתדירות של 10 עד 30% בזכר בוגר ספראג Dawley חולדות 29,30. אם ליקויים בMCA הם נצפו, רצוי לא להשתמש בנושא מסוים כמו הוספת חיות עם מומים בכלי הדם כאלה תגביר את שונות אוטם. בנוסף, יש כמה היבטים מעשיים של oהליך ur שהופך שיטה זו יתרון חסימה לחקירת אירוע מוחי. ראשית, ניתן למקם את התפרים סביב העורק אך לא להדק על מנת לגבות הערכה בסיסית, ואחרי הערכה שלאחר איסכמי לאחר קשירה וחיתוך רוחב. באופן זה, הכנה כירורגית הכרחית לחסימה נשלטת בצורה יעילה ל, בתוך נושאים. כי נושאים עשויים להישאר נייחים או בתוך מסגרת stereotaxic לאורך חסימה, ניתן לנהל הערכה ניסיונית של כל נושא לפני, במהלך, ואחרי החסימה מבלי להזיז את הנושא או מטריד את כל ציוד בשימוש ניסיוני 25,28. יתר על כן, תוצאות הליך זה בשיעור תמותה נמוך מאוד, אפילו בתוך נבדקים בגילי 21-24 מכרסמים חודשים של גיל (שווה ערך לאדם מבוגר) 31, ולכן עשוי להיות המשמש להערכת טיפולי שבץ בחולדות כי מודל הדוק יותר נפוצה ביותר קבוצת גיל של חולי שבץ 25,28. כלי transection גם משרת מספר מטרות מעשיות. היעדר דימום לאחר חיתוך רוחב מאשר כי הספינה האפילה לחלוטין בשני אתרי קשירה. בנוסף, מבטיח חיתוך רוחב שיבוש קבוע של זרימת דם. לבסוף, חיתוך רוחב מבטיח שכל זרימת דם זוהתה בחלקים הדיסטלי של כלי occluded חייבת לבוא ממקור חלופי. לבסוף, למרות שאנחנו באופן ספציפי לתאר טכניקת חסימה זו לMCA בכתב היד והסרטון הזה, באותה טכניקת חיתוך רוחב קשירה כפולה יכולה להיות מיושמת על כל כלי מוחין שניתן לגשת דרך craniotomy. המעבדה שלנו, למשל, מנוצל pMCAO בשיתוף עם כמה חסימות קבועות נוספות של ענפי MCA דיסטלי כדי לחסום גם ראשוני, וזרימת דם בטחונות 24 באופן שדומה לטכניקות שנועדו לגרום לאיסכמיה סלקטיבי בתוך הקליפה 32 העיקרית החושית. לסיכום, לאהשיטה שלו לחסימה קבועה כפי שהוחל על MCA משמשת דוגמה מקרוב שלושה היבטים עיקריים של שבץ איסכמי אנושי: מיקום השכיח ביותר (MCA), סוג (איסכמיה), ומידת נזק (אוטם) הקשורים בספרות הקלינית בבני האדם של שבץ מוחי. יתר על כן, בשיטה זו של חסימה עשויה להיות מיושמת לאתרי חסימה בודדים או מרובים בכל רחבי המוח, ועשויה להתנהל בנושאי גיל עמידה עם שיעור גבוה של הישרדות. בהתחשב באופי הדינמי, קבוע, ולא פולשנית יחסית של חסימה זו, טכניקה זו מהווה כלי נוסף להערכת חוקרים פרה גישות חדשות להגנה מפני וטיפול בשבץ מוחי.

