DT נתמכה על ידי מלגת לימודים פוסט דוקטורט מle Fonds דה משוכלל ונדיר du Québec-Nature et טכנולוגיות (FQRNT) וMITACS לרומם אסטרטגית מלגה. CMC נתמכה על ידי מלגת לימודים פוסט דוקטורט מle Fonds דה משוכלל ונדיר en סנטה du קוויבק (FRSQ) וארנסט ומענק מחקר קרדיולוגיה ניחן מרגרט פורד מאוניברסיטת אוטווה לב המכון. EOB נתמכה על ידי MOP80204 הפעלת מענקים מהמכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR) וT6335 מהלב ושבץ קרן של אונטריו. CIHR ומדטרוניק לספק קולקטיבי EOB עם מחקר קתדרת ביקורת עמיתים (URC # 57,093). AEP ממומן על ידי למדעי הטבע והנדסת מועצת המחקר (NSERC) דיסקברי גרנט, מוסף NSERC Discovery Accelerator והכרת תודה מכיר את תמיכתם של כיסאות קנדה מחקר תכנית (CRC) ופרס חוקר מוקדם ממחוז אונטריו.

1. עיוות מכאנית של תאים בודדים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המצאה של מצע PDMS עם חרוזי ניאון מוטבעים לפני הייצור של המצע, זעירים מניאון במי פתרון הוא resuspended בisopropanol כדי לשפר את ערבוב חרוז בPDMS בשל האופי הידרופובי שלה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 500 μl של microspheres ניאון לתוך צינור 1.5 מיליליטר microcentrifuge ו צנטריפוגות ב XG 16,200 עבור 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל supernatant ולהוסיף 500 μl של isopropanol אחריו עם 5 דקות של vortexing. שים את הבקבוקון בצד לילה בחושך על מנת לאפשר לכל חלקיקים גדולים אגרגטים למשקעים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת בבוקר, בזהירות להסיר את supernatant לבקבוקון microcentrifuge נקי. פתרון חרוז זה יכול לשמש כדי להמציא יותר מ -5 מצעים. הערה: הפתרון חרוז ימשיך משקעים במשך 3 הימים הבאים. להיות זהיר, כדי למנוע resuspending גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 0.5 גרם סוכן הריפוי של הניתןעם ערכת PDMS בבקבוקון microcentrifuge 1.5 מיליליטר באמצעות איזון מדעי. על ידי צעדים רצופים, להוסיף סך של 90 μl של חרוזים (בשישה 15 נוספו μl), vortexing דקות 1 בין כל תוספת. מניח בצד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוקל 10 גרם של PDMS ולערבב במשך דקות לפחות 12 עם g 0.5 סוכן הריפוי בתוספת חרוזי ניאון של. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפברק SU-8 2050 עובש בצורת צלב באמצעות טכניקות photolithography סטנדרטיות הבאות הוראות יצרן. יש העובש משמש לגובה של 320 מיקרומטר ושטח של 13.4 סנטימטר 2 (איור 3). העובש יכול להכיל 428 μl או 440 מ&quot;ג של PDMS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים 400 מ&quot;ג של PDMS עם חרוזים בעובש בצורת צלב בעזרת פיפטה העברה ולרפא לשעה 2 ב 80 ° C. לאחר הריפוי, לקלף את המצע מהתבנית (איור 5 א). המצע יכול להיות כל הזמן בצלחת פטרי בטמפרטורת חדר למשך 2 שבועות בלי להראות שינויים משמעותיים בתכונות מכאניות שלה. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים טיפות של PDMS (ריפוי סוכן: PDMS עם יחס של 1:20) בצלחת פטרי עם גודל סופי של כ -4 מ&quot;מ קוטר ולרפא אותם במהופך לשעה 2 ב 80 ° C (איור 5). יכולות להיות כל הזמן תכונות עיגון אלה בצלחת פטרי במשך שבועות. הערה: שמור על הצלחת הפוכה כדי למנוע טיפות מההשטחה במהלך תהליך הריפוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פינוק אוויר פלזמה (30 שניות ב30 W) המצע ו8 תכונות עיגון. לאגד תכונות בכל קצה של המצע במרחק של 4 מ&quot;מ מהכניסה בצורת הריבוע בהווה על המצע (איור 5 ג). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ההרכבה ממברנה על אטבים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעטוף את כל קצה של המצע סביב החלק הגלילי מחורץ של מלחציים ולאבטח אותו במקום עם 2 setscrews מהחלק העליון (איור 2 ומספרים 5D-E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בורג 4 מלחציים על בעל המהדק ושופך PDMS (1:20 יחס) באמצעות t חד פעמיפיפטה ransfer בממשק שבין המצע לבין החלק הגלילי מחורץ של מהדק. מורחים את PDMS הדפוק סביב החלק הגלילי מחורץ באמצעות מפתח Hex 1.5 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים PDMS (1:20) בחריצים עד מלא לחלוטין על ידי פעולת נימים ולרפא את ההרכבה על 80 מעלות צלזיוס במשך שעה 2 (איור 5F). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זריעת תאים בממברנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פינוק אוויר פלזמה (30 שניות ב30 W) את המכלול השלם לעקר וfunctionalize המצע כדי לאפשר לציפוי קולגן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Functionalize השטח של המצע שבו תא יהיה זרע עם 1 מיליליטר של 0.02 M חומצה אצטית בתוספת 16 מיקרוגרם / מיליליטר של קולגן עכברוש זנב בטמפרטורת חדר במשך שעה 1. צפיפות קולגן הסופית הרצויה היא 5 מיקרוגרם / 2 סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את המצע 3x עם חיץ פוספט ולתת לו להתייבש בטמפרטורת חדר למשך לפחות עבור 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 40 μl של מדיום התרבות בתוספת 10% Seru שור עוברימ &#39;ו -1% פניצילין, סטרפטומיצין המכיל 2,000 תאים בחלק המרכזי של המצע כדי לכסות על שטח של 1 סנטימטר 2 (צפיפות תאים: 20 תאים / מ&quot;מ 2). צפיפות תאים ניתן לשנות בהתאם לדרישות ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את כל ההרכבה בחממה תרבות תא רגילה עם המצע פונה כלפי מעלה עם הירידה של מדיום התרבות המכיל תאים על זה. הערה: ההרכבה חייבת להישמר עם המצע פונה כלפי מעלה למשך לפחות 3 שעות כדי לאפשר לתאים לצרף אותו בחוזקה. על מנת למנוע אידוי, 30 μl של מדיום תרבות החם מתווסף לירידה על פני המצע כל 45 דקות במשך 3 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 