이 작품은 미국 심장 협회 Predoctoral 원정대 788808-41910, NIH-NINDS NS-066001과 NS-055832, 연구 NIH 연수 보조금 1T32DC010775-​​01 청각위한 센터에 의해 지원되었다.

1. 시작하기 : 필요한 수술 도구 그림 4 참조 <ol><li> 치과 드릴 (KAVO 치과 장비 모델 : UMXL-TM), 2 비트 드릴, 3 비트 드릴 </li><li> 두 개의 ~ 30 게이지 피하 주사 바늘 </li><li> 톱니 핀셋 곡선 팁 선택 사항 (도움이되지만 필수적이지 수 있습니다) </li><li> 두 개의 좋은 팁 핀셋 </li><li> 전선 절단기 </li><li> 봉합 실 </li><li> 마이크로 가위 </li></ol> 2. 외과 창 만들기 <ol><li> 마취 절차 NIH 가이드 라인을 준수하고 UC 어바인 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 실험 대상은 2백95~4백그램 남성의 Sprague Dawley 계 흰쥐 (찰스 리버 연구소, 윌 밍턴, MA, USA) 다음과 같은 마취 절차가 사용되어야합니다 : <ol><li> H에서 아트로핀의 근육 주사 (0.05 ㎎ / ㎏, B​​W) 다음에 나트륨 펜 토바 비탈 알약 (55 ㎎ / ㎏ BW)와 쥐의 복강 주사IND 다리, 그리고 피하 물에 5 % 포도당의 관리 3.0 CC. </li><li> 펜 토바 비탈 나트륨 (27.5 ㎎ / ㎏, B​​W) 주사 필요에 따라 보충. 다음 절차 중 각막을 보호하기 위해 눈 안과 항생제 연고를 관리 할 수​​ 있습니다. 6 시간마다 마취 호흡기 분비물을 감소 5 % 포도당 (3 ㎖) 아트로핀 (0.05 ㎎ / ㎏, B​​W)를 관리합니다. 측정 신체 직장 프로브를 통해 온도, 자기 조절 열 담요 37 ° C에서 체온을 유지합니다. </li></ol></li><li> 하나에 의해 MCA를 찾습니다 <ol class="lalpha"><li> 숱이 2 × 2mm 영상 / 두개골은 거의 투명하게 될 때까지 크기 HP 3 드릴 비트를 사용하여 체성 감각 피질에 창을 시각화하고 크기를 HP 2 드릴 비트를 사용하여 전체 투명성 얇게.에게 MCA의 위치는 다음이 창을 초기 세그먼트의 대략적인 위치를 사용하는 자사의 근 궤적을 볼 수 있습니다. MCA는 일반적으로 대각선으로 실행됩니다지느러미 방향으로 복부 / 꼬리 (예를 들어, 뷰의 외과 의사의 관점에서 왼쪽으로 반구를 볼 때 맨 / 오른쪽 아래 왼쪽)의 주동이의 창. 관찰자 M1 세그먼트 (대뇌 피질 분기에 인접)이 첫 번째 창을 통해 보이는 말단 지점에 따라 위치하는 추정 위치를 수술 창이 다음 위에서 생성 할 수 있습니다. MCA에 액세스하기 위해 제거 된 두개골의 양을 최소화하기 위해, 영상 / 시각화 창 가까이 위치하지만, 수술 창에서 분리되어야한다. 또는 </li><li> 작은 수술 창이 약 3mm 전방과 가까이 아치 연단 30,33,34에 난원 공이나 하악 신경에 가로 1mm를 배치해야합니다. 효과적으로 MCA (또한 M1 세그먼트라고도 함)의 줄기에 액세스하려면, 측두근 근육이 일시적으로 두개골 표면에서 떨어져 반영됩니다. (참고 : 장기 생존 수술의 경우, 우리 연구소의 경험은 그쪽되었습니다측두근는 앵커에 연결된 상태를 유지할 수 있기 때문에 t는 근육 건강한 식습관과 체중을 효과적으로 유지 수, 두개골 표면에 다시 단련됩니다. </li></ol></li><li> 초기 대뇌 피질의 지점이 자리하고있는 곳 추정하기 위해 영상 윈도우의 주동이, 복부 코너 (참고로이를 사용하는 경우)에 대한 MCA를 따르십시오. </li><li> (우리는이 수술 창으로 참조) 새로운 얇은 두개골 영역을 만들 약간 주동이 및 이미징 창 (참고로이를 사용하는 경우) MCA의 M1 세그먼트 (사전 피질 분기)이 있어야 할 곳에에 복부. 중요 참고 : (참고로이를 사용하는 경우) 및 수술 창 이미지 창 사이에 약 2mm의 간격을 둡니다. </li><li> 단지 그림의 1A와 1B에서와 같이 동맥의 대뇌 피질 분기 전에 MCA의 줄기를 (또한 M1 세그먼트라고도 함) 찾습니다. </li><li> 예상 M1 세그먼트 위치 위의 두개골 얇은 크기 HP-3 드릴 비트를 사용하여. 때완전히 투명하게 될 때까지 두개골 약간 투명하게, 더 미묘한 사이즈 HP-2 드릴 비트 얇은 두개골로 전환합니다. 수술 창 영역은 혈관을 볼 수 있으며,이 시점에서 M1의 위치를​​ 평가 2-3 mm은 M1 세그먼트의 길이의 양쪽에이되도록 창 (완료 정도로 얇아지고로 시각적으로 확인이 할 수 삽입을위한 공간 및 MCA의 양쪽에 봉합 바늘의 종료). </li></ol> 중요 : 두개골의 두께가 플라스틱 랩과 비슷한 경우 숱이 중지합니다. 드릴 두개골과 경막 돌파하면 용기가 파열 할 것이다. 