<table border="1">
 <tr>
 <td>Name of the equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Fine Graefe Forceps - 0.5 mm Tips Slight Curve (1)</td>
 <td>Fine Science Tools </td>
 <td>11151-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ceramic Coated Dumont #5 Forceps (2)</td>
 <td>Fine Science Tools </td>
 <td>11252-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Fine Bonn Scissors, straight (1)</td>
 <td>Fine Science Tools </td>
 <td>14084-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round 3/8 (16 mm) Suture Needles</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12050-02</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 Braided Silk Suture</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>NC9071061 
 Harvard Apparatus 
 No.:510461</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30 gauge needle, &frac12;" length</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>NC9867376 
 
 No.:ZT-5-030-5-L/COL</td>
 <td></td>
 </tr>
</table>

permanent cerebral vessel occlusion via double ligature and transection

שבץ הוא גורם מוביל למוות, נכות, אובדן סוציו אקונומי ובעולם. הרוב מכל מקרי השבץ כתוצאה מהפרעה בזרימת דם (איסכמיה) 1. עורק מוח אמצעי (MCA) מספק הרוב גדול של דם אל פני השטח לרוחב של הקליפה 2, הוא האתר הנפוץ ביותר של שבץ 3 אנושיים, ואיסכמיה בשטחה יכולה לגרום לבעיות בתפקוד נרחבים או מוות 1,4,5. ניצולים מהשבץ מוחי איסכמי סובלים לעתים קרובות אובדן או שיבוש של יכולות מוטוריות, חושיים גירעונות, ואוטם. במאמץ ללכוד את המאפיינים מרכזיים אלה של שבץ, ובכך לפתח טיפול יעיל, הרבה דגש על מודלים של בעלי חיים של איסכמיה בMCA. כאן אנו מציגים שיטה באופן קבוע occluding כלי דם משטח קליפת המוח. אנו נציג בשיטה זו משתמשת בדוגמה של חסימת כלי דם רלוונטי כי מודלי הסוג הנפוץ ביותר, המיקום וoutcomדואר של שבץ מוחי אנושי, חסימת עורק קבע אמצע מוחין (pMCAO). במודל זה, אנו חושפים בניתוח MCA בעכברים הבוגרים, ולאחר מכן לחסום באמצעות קשירה כפולה וחיתוך רוחב של כלי השיט. זה pMCAO חוסם את קליפת המוח הסניף הפרוקסימלי של MCA, גורם איסכמיה בכל שטח קליפת המוח MCA, חלק גדול של קליפת המוח. שיטה זו של חסימה יכולה לשמש גם כדי לחסום חלקי דיסטלי יותר של כלי קליפת המוח על מנת להשיג איסכמיה מוקד יותר מיקוד אזור קטן יותר של קליפת המוח. החסרונות העיקריים של pMCAO הם שההליך כירורגי פולשני הוא במידה מסוימת כפי שנדרש craniotomy קטן לגשת MCA, אם כי זה גורם נזק לרקמות מינימאלית. היתרונות העיקריים של מודל זה, עם זאת, הם: האתר של חסימה מוגדר היטב, מידת הפחתת זרימת דם עולה בקנה אחד, פונקציונלית ונוירולוגיות ליקוי מתרחש במהירות, גודל האוטם עולה בקנה אחד, והשיעור הגבוה של הישרדות מאפשר ארוך הערכה כרונית טווח.

<html> חסימה מוצלחת של כלי שניתן לאשר שימוש בליזר רבב הדמיה (LSI) בין שיטות הדמיה זרימת דם אחרות. זרימת דם בענפי קליפת המוח הגדולים של MCA צריכה לרדת ל ~ 25% מנקודת ההתחלה פחות או החסימה הבאה בהתאם לרמתו של רעש במערכת ההקלטה ורגישות של הטכניקה. ראה איור 3 לתמונ...

Watch this Scientific Journal Video about Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection at JoVE.com

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

אנו מתארים שיטת שחזור מאוד לחסימה הקבועה של כלי דם במוח גדולים מכרסם. טכניקה זו יכולה להיות מושלמת עם מעט מאוד נזק היקפי, איבוד דם מינימאלי, שיעור גבוה של הישרדות לטווח ארוך, ונפח אוטם עקבי בקנה אחד עם האוכלוסייה הקלינית בבני האדם.