3 שעות, להפוך את המכלול השלם לתוך צלחת פטרי מלא במדיום תרבות טרי להטביע את המצע ודגירת לילה כדי לאפשר לתאים להתרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למחרת, להכין פתרון HEPES שנאגר מלוח (HBSS; 20 מ&quot;מ של Hepes, 120 מ&quot;מ של NaCl, 5.3 מ&quot;מ של KCl, 0.8 מ&quot;מ של 4 MgSO, 1.8 מ&quot;מ של CaCl 2, ו11.1 מ&quot;מ של דהxtrose). התאם את ה-pH 7.4. הערה: פתרון HBSS צריך להיות מוכן מדי יום ושמר על 37 מעלות צלזיוס במהלך הניסויים. פתרון פיסיולוגי זה משמש כדי לשמור על התאים על הבמה מיקרוסקופ על ידי חיקוי סביבת רקמה / דם הנורמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר את ההגדרה על ניגוד שלב הפוך או מיקרוסקופ פלואורסצנטי הר ההרכבה מהדק-מצע על פלטפורמת BAXS ומנועים. מלא את צלחת פטרי בתוך תנור צלחת פטרי עם חיץ HEPES (איור 2 ד). </li></ol></li></ol> 2. נוקשות מדידה של כלי קליבר הקטן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון פיסיולוגי קרבס: הכן פתרון של 118.1 mM NaCl, 11.1 מ&quot;מ D-גלוקוז, 25 מ&quot;מ NaHCO 3, 4.7 מ&quot;מ KCl, 1.2 מ&quot;מ MgSO 4, 1.2 מ&quot;מ KH 2 PO 4, ו2.5 מ&quot;מ CaCl 2. התאם את ה-pH 7.4 וחמצן את הפתרון עם גז carbogen רפואי (95% O CO 2 2/5%) למשך 30 דקות. הערה: soluti קרבסבצריך להיות מוכן מדי יום ושמר על 37 מעלות צלזיוס במהלך הניסויים. פתרון פיסיולוגי זה משמש כדי לשמור על הרקמות בחיים על ידי חיקוי סביבת רקמה / דם הנורמלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף מכשור לנתיחה והערכה מכאנית של כלי אב העורקים: מספריים כירורגיות, פינצטה bended, מיקרו המספריים, מיקרוסקופ לנתח כירורגית, 50 צינורות צנטריפוגה מיליליטר פוליפרופילן, ו10 מיליליטר טפטפות סרולוגיות. ההליך כירורגי וניסוי לא דורש שום תנאים סטריליים. הר מלחציים של פלטפורמת BAXS יחד עם תא העומס מראש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בידוד רקמות וDissection כל הליכי הניסוי הכרוכים בחיות מעבדה צריכים להיות מאושרים על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים ושימוש במשתמשים &#39;מוסד, העומדת בבריאות המדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה של המשתמשים&#39; ארץ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע המתת חסד עכבר עם שאיפה של 99% CO 2 (7 psi)ב( איור 6 א) תא פרספקס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטן עכבר פתוח וחתך את אב העורקים החזי לדמם העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הסרעפת, כלוב בית החזה ואונות ריאה (איור 6). הערה: כדי למזער את הסיכון לפגיעה ברקמה, לשמור על הלב מחובר לאב העורקים והימנעו מלגעת בכלי ישירות אלא לתפעל אותו באמצעות הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הלב, אב העורקים ושורש אב העורקים החזי על ידי חיתוך בעדינות בין הכלי ועמוד השדרה. הערה: אל תגרום להתארכות כלשהי בספינה במהלך הכריתה כדי לשמור את המבנה הפנימי של שלמות (איור 6 ג) לרקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מייד לטבול ולשמור על הלב ואב העורקים בפתרון קרבס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגזור וזהירות לשטוף את אב העורקים בפתרון קרבס כדי להסיר כל קרישי דם. הסרת רקמת חיבור באמצעות מיקרו מספריים, פינצטה ומיקרוסקופ לנתח כירורגית (איור 6 ד-E). הערה: שמור את כל האונייה שהאורך ולהשתמש AOR<html> שורש טיק כדי לקבוע את כיוון הספינה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קביעת ממד כלי והרכבה כדי לקבוע את הנוקשות של כלי השיט, ממדי הספינה נפרקו נדרשים וניתן לקבוע עם מיקרוסקופ מכויל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך טבעת אב העורקים של כ -2 מ&quot;מ אורך ובדיוק למדוד את אורכה באמצעות מיקרוסקופ מכויל הגדרה (איורים 6F-G). שים מגזר זה בצד בפתרון קרבס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים עוד טבעת אב העורקים קטנה ככל האפשר בין כל אחד ממגזרי 2 מ&quot;מ (איור 6F). שים את הקטע הקטן הזה בשקופית זכוכית מיקרוסקופ עם לומן פונה כלפי מעלה ולמדוד את עובי הקיר באמצעות הגדרה מכוילת מיקרוסקופ (איור 6 שעות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את צלחת פטרי על פלטפורמת BAXS עם פתרון קרבס ולהכניס את קטע טבעת אב העורקים 2 מ&quot;מ על הפינים מושכים (הבלעה באיור 4C). </li></ol></li></ol><html> ge = &quot;תמיד&quot;&gt; <img alt="איור 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51454/51454fig5highres.jpg" width="500" /> איור 5. ייצור PDMS מצע והרכבה.) לאחר הריפוי, המצע הוא קילף בזהירות את תבנית 2050 SU-8 ולשים בצד בצלחת פטרי. ב &#39;) עיגון תכונות עשויות מPDMS ולעזור כדי לאבטח את המצע על מלחציים מצע. C) עם עיגון תכונות מוכנות להרכבה. ד &#39;) המצע הוא רכוב על 4 מלחציים, אשר לאחר מכן הם רכובים על בעל המהדק (ראה הבלעה).) תמונה מפורטת E של המצע רכוב על 4 מלחציים. F נוהל) מילוי PDMS בחריץ שמתחת למצע. החץ מראה את PDMS ממלא את החריץ באיטיות על ידי נימיות. &quot;Width =&quot; 454fig6highres.jpg 500 &quot;/&gt; איור 6. הכנה ובידוד של אב העורקים החזי.) הכנת מכשירי ניתוח ואת העכבר מורדמים. ב &#39;) דרך חתך בבטן האורכי, כלוב בית החזה והריאות lobs יוסרו. C) אב העורקים הוא הסיר בזהירות באמצעות הלב כדי לתפעל הרקמה. ד &#39;) הלב ואב העורקים הם הכניסו בפתרון פיסיולוגי קרבס. אב העורקים הוא ניקה על ידי הסרת כל רקמות החיבור. E תמונה) מפורטת המראה את. פלח לב ואב העורקים F) אב עורקים המשמש להערכת נוקשות יחד עם מקטעים קטנים המשמשים למדידת עובי. GH) האורך המדויק (G) ועובי (H) של כל מגזרי כלי מוערכים באמצעות מיקרוסקופ הפוך ותכנית ניתוח.