두개골 반면에 충분한 얇은 경우, 폐색을 제거하는 것은 어려울 것 피질이나 동맥 손상 될 수 있습니다. <ol start="7"><li> 30 게이지 (30 G) 피하 주사 바늘을 가지고 톱니 핀셋을 사용하여 바늘의 끝을 구부립니다. </li><li> 구멍 두개골 치료에 30 G 바늘을 사용하여완전히 직접적 동맥 위의 장소. 족집게 머리를 잡고 조심스럽게 수술 창 얇게 영역을 제거 할 수 있도록하기 위해이 구멍 구멍을 사용합니다. </li><li> , 새로운 30 G의 필요성을 6 단계로 그 끝을 구부리는, 조심스럽게 경질를 제거합니다. </li></ol> 참고 : DURA을 절단은 껍질 후면과 MCA는 감압의 결과로, 더 두드러진 될 것입니다 원인이됩니다. 3. MCA를 폐색 <ol><li> 3-5밀리미터에 대해에 봉합 바늘 (둥근 3 / 8, 16mm 봉합 바늘) 자르고 반 곡선 역을 정돈하는 절단기를 사용합니다. </li><li> 그림 4E의 그림과 같이 손질 봉합 바늘에 실을 꿰다. 중요 : 봉합 실의 양쪽 끝은 동일 길이가되도록 바늘을 스레드하는 것이 중요합니다. 이 두 실의 당겨가 동시에 M1에서 종료 가능, 바늘 후 MCA 주위에 두 개의 매듭을 묶어 스레드의 두 길이를 떠나 자유롭게 절단 할 수 있습니다. </li><li> 톱니 핀셋 M1에서 봉합 바늘을 미끄러 사용합니다. 피질의 손상을 최소화 할 수 최대한 얕은 너무 머물고 있지만,뿐만 아니라 MCA에 너무 많은 부담을 피하고, MCA 0.5-1 mm 정도의 거리에 넣습니다. </li><li> 봉합 바늘은 MCA 아래 것과 같은 다른 측면을 때, 먹이를 계속하거나 봉합의 다른 쪽 끝을 누르면서 반대 측에서 봉합 바늘의 끝을 당겨 (아래와 같이) 끝이 족집게를 사용 톱니 모양의 팁 핀셋 바늘. </li><li> 봉합 바늘이 완전히 MCA에서 전달되고 떠나게되면, 나사의 길이가 MCA의 양쪽에 동일해질 때까지 봉합 바늘이나 실을 당겨 계속합니다. 그것은 MCA에 대한 부담을 최소화하기를 통해 공급되는 스레드에서 아래로 누르면 스레드가 동맥에서 통과 파열을 방지하기 위해 도움이 될 수 있습니다. </li><li> 봉합 바늘에 가까운 실을 잘라. </li><li> 두 결과 봉합 실을 수습하기 위해 두 좋은 점 핀셋을 사용하여들 너무 감동하지 않는 MCA에서 묶인 두 개의 독립적 인 스레드가합니다. 이상적으로 스레드들이 MCA를 통과 간격은 약 1 mm가됩니다. </li><li> 매듭 사이의 간격 1 ~ MM은 절개을위한 공간을 허용하는 것을 유지하기 MCA 주위에 스레드를 두 개의 별도의 매듭 (두 개의 합자)를 묶어 둘 다 좋은 점 핀셋을 사용합니다. </li></ol> 참고 : 내부 가짜 제어가 필요한 경우, 느슨한 그래서 그들은 전혀 MCA를 수축하지 않는 폐쇄 매듭을 떠나 교합을 준비하고 매듭을 강화하고 혈관을 절단하기 전에 데이터를 수집합니다. 그것은 이전 폐색 아무것도 잡기 방지하지만 나중에 매듭의 강화 할 수 있도록 충분한 스레드를 남기시려면 스레드를 잘라. 이 방법은 어떤 기준 영상 또는 데이터 수집 교합과 약간의 지연 적절한 시점에 체결 매듭과 같은 수술 침공의 모든을 수행 할 수 있습니다. <ol start="9"><li> 매듭이 될 나면EN 꽉, 두 매듭 사이에 M1을 절개하는 마이크로 가위를 사용 당겼다. </li><li> : 장기 생존 연구의 경우 <ol class="lalpha"><li> 봉합사는 멸균 수술 실에 다시 자리에 두피 플랩을 절개 또는 멸균 상처 클립을 사용하여 조직을 고정합니다. </li><li> 상처 영역 (예 : 바시 트라 신 연고)와 체계적으로 암피실린의 예방 주사 (150 ㎎ / ㎏ IM)에 의해 로컬 항생제를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 피사체가 눈에 안과 항생제 연고를 관리 여전히 마취 동안. </li><li> 마취 호흡기 분비물을 감소 보충 아트로핀을 (0.05 ㎎ / ㎏ IM) 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 수술의 결론 및 통증 조절을 위해 다시 다음날 아침 (~ 12 시간 이상)에 피하 flunixin 메 글루 민을 (1.1 ㎎ / ㎏) 주입. </li><li> 동물 코 (이것은 동물이 깨어 때까지 호흡을 용이) 경사에 꼬리 위에 그런 건조하고 따뜻한, 기울어 진 표면에 동물을 배치합니다. &lt;이/ 리&gt; <li> 그것이 깨어 자체 안전하게 이동 될 때까지 동물을 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 동물 사육장에서 돌아 오면, 동물의 활동, 외관, 발성, 그리고 먹이 및 동작을 마시는 매일 모니터링해야합니다. </li></ol></li></ol> 4. 안락사 <ol><li> 각 실험의 결론에서, 쥐 펜 토바 비탈 나트륨 (2-3 mL를 복강)으로 안락사되어야한다. </li></ol>