חסימת כלי דם מוחי בלתי הפיך<em&gt; דרך</em&gt; Ligature וחיתוך רוחב זוגי

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

permanent-cerebral-vessel-occlusion-via-double-ligature

Research

JoVE Journal

Medicine

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

14.8K Views.  University of California, Irvine. אנו מתארים שיטת שחזור מאוד לחסימה הקבועה של כלי דם במוח גדולים מכרסם. טכניקה זו יכולה להיות מושלמת עם מעט מאוד נזק היקפי, איבוד דם מינימאלי, שיעור גבוה של הישרדות לטווח ארוך, ונפח אוטם עקבי בקנה אחד עם האוכלוסייה הקלינית בבני האדם.

Video: Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ischemia produces damage to specific brain regions shown to be highly sensitive to ischemia 1. Hippocampal neurons have higher sensitivity to ischemic insults compared to other cell populations, and specifically, the CA1 region of the hippocampus is particularly vulnerable to ischemia/reperfusion 2.
The design of therapeutic interventions, or study of mechanisms involved in cerebral damage, requires a model that produces damage similar to the clinical condition and in a reproducible manner. Bilateral carotid vessel occlusion with hypotension (2VOH) is a model that produces reversible forebrain ischemia, emulating the cerebral events that can occur during cardiac arrest and resuscitation. We describe a model modified from Smith et al. (1984) 2, as first presented in its current form in Sanderson, et al. (2008) 3, which produces reproducible injury to selectively vulnerable brain regions 3-6. The reliability of this model is dictated by precise control of systemic blood pressure during applied hypotension, the duration of ischemia, close temperature control, a specific anesthesia regimen, and diligent post-operative care. An 8-minute ischemic insult produces cell death of CA1 hippocampal neurons that progresses over the course of 6 to 24 hr of reperfusion, while less vulnerable brain regions are spared. This progressive cell death is easily quantified after 7-14 days of reperfusion, as a near complete loss of CA1 neurons is evident at this time.
In addition to this brain injury model, we present a method for CA1 damage quantification using a simple, yet thorough, methodology. Importantly, quantification can be accomplished using a simple camera-mounted microscope, and a free ImageJ (NIH) software plugin, obviating the need for cost-prohibitive stereology software programs and a motorized microscopic stage for damage assessment.

Bilateral carotid occlusion coupled with systemic hypotension produces global brain ischemia in the rat, resulting in damage to the hippocampus with reproducible severity. Animal subjects are impaired with predictable patterns of brain damage, they recover expediently, and mortality rates are comparatively low.

ספיגה של 2 כלי השיט / תת לחץ דם: מודל עכברוש של איסכמיה המוח הגלובלית

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Stereological and Flow Cytometry Characterization of Leukocyte Subpopulations in Models of Transient or Permanent Cerebral Ischemia

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after stroke. These myeloid cell subpopulations can display different phenotypes and functions and need to be distinguished and characterized to study their regulation and contribution to tissue damage. This protocol provides two different methodologies for brain immune cell characterization: a precise stereological approach and a flow cytometric analysis. The stereological approach is based on the optical fractionator method, which calculates the total number of cells in an area of interest (infarcted brain) estimated by a systematic random sampling. The second characterization approach provides a simple way to isolate brain leukocyte suspensions and to characterize them by flow cytometry, allowing for the characterization of microglia, infiltrated monocytes and neutrophils of the ischemic tissue. In addition, it also details a cerebral ischemia model in mice that exclusively affects brain cortex, generating highly reproducible infarcts with a low rate of mortality, and the procedure for histological brain processing to characterize infarct volume by the Cavalieri method.

Brain myeloid cells characterization following stroke can be performed by stereology using the optical fractionator method, or by a flow cytometric analysis of brain leukocytes suspensions. Both are useful techniques to perform an accurate phenotypical distinction of the main myeloid cell subsets found in the ischemic brain.

Stereological וcytometry זרימת אפיון תת-אוכלוסיות יקוציט במודלים של חולף או קבוע מוחין איסכמיה

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...