<ol>
	<li>Yim, E. K., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force-dependent+cell+signaling+in+stem+cell+differentiation.">Force-dependent cell signaling in stem cell differentiation.</a> Stem Cell Res Ther. 3, (2012).</li><li>Vogel, V., Sheetz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+force+and+geometry+sensing+regulate+cell+functions.">Local force and geometry sensing regulate cell functions.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 7, 265-275 (2006).</li><li>Wang, N., Tytell, J. D., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+at+a+distance:+mechanically+coupling+the+extracellular+matrix+with+the+nucleus.">Mechanotransduction at a distance: mechanically coupling the extracellular matrix with the nucleus.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 10, 75-82 (2009).</li><li>Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanobiology+and+diseases+of+mechanotransduction.">Mechanobiology and diseases of mechanotransduction.</a> Ann Med. 35, 564-577 (2003).</li><li>Janmey, P. A., Miller, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+mechanical+signaling+in+development+and+disease.">Mechanisms of mechanical signaling in development and disease.</a> J Cell Sci. 124, 9-18 (2011).</li><li>Bukoreshtliev, N. V., Haase, K., Pelling, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+cues+in+cellular+signalling+and+communication.">Mechanical cues in cellular signalling and communication.</a> Cell Tissue Res. 352, 77-94 (2013).</li><li>Chen, Y., Pasapera, A. M., Koretsky, A. P., Waterman, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orientation-specific+responses+to+sustained+uniaxial+stretching+in+focal+adhesion+growth+and+turnover.">Orientation-specific responses to sustained uniaxial stretching in focal adhesion growth and turnover.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 110, (2013).</li><li>Rosenzweig, D. H., Matmati, M., Khayat, G., Chaudhry, S., Hinz, B., Quinn, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Primary+Bovine+Chondrocytes+on+a+Continuously+Expanding+Surface+Inhibits+Dedifferentiation.">Culture of Primary Bovine Chondrocytes on a Continuously Expanding Surface Inhibits Dedifferentiation.</a> Tissue Eng Part A. 18, 2466-2476 (2012).</li><li>Balachandran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+strain+induces+dual-mode+endothelial-mesenchymal+transformation+of+the+cardiac+valve.">Cyclic strain induces dual-mode endothelial-mesenchymal transformation of the cardiac valve.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108, 19943-19948 (1994).</li><li>Steward, R., Cheng, C. M., Ye, J., Bellin, R., LeDuc, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stretch+and+shear+flow+induced+reorganization+and+recruitment+of+fibronectin+in+fibroblasts.">Mechanical stretch and shear flow induced reorganization and recruitment of fibronectin in fibroblasts.</a> Sci Rep. 1, (2011).</li><li>Wang, D., Xie, Y., Yuan, B., Xu, J., Gong, P., Jiang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+stretching+device+for+imaging+real-time+molecular+dynamics+of+live+cells+adhering+to+elastic+membranes+on+inverted+microscopes+during+the+entire+process+of+the+stretch.">A stretching device for imaging real-time molecular dynamics of live cells adhering to elastic membranes on inverted microscopes during the entire process of the stretch.</a> Integr Biol (Camb). 2, 288-293 (2010).</li><li>Haskett, D., Johnson, G., Zhou, A., Utzinger, U., Van de Geest, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microstructural+and+biomechanical+alterations+of+the+human+aorta+as+a+function+of+age+and+location.">Microstructural and biomechanical alterations of the human aorta as a function of age and location.</a> Biomech Model Mechanobiol. 9, 725-736 (2010).</li><li>Duprey, A., Khanafer, K., Schlicht, M., Avril, S., Williams, D., Berguer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+characterisation+of+physiological+and+maximum+elastic+modulus+of+ascending+thoracic+aortic+aneurysms+using+uniaxial+tensile+testing.">In vitro characterisation of physiological and maximum elastic modulus of ascending thoracic aortic aneurysms using uniaxial tensile testing.</a> Eur J Vasc Endovasc Surg. 39, 700-707 (2010).</li><li>Tremblay, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+mechanical+properties+of+materials+used+in+aortic+arch+reconstruction.">A comparison of mechanical properties of materials used in aortic arch reconstruction.</a> Ann Thorac Surg. 88, 1484-1491 (2009).</li><li>Khanafer, K., Duprey, A., Zainal, M., Schlicht, M., Williams, D., Berguer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+elastic+modulus+of+ascending+thoracic+aortic+aneurysm+at+different+ranges+of+pressure+using+uniaxial+tensile+testing.">Determination of the elastic modulus of ascending thoracic aortic aneurysm at different ranges of pressure using uniaxial tensile testing.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 142, 682-686 (2011).</li><li>Van de Geest, J. P., Sacks, M. S., Vorp, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+aneurysm+on+the+biaxial+mechanical+behavior+of+human+abdominal+aorta.">The effects of aneurysm on the biaxial mechanical behavior of human abdominal aorta.</a> J Biomech. 39, 1324-1334 (2006).</li><li>Guolla, L., Bertrand, M., Haase, K., Pelling, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+transduction+and+strain+dynamics+in+actin+stress+fibres+in+response+to+nanonewton+forces.">Force transduction and strain dynamics in actin stress fibres in response to nanonewton forces.</a> J Cell Sci. 125, 603-613 (2012).</li><li>Wang, J. H., Goldschmidt-Clermont, P., Wille, J., Yin, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+endothelial+cell+reorientation+in+response+to+cyclic+mechanical+stretching.">Specificity of endothelial cell reorientation in response to cyclic mechanical stretching.</a> J Biomech. 34, 1563-1572 (2001).