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M., Guarino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+blood+flow+and+cerebral+perfusion+pressure+in+a+new+noncraniotomy+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat.">Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat.</a> Stroke. 26, 1086-1091 (1995).</li><li>Kuge, Y., Minematsu, K., Yamaguchi, T., Miyake, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nylon+monofilament+for+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Nylon monofilament for intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Stroke. 26, 1655-1657 (1995).</li><li>Laing, R. J., Jakubowski, J., Laing, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.+Which+method+works+best?.">Middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Which method works best?.</a> Stroke. 24, 294-297 (1993).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+reevaluation+of+the+intraluminal+thread+model+of+focal+cerebral+ischemia:+evidence+of+inadvertent+premature+reperfusion+and+subarachnoid+hemorrhage+in+rats+by+laser-Doppler+flowmetry.">A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry.</a> Stroke. 29, 2162-2170 (1998).</li></ol>

저자는이 시점에서 공개하는 게 없다.

이 프로토콜은 설치류 피질에서 허혈을 유발하고, 실험 과목 최소한의 주변 영향이를 위해 개발되었습니다. 이중 폐색과 절개 방법은 용기가 영구적으로 폐색 된 것을 시각적으로 확인 할 수 있습니다, 과도한 침입이나 조직의 손상없이, 높은 생존율을 수행 할 수 있습니다. 이 폐색 프로토콜은 특정 대뇌 피질의 도메인 내에서 허혈을 유도하기 위해 개두술을 통해 액세스 할 수있는 대뇌 피질의 ...