</li><li>Jungbauer, S., Gao, H., Spatz, J. P., Kemkemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+characteristic+regimes+in+frequency-dependent+dynamic+reorientation+of+fibroblasts+on+cyclically+stretched+substrates.">Two characteristic regimes in frequency-dependent dynamic reorientation of fibroblasts on cyclically stretched substrates.</a> Biophys J. 95, 3470-3478 (2008).</li><li>Dahl, K. N., Ribeiro, A. J. S., Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+shape,+mechanics,+and+mechanotransduction.">Nuclear shape, mechanics, and mechanotransduction.</a> Circ Res. 102, 1307-1318 (2008).</li><li>Shivashankar, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanosignaling+to+the+cell+nucleus+and+gene+regulation.">Mechanosignaling to the cell nucleus and gene regulation.</a> Annu Rev Biophys. 40, 361-378 (2011).</li><li>Chiquet, M., Gelman, L., Lutz, R., Maier, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+mechanotransduction+to+extracellular+matrix+gene+expression+in+fibroblasts.">From mechanotransduction to extracellular matrix gene expression in fibroblasts.</a> Biochim Biophys Acta. 1793, 911-920 (2009).</li><li>Sullivan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+A-type+lamin+expression+compromises+nuclear+envelope+integrity+leading+to+muscular+dystrophy.">Loss of A-type lamin expression compromises nuclear envelope integrity leading to muscular dystrophy.</a> J Cell Biol. 147, 913-920 (1999).</li><li>Lammerding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamin+A/C+deficiency+causes+defective+nuclear+mechanics+and+mechanotransduction.">Lamin A/C deficiency causes defective nuclear mechanics and mechanotransduction.</a> J Clin Invest. 113, 370-378 (2004).</li><li>Tremblay, D., Andrzejewski, L., Leclerc, A., Pelling, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+and+microtubules+play+distinct+roles+in+governing+the+anisotropic+deformation+of+cell+nuclei+in+response+to+substrate+strain.">Actin and microtubules play distinct roles in governing the anisotropic deformation of cell nuclei in response to substrate strain.</a> Cytoskeleton. , (2013).</li><li>Cuerrier, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+over-expression+of+heat+shock+protein+27+attenuates+atherogenesis+and+enhances+plaque+remodeling:+a+combined+histological+and+mechanical+assessment+of+aortic+lesions.">Chronic over-expression of heat shock protein 27 attenuates atherogenesis and enhances plaque remodeling: a combined histological and mechanical assessment of aortic lesions.</a> PLoS ONE. 8, (2013).</li><li>Tremblay, D., Cartier, R., Mongrain, R., Leask, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+dependency+of+the+vascular+smooth+muscle+cell+contribution+to+the+mechanical+properties+of+the+pig+ascending+aortic+tissue.">Regional dependency of the vascular smooth muscle cell contribution to the mechanical properties of the pig ascending aortic tissue.</a> J Biomech. 43, 2448-2451 (2010).</li><li>Barker, A. J., Lanning, C., Shandas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+hemodynamic+wall+shear+stress+in+patients+with+bicuspid+aortic+valve+using+phase-contrast+MRI.">Quantification of hemodynamic wall shear stress in patients with bicuspid aortic valve using phase-contrast MRI.</a> Ann Biomed Eng. 38, 788-800 (2010).</li><li>Haga, J. H., Li, Y. S. J., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+the+effects+of+mechanical+stretch+on+vascular+smooth+muscle+cells.">Molecular basis of the effects of mechanical stretch on vascular smooth muscle cells.</a> J Biomech. 40, 947-960 (2007).</li><li>Frydrychowicz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+magnetic+resonance+angiography+and+flow-sensitive+4-dimensional+magnetic+resonance+imaging+at+3+Tesla+for+blood+flow+and+wall+shear+stress+analysis.">Time-resolved magnetic resonance angiography and flow-sensitive 4-dimensional magnetic resonance imaging at 3 Tesla for blood flow and wall shear stress analysis.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 136, 400-407 (2008).</li><li>Boccafoschi, F., Mosca, C., Bosetti, M., Cannas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mechanical+stretching+in+the+activation+and+localization+of+adhesion+proteins+and+related+intracellular+molecules.">The role of mechanical stretching in the activation and localization of adhesion proteins and related intracellular molecules.</a> J Cell Biochem. 112, 1403-1409 (2011).</li><li>Yang, G., Crawford, R. C., Wang, J. H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+and+collagen+production+of+human+patellar+tendon+fibroblasts+in+response+to+cyclic+uniaxial+stretching+in+serum-free+conditions.">Proliferation and collagen production of human patellar tendon fibroblasts in response to cyclic uniaxial stretching in serum-free conditions.</a> J Biomech. 37, 1543-1550 (2004).</li><li>Goldyn, A. M., Rioja, B. A., Spatz, J. P., Ballestrem, C., Kemkemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force-induced+cell+polarisation+is+linked+to+RhoA-driven+microtubule-independent+focal-adhesion+sliding.">Force-induced cell polarisation is linked to RhoA-driven microtubule-independent focal-adhesion sliding.</a> J Cell Sci. 122, 3644-3651 (2009).</li><li>Heo, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiber+stretch+and+reorientation+modulates+mesenchymal+stem+cell+morphology+and+fibrous+gene+expression+on+oriented+nanofibrous+microenvironments.">Fiber stretch and reorientation modulates mesenchymal stem cell morphology and fibrous gene expression on oriented nanofibrous microenvironments.</a> Ann Biomed Eng. 39, 2780-2790 (2011).</li><li>Zdero, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linear+and+torsional+mechanical+characteristics+of+intact+and+reconstructed+scapholunate+ligaments.">Linear and torsional mechanical characteristics of intact and reconstructed scapholunate ligaments.</a> J Biomech Eng. 131, (2009).</li></ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