효과적으로 인간의 허혈성 뇌졸중을 모방 허혈 상태를 유발하기 위해 여러 동물 스트로크 모델은 널리 경색의 볼륨 결과를 변화와 함께 사용된다. photothrombotic 모델에서 뇌가 주위 조직 6에서 광 화학적 응집, 조사 혈관의 막힘, 그리고 허혈의 결과로, 감광성 물질 (예 : 로즈 벵골 등)을 정맥 주사 한 후 레이저 조명을 사용하여 그대로 두개골을 통해 조사된다 7. Photothrombosis는 경색의 아주 작은, 고립 된 지역에서 발생할 수 있습니다 일반적으로 모델링 &quot;미니 뇌졸중&quot;또는 &quot;마이크로 스트로크&quot;의 의미로 사용됩니다. 특히 중대 뇌동맥 (MCA)에서 허혈성 뇌졸중을 유도에 대한보다 광범위하게 채택 된 기술은, 필라멘트가 수술 외 경동맥에 도입 팁 MCA의 기본을 폐색까지 진행되는 강내 모노 필라멘트 모델 8입니다. PRI강내 필라멘트 폐쇄 메리 도전은 높은 사망률 9 (MCA는 3 시간, 뇌졸중 연구를위한 중요한 시점에 대한 가려 70 %)입니다. 방법으로 다른 문제는 가능한 지주막 하 출혈, 불완전 폐색, 및 가변 경색 볼륨 10,11 포함되어 있습니다. 이 모델은 피질과 subcortically 12 모두 경색의 광범위한 정도 결과 및 모델의 거대한 인간의 뇌졸중. 마이크로 거대한 두 스트로크 모델은 중요하지만, 인간의 스트로크는 어딘가에 사이에 일반적입니다. 대규모 임상 연구에서 뇌졸중 경색 범위의 크기 IPSI-허혈성 반구 9 4.5-14 %로 변환 28~80cm 3에서. 비교, 우리의 쥐 pMCAO 경색 크기 범위 IPSI-허혈성 반구 3 ~ 12 % 구성하는 약 9-35밀리미터 3에서. 우리 pMCAO 모델은, 따라서 밀접하게 두뇌의 비율로 인간의 허혈성 뇌졸중 경색 볼륨을 닮았다볼륨입니다. 인간의 조건과 유사한 기능 및 행동 적자 뇌졸중, pMCAO 결과의 구조적 손상을 모델링뿐만 아니라. 최소한, 뇌졸중 손상을 13-15, 손실 또는 운동 및 감각 기능 16, 17, 손실 유발 신경 활동 16,18의 장애, 뇌의 혈액 흐름을 19 감소의 중단에 반대측 운동 적자 치기 결과의 효과적인 모델 20, 및 경색 21,22. 따라서, 우리 pMCAO 모델 MCA의 심각한 폐색 감각 피질 (및 인근 피질), 신경 활동의 중단, MCA 혈류의 심각한 감소하고 허혈성 뇌졸중 23 경색 특징 속성 내에서 함수의 신체 장애, 손실의 결과 -25, 따라서 인간의 뇌졸중의 효과적인 모델로 제공. 절차 적, pMCAO 우리가주의에서 두개골과 경막을 제거하는 작은 개두술을 포함MCA의 초기 (M1) 세그먼트에 2 × 2mm &quot;수술 창&quot;그냥 전방 및 후방 피질 분지 (그림 1A와 1B)에 MCA의 주요 분기점 이전에. 우리는 (pMCAO을 수행하는 데 필요한 외과 용품에 대한 특정 시약 및 장비의 표를 참조하십시오 MCA 아래 및 대뇌 피질의 표면 위의 수막의 pial 층을 반 곡선 역 절단 봉합 바늘과 실 (6-0 실크)을 통과 ). 우리는 다음 두 합자를 연결, MCA 주위에 두 개의 매듭을 강화하고, 두 매듭 사이의 혈관을 절개. M1을 통해 두 합자와 절개 그냥 lenticulostriate 분기 원위부 MCA 만 대뇌 피질의 분기 영향 - 따라서 만 대뇌 피질의 경색 (아무 피질 손상) 26,27 (그림 2)가 발생되는 등 발생합니다. 인간의 뇌졸중은 종종 피질 경색을 포함하지만, 설치류이 모델링은 증가 침입을 (뇌 혈관 폐색 대뇌 피질 branchi 이전에 필요NG는 목에 경동맥을 통해 액세스 동맥을 필요로하고 기술과 경색 크기가 증가 다양성에) 추가 폐색을 필요로한다. MCA 이전 분기에 액세스하는 간단한 개두술을 통해 가능 아니므로 여기에 설명 된 모델은 더 근위부 수행 할 수 없습니다. 이 pMCAO을 통해 피질 경색을 유도하는 수술을 할 수는 있지만, 폐색은 매우 침습적 절차를 수반하기 때문에 적합하지 않습니다 것입니다. 폐색 효과는 조직 학적으로 레이저 도플러, 또는 레이저 이미징 12,24,25 반점 (그림 3) 또는 사후 (그림 2)를 통해 확인 할 수있다. 그것은 이전의 연구는 감각 자극 경색의 진화와 결과에 중요한 역할을 할 수있는 것으로 나타났습니다 주목해야한다 pMCAO에서 2 시간 이내에 투여시 손상으로부터 보호 기능을 부여하고 3 시간 후 pMCAO에서 관리 뇌졸중 손상의 증가를 초래 24,25,28. 우리는 5 시간 후 pMCAO에서 자극이 더 이상 결과 (미발표 자료)에 영향이 없음을 확인했습니다. 따라서 주제의 감각 자극 pMCAO 최소한의 변화로 경색 볼륨을 얻기 위해 다음과 같은 5 시간 동안 최소화해야한다. 따라서, 우리의 그룹은 최소한의 감각 자극, 어둠 속에서, 5 시간 후 pMCAO에 대한 쥐가 마취 유지하여 이러한 유형의 &quot;치료 컨트롤&quot;을 실행하지 않고, 명시 적으로 어떤 수염 자극. 그것은 또한 과도한 분기, 여러 기본 세그먼트, 또는 의사 소통 동맥의 부재 등 MCA 구조에서 가끔 변화는 성인 남성의 Sprague Dawley 계 흰쥐 29,30 10 ~ 30 % 주파수에서 발생할 수 있다고 지적한다. MCA에 이상이 발견되면, 그것은 같은 혈관 이상으로 동물을 추가하는 경색 변동성 증가로 특정 주제를 사용하지 않는 것이 좋습니다. 또한, 오의 몇 가지 실용적인 측면이 있습니다행정 조사를 위해 유익이 폐색 방식을 통해 UR 절차. 첫째, 봉합 동맥 주위에 배치하지만, 합자 및 절개 후 사후 허혈성 평가에 의해 다음 기준 평가를 수집하기 위해 조여지지 할 수 있습니다. 이러한 방식으로, 폐색에 필요한 수술 준비를 효과적으로 주제 안에 대한 통제된다. 대상은 고정 남아있을 수 있습니다 또는 폐쇄에 걸쳐 정위 틀 내에서, 사용 25,28에서 피사체를 이동하거나 실험 장비를 방해하지 않고시 및 폐쇄 후, 이전에 각 과목의 실험 평가를 수행 할 수 있기 때문에. 또한, 심지어 세 설치류 과목에서 매우 낮은 사망률이 프로 시저 결과 21-24 세의 달 (노인 성격에 해당) 31, 따라서 더 밀접 가장 일반적인 모델링하는 쥐의 뇌졸중 치료를 평가하는 데 사용할 수 있습니다 뇌졸중 환자 25,28의 연령대. 선박 transectio여기서 n은 또한 몇개의 실제적인 목적을 제공합니다. 절개 후 출혈의 부재는 혈관이 완전히 합자 사이트 모두에서 폐색 된 것을 확인합니다. 또한, 절개는 혈액 흐름의 영구 중단을 보장합니다. 마지막으로, 절개는 폐색 혈관의 말초 부분에서 감지 된 혈액의 흐름이 다른 소스에서 와서해야한다는 것을 보장합니다. 우리는 특히이 원고와 비디오에 MCA이 폐색 기술을 설명하지만 결국 같은 두 합자 절개 기법은 개두술을 통해 액세스 할 수있는 뇌 혈관에 적용 할 수 있습니다. 우리 실험실은, 예를 들어, 선택적 차 체성 감각 피질 32에서 허혈을 유도하도록 설계 기법과 유사에 방식으로 기본 및 담보 혈액의 흐름 24을 모두 차단하기 위해 원심 MCA 지점의 몇 가지 추가 영구 폐색과 함께 pMCAO을 활용. 결론, T뇌졸중의 인간 임상 문학과 관련된 가장 일반적인 위치 (MCA), 유형 (허혈) 손상의 정도 (경색) : MCA에 적용되는 영구 폐쇄를위한 그의 방법은 밀접하게 인간의 허혈성 뇌졸중의 세 가지 주요 측면을 모델링. 또한, 폐색이 방법은 뇌 전체에 하나 또는 여러 개의 폐색 사이트에 적용 할 수 있으며, 생존의 높은 속도로 세 과목에서 수행 할 수 있습니다. 이 폐색의 동적, 영구, 비교적 비 침습적 인 성격을 감안할 때,이 기술의 보호 및 뇌졸중의 치료에 대한 새로운 접근 방식을 평가하는 임상 연구자를위한 추가 도구를 나타냅니다.