פלטפורמת BAXS שהוצגה כאן מאפשרת מספר רב של ניסויים בחקר mechanobiology, מחקירות של תאים בודדים לכל רקמות. בנוסף, הפלטפורמה גמישה מאוד להגדרה, ומאפשרת למספר רב של ניסויים מכאניים גירוי ובדיקת מתיחה רב צירית. הפלטפורמה מאפשרת גם התחזוקה של תאים ורקמות בתנאים פיסיולוגיים ומאפשר...

Microenvironment המכני משחק תפקיד חשוב בפונקציות רבות תא, כגון התפשטות, הגירה, ובידול, שיש לו השפעה עמוקה בפיתוח והומאוסטזיס של רקמות וגם במחלות 1-6. במהלך השנים, מספר רב של כלים ניסיוניים כבר בשימוש כדי לעורר מכאני תאים או רקמות ולמדוד תכונות מכאניות של רקמות ביולוגיות, במטרה להגביר את ההבנה של mechanobiology הבסיסי שלנו ולומד את תחילת התקדמות של מחלות 6-17. עם זאת, יש לעתים קרובות מסתמך על מספר התקני ניסויים שונים על מנת להשיג את מטרותיו של מחקר מסוים. מאמר זה מציג פלטפורמה אחת, רב תפקודית, biaxial מתיחה (BAXS) המאפשרת למחקרים הבודקים את התפקיד שתכונות מכאניות וכוחות מכאניים לשחק בביולוגיה במשנה הסלולר לסולמות אורך רקמה כולה. פלטפורמת BAXS לא רק מאפשרת לquantification של תכונות מכאניות של רקמות מבודדות, אלא גם מקל על היכולת ליישם את שדות זן פשוטים, מורכבים, ודינמיים לתאי חיים כדי להבין את התגובות שלהם למתיחה המתרחשת בגוף חי. פלטפורמת BAXS גם שומרת על היכולת לבצע מיקרוסקופיה לחיות תאים במהלך בדיקה מכאנית והפרעות בתאים וברקמות. פלטפורמת BAXS היא מנגנון שהותקן בם ניתן להשתמש כדי לחקור את ההשפעה של עיוות מצע ברמה התאית ולבצע בדיקות מתיחה ברקמות ביולוגיות (איור 1 א). דוד אלומיניום היה מפוברק כדי להכיל מנה 10 ס&quot;מ פטרי סטנדרטי ולתחזק פתרונות פיסיולוגיים כלשהי על 37 מעלות צלזיוס באמצעות בקר טמפרטורה ותנורי Kapton (איור 1). פלטפורמת BAXS זה יכול להיות משולב על גבי לעומת שלב הפוך ו / או מיקרוסקופ פלואורסצנטי ומאפשרת הדמיה בו זמנית (תרשים 1C).בקיצור, פלטפורמת BAXS מורכבת מארבעת מנועים הסליל ליניארי של אשר החלקים הנעים הם רכובים על שקופיות נושאת תנועה ליניארית כדור הזעיר בכיוון לאורך שני צירים מאונכים (1D איור). שלב מיצוב יניארי הוא רכוב לכל אחד מארבעת מנועים, כדי לאפשר תנועה אנכית של מערכת ההידוק שישמש (איור 1E). המיקום של כל מנוע מנוטר על ידי מקודד אופטי עם רזולוציה של 500 ננומטר (איור 1F). כל ארבעה מנועים באופן עצמאי נשלטים עם בקר תנועת העסקת משוב מקודד אופטי כדי לבצע פקודות תנועה (איור 1G). ממשק LabVIEW מספק שליטה מלאה על עוצמת התזוזה, מהירות ותאוצה של כל מנוע על מנת ליצור עיוות לחלוטין להתאמה אישית, סטטית ודינמית, של התאים או דגימות רקמה. הטכניקה המשמשת כדי לגרום לעיוות בתאים מושגת על ידי פשוט allowinתאים גרם לדבוק בתקיפות למצע גמיש ושקוף ולאחר מכן מתיחות מצע זה באמצעות ארבעה מנועים של פלטפורמת BAXS. פלטפורמת BAXS מאפשרת הרכבה של כל קבוצה מותאמת במיוחד מלחציים לצרף את המצע על מנועים סליל קול. לצורך כך, עיצבנו סט של מהדק שאליו מצע גמיש ושקוף, עשוי polydimethylsiloxane (PDMS), יכול להיות מחובר (איורים 2A-C ו איור 3). כמו מלחציים יהיו חשופים לפתרונות פיסיולוגיים, כל החלקים היו במכונה מנירוסטה כדי לאפשר לעיקור. מלחציים אלה תוכננו בקפידה כדי להביא את המצע הקרוב ככל האפשר למטרת מיקרוסקופ כדי לשפר את איכות תמונה, תוך מזעור הלחץ על המצע במהלך המתיחה (איור 2 ד). גם אותה פלטפורמת BAXS יכולה לשמש כדי לכמת את הנוקשות של דגימות רקמה קטנות, תוך שימוש בסט מתאים של מלחציים עם ADAPטד תומך לדגימות הרקמה ותא מטען כדי לפקח על כוחות. ניתן לנקוט במספר גישות להר רקמות למנועי פלטפורמת BAXS; במקרה זה סיכות minutiens החרקים הנירוסטה יכולות להתחבר דרך הפתח של רקמות כלי דם על מנת לבצע בדיקות מתיחה (איורים 4 א-B). לחלופין, לרקמות עבות ללא פתיחה טבעית, יכולים להיות שנערכו קצות רקמות בעמדה עם מלחציים מחוברים למנועי סליל קול או דבוקים לשקופיות זכוכית קטנות עם דבק ביולוגי ומחוברים למנועים עם מהדק. על מנת לבצע מתיחה בדיקות תא עומס מיניאטורי נדרש ויכול להיות משולב בקלות על מנועים פלטפורמת BAXS ומשמש למדידת הכוח הפועל על הרקמות במהלך מחזור (איור 4C) מתיחה. כפלטפורמת BAXS מורכבת מארבעה מנועים, את ההקדמה של תא עומס שני מאפשרת לבצע בדיקות מתיחים לאורך שני כיוונים מאונך. יכולת זו מאפשרת לאדם quantify הנוקשות מכאניות של רקמה אחת לאורך שני כיוונים ניצבת במהלך אותו הניסוי. חשוב לציין, בכל התצורות, התאים או דגימות רקמה של העניין תמיד נשמרו באמבט בטמפרטורה מבוקרת, כי הוא נגיש למשתמש. יכולת זו מאפשרת להקדמה של סוכנים תרופתיים במהלך מדגם מתיחה על מנת לבחון את התגובה הזמנית של המדגם. בנוסף, כציר האופטי של המיקרוסקופ ההפוך נותר בלא הפרעה, כל הצורות של מיקרוסקופיה עדיין זמינות למשתמש. לבסוף, כמו בכל ארבעת מנועים של פלטפורמת BAXS הם בלתי תלויים זה אפשרי ליישם את שדות זן מאוד להגדרה למדגם של עניין. בvivo תאים ורקמות חשופים למורכב ואיזוטרופי מתיחה שיכולה להיות הולם יותר חיקה בפלטפורמה זו בניגוד ל7,13,15,18,19 uniaxial מסורתי מתיחת פלטפורמה. יתר על כן, מאפיינים הפיזייםשל שדה המתח ניתן לשנות על לטוס במהלך ניסוי. יכולות אלו מאפשרות למשתמש לבחון את התגובה התאית ורקמות ברמה למספר רחב של המורכב ביותר, איזוטרופי, באופן זמני, ושדות מתח מרחבית שונים. מאמר זה מתאר את היתרונות ומגבלות של פלטפורמת BAXS כמו גם העיצוב שלו, עקרונות פעולה, ואת פרטי ניסיוני לתא בודד וניסויים רקמה כולה. <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51454/51454fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1. סקירה כללית של פלטפורמת BAXS. א) להציג לראש פלטפורמת BAXS מראה את ארבעת מנועים סליל קול. ב &#39;) תמונה מפורטת של דוד צלחת פטרי משמש כדי לשמור על תאים ורקמות ב37 ° C. C) הפלטפורמה יכולה להיות מותקנת על מיקרוסקופ הפוכה לבצע-live הדמיה תא במהלך ניסויי מתיחה.ד) תמונה מפורטת של מנוע סליל קול; תמונת החלק הנע של הפלטפורמה. ה) מפורטת של שלב המיקום ליניארי ומאפשר תזוזה אנכית של מערכות הידוק תמונה מפורטת. F) של המקודד האופטי המספק עמדה של המנוע בזמן אמת לבקר התנועה.) תמונה מפורטת G של בקר התנועה המראה את ארבע כניסות מקודד אופטיות ותפוקות כוח לארבעה מנועים סליל קול. <img alt="איור 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51454/51454fig2highres.jpg" width="500" /> איור 2. הידוק מערכת לניסויי תא מתיחה. תמונות א.ב.) מציגים את הפרטים של מלחציים משמשים לצרף את מצע PDMS למנועי סליל קול למתיחה. C) המצע כרוך סביב החלק הגלילי של המהדק עם featur עיגונהes יושב לתוך החריץ בחלק העליון. אז המצע הוא מאובטח באמצעות setscrews כי לדחוף את המצע / עיגון תכונות לתוך החריץ העליון. D איור) של פלטפורמת BAXS עם מלחציים מחזיקים המצע במקום. הבלעה מראה תצוגה מפורטת של המצע עם התאים קשורים אליו יושבים בדיוק מעל להחליק את מכסה ואובייקטיבי מיקרוסקופ. <img alt="איור 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51454/51454fig3highres.jpg" width="500" /> איור 3. ביל של חומרים של מערכת ההידוק שלה הקרום ו. שרטוטים מראים את הממדים של החלקים העיקריים משולבים לפלטפורמת biaxial לבצע ניסויי תא מתיחה. <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51454/51454fig4highres.jpg" width="500" /> איור 4. אקסשפע של מערכת הידוק להערכת נוקשות של כלי קליבר קטנים תמונות מפורטות. א.ב.) של מערכת הידוק שימוש כדי לגרום לעיוות באב העורקים עכבר בקוטר 1 מ&quot;מ. סיכות נירוסטה עוצבו בקפידה למשולשים פתוחים על מנת לאפשר את הכלי כדי להחליק על שני סיכות איור. C) של פלטפורמת BAXS עם מלחציים מחזיקים את הכלי ותא עומס המחובר בין המנוע הקבוע ומהדק את השמאל. הבלעה מראה עליונה תצוגה מפורטת של הכלי רכוב על הסיכות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="849">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">PDMS</td>