<table border="1">
 <tr>
 <td>Name of the equipment</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Fine Graefe Forceps - 0.5 mm Tips Slight Curve (1)</td>
 <td>Fine Science Tools </td>
 <td>11151-10</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ceramic Coated Dumont #5 Forceps (2)</td>
 <td>Fine Science Tools </td>
 <td>11252-50</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Extra Fine Bonn Scissors, straight (1)</td>
 <td>Fine Science Tools </td>
 <td>14084-08</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round 3/8 (16 mm) Suture Needles</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>12050-02</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-0 Braided Silk Suture</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>NC9071061 
 Harvard Apparatus 
 No.:510461</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30 gauge needle, &frac12;" length</td>
 <td>Fine Science Tools</td>
 <td>NC9867376 
 
 No.:ZT-5-030-5-L/COL</td>
 <td></td>
 </tr>
</table>

permanent cerebral vessel occlusion via double ligature and transection

뇌졸중은 사망, 장애, 사회 경제적 손실 전세계의 주요 원인이다. 모든 뇌졸중의 대부분은 혈액의 흐름이 중단 (허혈) 1의 결과. 중대 뇌동맥 (MCA)은 피질 (2)의 측면 표면에 혈액의 대다수를 제공하는 인간의 뇌졸중 3의 가장 일반적인 사이트입니다, 그 영토 내에서 허혈은 광범위한 장애 또는 사망 1,4,5 될 수 있습니다. 허혈성 뇌졸중의 생존자는 종종 손실이나 운동 기능의 장애, 감각 결손, 및 경색을 겪고 있습니다. 뇌졸중의 이러한 주요 특성을 포착함으로써 효과적인 치료를 개발하기위한 노력의 일환으로, 강조의 큰 거래는 MCA 허혈 동물 모델에 배치됩니다. 여기에 우리가 영구적으로 대뇌 피질의 표면의 혈관을 폐색하는 방법을 제시한다. 우리는 가장 일반적인 유형, 위치 및 outcom를 모델링하는 관련 혈관 폐색의 예를 사용하여이 방법을 제시합니다인간 뇌졸중, 영구 중간 대뇌 동맥 폐색 (pMCAO)의 전자. 이 모델에서, 우리는 수술 성인 쥐에서 MCA를 노출하고 이후 선박의 이중 합자와 절개를 통해 막다. 이 pMCAO은 MCA 피질 영역, 피질의 큰 부분 모두에서 허혈을 유발 MCA의 근위 대뇌 피질의 분기를 차단합니다. 폐색이 방법은 피질의 작은 지역을 대상으로 더 많은 초점 허혈을 달성하기 위해 대뇌 피질 혈관의 더 많은 말초 부분을 폐색하는 데 사용할 수 있습니다. pMCAO의 주요 단점은 작은 개두술가 MCA에 액세스하는 데 필요한대로 수술은 최소한의 조직 손상이 결과이지만, 다소 침습적이다입니다. 이 모델의 주된 장점은, 그러나,이다 : 폐색의 사이트가 잘 혈류 감소의 정도, 일관된 기능과 손상이 빠르게 발생하는 신경이다, 정의, 경색 크기는 일관성이 있으며 생존의 높은 속도에 대한 장기 허용 장기 만성 평가.