			<td style="width:155px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:255px;">184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td>
			<td style="width:167px;">The ratio base to cross-linker used in this protocol is 20:1. Mix in a laminar hood to keep dust from contamining your&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">FluoSpheres fluorescent microspheres</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">F8810</td>
			<td>Keep away from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Linear voice coil</td>
			<td style="width:155px;">Moticont</td>
			<td style="width:255px;">LVCM-051-051-01</td>
			<td>The motro comes in two pieces (magnet and coil). It has to be mounted on a ball bearing sytem to be functional.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Ball bearing slide</td>
			<td style="width:155px;">Edmund Optics</td>
			<td style="width:255px;">NT37-360</td>
			<td>Miniature and Small Linear Motion Ball Bearing Slides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">linear positioning stage</td>
			<td style="width:155px;">Edmund Optics</td>
			<td style="width:255px;">38-960</td>
			<td>Center Drive 1.25&#34; Square Linear Translation Stages</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">optical encoder</td>
			<td style="width:155px;">GSI microE systems</td>
			<td style="width:255px;">Mercury II 1600S - 0.5um resolution</td>
			<td>reflective incremental encoder.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">motion controller</td>
			<td style="width:155px;">Galil</td>
			<td style="width:255px;">DMC-2143(DIN)-DC48 with AMP-20440</td>
			<td>4 axis controller with a 4 axis amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">load cell&#160;</td>
			<td style="width:155px;">Honeywell</td>
			<td style="width:255px;">31 low</td>
			<td>miniature load cell with a range of 0-150 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Insect minutiens pins (0,20mm)</td>
			<td style="width:155px;">Pin Service Austerlitz Insect pins</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td>Stainless steel pins that are bended in an opened triangle shape</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">SU-8 2050</td>
			<td style="width:155px;">Micro Chem</td>
			<td style="width:255px;">SU-8 2050</td>
			<td>Permanent epoxy negative photoresist. Keep away from heat and light</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Air-plasma treatment system</td>
			<td style="width:155px;">Glowresearch</td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td>Autoglow Oxygen Plasma System</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Rat-tail collagen</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">A10483-01</td>
			<td>Collagen I, Rat Tail 5mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Hoechst 33342</td>
			<td style="width:155px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">R37605</td>
			<td>DNA-specific fluorescent dye. Keep in the fridge.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">Kapton (Polyimide Film) Insulated Flexible Heaters</td>
			<td style="width:155px;">omega.ca</td>
			<td style="width:255px;">KHLV-0504/(10)-P</td>
			<td>28V flexible heaters; can be supplied with a 24V</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:273px;">1/16 DIN Autotune Temperature and Process Controllers</td>
			<td style="width:155px;">omega.ca</td>
			<td style="width:255px;">CN63200-R1-LV</td>
			<td>Temperature controller; supply 24 V.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">DMEM culture medium</td>
			<td style="width:155px;">Hyclone</td>
			<td style="width:255px;">SH3024301</td>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified 30 Eagle Medium. Keep at 4 C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td style="width:155px;">Hyclone</td>
			<td style="width:255px;">SV30010</td>
			<td>Keep stock frozen. Keep working solution at 4 C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:155px;">Hyclone</td>
			<td style="width:255px;">SH3039603C</td>
			<td>Keep frozen.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Trypsin 0,05%</td>
			<td style="width:155px;">Hyclone</td>
			<td style="width:255px;">SH30236,02</td>
			<td>Keep frozen. Digestion of cell attachement proteins for subcultivation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Hepes</td>
			<td style="width:155px;">Wisent Inc</td>
			<td style="width:255px;">330-050-EL</td>
			<td>HEPES-buffered salt solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">NaCl</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">BP358-1</td>
			<td>HEPES-buffered salt solution / Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">KCl</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">BP366-500</td>
			<td>HEPES-buffered salt solution / Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:273px;">MgSO4</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">M65-500</td>
			<td>HEPES-buffered salt solution / Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:273px;">CaCl2</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">C614-500</td>
			<td>HEPES-buffered salt solution / Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Dextrose</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">BP220-1</td>
			<td>HEPES-buffered salt solution / Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:273px;">NaHCO3</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">BP328-1</td>
			<td>Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:273px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:155px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:255px;">BP362-500</td>
			<td>Krebs physiological solution</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:273px;">Carbogen 95% O2/ 5% CO2</td>
			<td style="width:155px;">Lindle</td>
			<td style="width:255px;">DIN:02154749</td>
			<td>Krebs physiological solution oxygenation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Nocodazole</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">M1404</td>
			<td>Microtubules depolymerization agent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Cytochalasin-D</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">C8273</td>
			<td>Actin filaments depolymerization agent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Anti-&#945;-SMA-FITC</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td style="width:255px;">F3777</td>
			<td>Used to stain and quantify smooth muscle cells content</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:273px;">Picrosirius red stain</td>
			<td style="width:155px;">Fluka</td>
			<td style="width:255px;">43665</td>
			<td>Used to stain and quantify collagen content</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel stretching platform for applications in cell and tissue mechanobiology