선박의 성공적인 폐색 다른 혈액 흐름 이미징 기술 중 영상 (LSI)를 반점 레이저를 이용하여 확인할 수 있습니다. MCA의 주요 대뇌 피질 분지에서 혈액 흐름 레코딩 시스템의 소음과 기술의 민감도 수준에 따라 ~ 25 기준선 % 이하 다음 폐색에 드롭해야한다. MCA 폐색 전후 MCA의 대뇌 피질 분기의 세그먼트의 대표 LSI 이미지의 그림 3을 참조하십시오. 설명 폐색 기술은 모두 대?...

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Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.

영구적 인 뇌 혈관 폐색<em&gt;를 통해</em&gt; 더블 합자 및 절개

Stroke is a leading cause of death, disability, and socioeconomic loss worldwide. The majority of all strokes result from an interruption in blood flow ...

permanent-cerebral-vessel-occlusion-via-double-ligature

Research

JoVE Journal

Medicine

Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

14.8K 조회수.  University of California, Irvine. 우리는 설치류의 주요 뇌 혈관의 영구 폐색에 대한 높은 재현성 방법을 설명합니다. 이 기술은 거의 주변의 손상을 최소화 혈액 손실, 장기 생존의 높은 속도, 인간의 임상 인구에 상응하는 일관된 경색 볼륨을 수행 할 수 있습니다.

비디오: Permanent Cerebral Vessel Occlusion via Double Ligature and Transection

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

연구

의학

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

마우스에 영구 중간 대뇌 동맥 내고의 응용

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

엔도 테린-1 유도 중간 뇌 동맥 폐색 동안 중동 뇌동맥을 시각화하기 위해 두개골 창 활용

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ischemia produces damage to specific brain regions shown to be highly sensitive to ischemia 1. Hippocampal neurons have higher sensitivity to ischemic insults compared to other cell populations, and specifically, the CA1 region of the hippocampus is particularly vulnerable to ischemia/reperfusion 2.
The design of therapeutic interventions, or study of mechanisms involved in cerebral damage, requires a model that produces damage similar to the clinical condition and in a reproducible manner. Bilateral carotid vessel occlusion with hypotension (2VOH) is a model that produces reversible forebrain ischemia, emulating the cerebral events that can occur during cardiac arrest and resuscitation. We describe a model modified from Smith et al. (1984) 2, as first presented in its current form in Sanderson, et al. (2008) 3, which produces reproducible injury to selectively vulnerable brain regions 3-6. The reliability of this model is dictated by precise control of systemic blood pressure during applied hypotension, the duration of ischemia, close temperature control, a specific anesthesia regimen, and diligent post-operative care. An 8-minute ischemic insult produces cell death of CA1 hippocampal neurons that progresses over the course of 6 to 24 hr of reperfusion, while less vulnerable brain regions are spared. This progressive cell death is easily quantified after 7-14 days of reperfusion, as a near complete loss of CA1 neurons is evident at this time.
In addition to this brain injury model, we present a method for CA1 damage quantification using a simple, yet thorough, methodology. Importantly, quantification can be accomplished using a simple camera-mounted microscope, and a free ImageJ (NIH) software plugin, obviating the need for cost-prohibitive stereology software programs and a motorized microscopic stage for damage assessment.

Bilateral carotid occlusion coupled with systemic hypotension produces global brain ischemia in the rat, resulting in damage to the hippocampus with reproducible severity. Animal subjects are impaired with predictable patterns of brain damage, they recover expediently, and mortality rates are comparatively low.

2 혈관 폐색 / 저혈압 : 세계적인 두뇌 국소 빈혈의 쥐 모델

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색의 쥐 뇌졸중 모델에서 뇌 관류 모니터링에 최적화 된 시스템

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Stereological and Flow Cytometry Characterization of Leukocyte Subpopulations in Models of Transient or Permanent Cerebral Ischemia

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after stroke. These myeloid cell subpopulations can display different phenotypes and functions and need to be distinguished and characterized to study their regulation and contribution to tissue damage. This protocol provides two different methodologies for brain immune cell characterization: a precise stereological approach and a flow cytometric analysis. The stereological approach is based on the optical fractionator method, which calculates the total number of cells in an area of interest (infarcted brain) estimated by a systematic random sampling. The second characterization approach provides a simple way to isolate brain leukocyte suspensions and to characterize them by flow cytometry, allowing for the characterization of microglia, infiltrated monocytes and neutrophils of the ischemic tissue. In addition, it also details a cerebral ischemia model in mice that exclusively affects brain cortex, generating highly reproducible infarcts with a low rate of mortality, and the procedure for histological brain processing to characterize infarct volume by the Cavalieri method.

Brain myeloid cells characterization following stroke can be performed by stereology using the optical fractionator method, or by a flow cytometric analysis of brain leukocytes suspensions. Both are useful techniques to perform an accurate phenotypical distinction of the main myeloid cell subsets found in the ischemic brain.

일시적 또는 영구적 인 뇌허혈 모델에서 백혈구 부분 집단의 Stereological 및 유동 세포 계측법 특성

Microglia activation, as well as extravasation of haematogenous macrophages and neutrophils, is believed to play a pivotal role in brain injury after ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

세 쥐의 경동맥 폐색으로 영구 말초 중간 대뇌을 수행하면 두피 허혈 지속적인 장애를 연구하는

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue plasminogen activator (tPA) as an approved drug treatment to target ischemic strokes. Current research in the field of ischemic stroke focuses on better understanding the pathophysiology of stroke, to develop and investigate novel pharmaceutical targets. Reliable experimental stroke models are crucial for the progression of potential treatments. The middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is clinically relevant and the most frequently used surgical model of ischemic stroke in rodents. However, the outcomes of this model, such as lesion volume, are associated with high levels of variability, particularly in mice. The alternative MCAO model described here allows the reperfusion of the common carotid artery (CCA) and the increased perfusion of the middle cerebral artery (MCA) territory, using a tissue pad with fibrinogen-based sealant to repair the vessel, and the improved welfare of the mice by avoiding external carotid artery (ECA) ligation. This reduces the reliance on the Circle of Willis, which is known to be highly anatomically variable in mice. Representative data show that using this alternative surgical approach decreases the variability in lesion volumes between the traditional MCAO approach and the alternative approach described here.

Intraluminal filament occlusion of the middle cerebral artery is the most frequently used in vivo model of experimental stroke in rodents. An alternative surgical approach to allow common carotid artery repair is performed here, which allows the reperfusion of the common carotid artery and a full reperfusion to the middle cerebral artery territory.

쥐에 있는 일반적인 경 동맥 수리 통해 Reperfusion를 허용 하는 중간 대뇌 동맥 폐색

The ischemic stroke is a major cause of adult long-term disability and death worldwide. The current treatments available are limited, with only tissue ...

Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse model is useful for investigating the pathophysiology of cerebral ischemia-reperfusion and determining potential therapeutic strategies for patients with stroke. Variations in the anatomy of the circle of Willis of C57BL/6 mice affects their infarct volume after cerebral-ischemia-induced injury. Studies have indicated that distal MCA occlusion (MCAO) can overcome this problem and result in a stable infarct size. In this study, we establish a two-vessel occlusion mouse model of cerebral ischemia-reperfusion through the interruption of the blood flow to the right MCA. We distally ligate the right MCA and right common carotid artery (CCA) and restore blood flow after a certain period of ischemia. This ischemia-reperfusion injury induces an infarct of stable size and a behavioral deficit. Peripheral immune cells infiltrate the ischemic brain within the 24 h infiltration period. Additionally, the neuronal loss in the cortical area is less for a longer reperfusion duration. Therefore, this two-vessel occlusion model is suitable for investigating the immune response and neuronal recovery during the reperfusion period after cerebral ischemia.

A mouse model of cerebral ischemia-reperfusion is established to investigate the pathophysiology of stroke. We distally ligate the right middle cerebral artery and right common carotid artery and restore blood flow after 10 or 40 min of ischemia.

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

In this study, a middle cerebral artery (MCA) occlusion mouse model is employed to study cerebral ischemia-reperfusion. A reproducible and reliable mouse ...