כלים המאפשרים היישום של כוחות מכאניים לתאים ורקמות או שיכולים לכמת את התכונות מכאניות של רקמות ביולוגיות תרמו באופן משמעותי להבנה של mechanobiology הבסיסי. טכניקות אלה היו בשימוש נרחב על מנת להדגים כיצד התפרצות וההתקדמות של מחלות שונות מושפעות במידה רבה על ידי רמזים מכאניים. מאמר זה מציג פלטפורמת biaxial רב תפקודית מתיחה (BAXS) שגם יכול מכניים לעורר תאים בודדים או לכמת את הנוקשות מכאניות של רקמות. פלטפורמת BAXS מורכבת מארבעה מנועים סליל קול שניתן לשלוט באופן עצמאי. יכולים להיות מתורבת תאים בודדים על מצע גמיש שיכול להיות מחובר למנועים המאפשרים אחד כדי לחשוף את התאים לשדות זן מורכבים, דינמיים, ומרחבית שונה. לעומת זאת, על ידי שילוב של תא כוח עומס, אפשר גם לכמת את התכונות מכאניות של רקמות עיקריות כפי שהם נחשפים למחזורי עיוות.בשני המקרים, סט נכון של מלחציים חייב להיות מתוכנן ורכוב על מנועים פלטפורמת BAXS כדי להחזיק את המצע גמיש או הרקמות של עניין בתוקף. פלטפורמת BAXS יכולה להיות מותקנת על מיקרוסקופ הפוכה לבצע אור מסור בו זמנית ו / או דימות פלואורסצנטי כדי לבחון את התגובה המבנית או ביוכימי של המדגם במהלך ניסויי מתיחה. מאמר זה מספק פרטים ניסיוניים של העיצוב ושימוש בפלטפורמת BAXS ומציג תוצאות עבור תא בודד ומחקרי רקמה כולה. פלטפורמת BAXS שימשה למדידת העיוות של גרעינים בתאים והיצמדות למנגנון עכבר אחת בתגובה למצע מתח ולמדוד את הנוקשות של aortas עכבר הבודד. פלטפורמת BAXS היא כלי תכליתי שיכול להיות משולב עם microscopies האופטי השונים על מנת לספק תובנות mechanobiological רומן ברמות המשנה הסלולר, סלולארי וכל הרקמות.

תא מתיחה פלטפורמת BAXS שימשה כדי לחקור את התגובה מכאנית של הגרעין בתאים והיצמדות למנגנון עכבר אחת (C2C12) נחשף לעיוות מצע של 25%. תאים והיצמדות למנגנון נמצאים ברקמת שריר ונחשפים כל הזמן למתיחה מכאנית ודחיסת in vivo. מאפייני ה...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology at JoVE.com

A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology

אנו מציגים במאמר זה פלטפורמה חדשני מתיחה שיכול לשמש כדי לחקור את תגובות תא בודדות לעיוות מכאנית biaxial איזוטרופי מורכב ולכמת את התכונות מכאניות של רקמות ביולוגיות.

פלטפורמה חדשני מתיחה עבור יישומים בתאים והרקמות mechanobiology

Tools that allow the application of mechanical forces to cells and tissues or that can quantify the mechanical properties of biological tissues have ...

a-novel-stretching-platform-for-applications-cell-tissue

Research

JoVE Journal

Bioengineering

11.6K Views.  University of Ottawa.  אנו מציגים במאמר זה פלטפורמה חדשני מתיחה שיכול לשמש כדי לחקור את תגובות תא בודדות לעיוות מכאנית biaxial איזוטרופי מורכב ולכמת את התכונות מכאניות של רקמות ביולוגיות. 

Video: A Novel Stretching Platform for Applications in Cell and Tissue Mechanobiology

Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1 While microcontact printing can be employed to directly print a large number of molecules, including proteins,2 DNA,3 and silanes,4 the formation of self-assembled monolayers (SAMs) from long chain alkane thiols on gold provides a simple way to confine proteins and cells to specific patterns containing adhesive and resistant regions. This confinement can be used to control cell morphology and is useful for examining a variety of questions in protein and cell biology. Here, we describe a general method for the creation of well-defined protein patterns for cellular studies.5 This process involves three steps: the production of a patterned master using photolithography, the creation of a PDMS stamp, and microcontact printing of a gold-coated substrate. Once patterned, these cell culture substrates are capable of confining proteins and/or cells (primary cells or cell lines) to the pattern.
The use of self-assembled monolayer chemistry allows for precise control over the patterned protein/cell adhesive regions and non-adhesive regions; this cannot be achieved using direct protein stamping. Hexadecanethiol, the long chain alkane thiol used in the microcontact printing step, produces a hydrophobic surface that readily adsorbs protein from solution. The glycol-terminated thiol, used for backfilling the non-printed regions of the substrate, creates a monolayer that is resistant to protein adsorption and therefore cell growth.6 These thiol monomers produce highly structured monolayers that precisely define regions of the substrate that can support protein adsorption and cell growth. As a result, these substrates are useful for a wide variety of applications from the study of intercellular behavior7 to the creation of microelectronics.8
While other types of monolayer chemistry have been used for cell culture studies, including work from our group using trichlorosilanes to create patterns directly on glass substrates,9 patterned monolayers formed from alkane thiols on gold are straight-forward to prepare. Moreover, the monomers used for monolayer preparation are commercially available, stable, and do not require storage or handling under inert atmosphere. Patterned substrates prepared from alkane thiols can also be recycled and reused several times, maintaining cell confinement.10

Self-assembled monolayers (SAMs) formed from long chain alkane thiols on gold provide well-defined substrates for the formation of protein patterns and cell confinement. Microcontact printing of hexadecanethiol using a polydimethylsiloxane (PDMS) stamp followed by backfilling with a glycol-terminated alkane thiol monomer produces a pattern where protein and cells adsorb only to the stamped hexadecanethiol region.

יצירת דו מימדי מצעים Patterned עבור החזקת חלבון ו-Cell

Microcontact printing provides a rapid, highly reproducible method for the creation of well-defined patterned substrates.1  While microcontact printing ...

Sandwich-like Microenvironments to Harness Cell/Material Interactions

Cell culture has been traditionally carried out on bi-dimensional (2D) substrates where cells adhere using ventral receptors to the biomaterial surface. However in vivo, most of the cells are completely surrounded by the extracellular matrix (ECM), resulting in a three-dimensional (3D) distribution of receptors. This may trigger differences in the outside-in signaling pathways and thus in cell behavior.
This article shows that stimulating the dorsal receptors of cells already adhered to a 2D substrate by overlaying a film of a new material (a sandwich-like culture) triggers important changes with respect to standard 2D cultures. Furthermore, the simultaneous excitation of ventral and dorsal receptors shifts cell behavior closer to that found in 3D environments. Additionally, due to the nature of the system, a sandwich-like culture is a versatile tool that allows the study of different parameters in cell/material interactions, e.g., topography, stiffness and different protein coatings at both the ventral and dorsal sides. Finally, since sandwich-like cultures are based on 2D substrates, several analysis procedures already developed for standard 2D cultures can be used normally, overcoming more complex procedures needed for 3D systems.

The following protocol describes the procedure to assemble sandwich-like cultures to be used as an intermediate stage between bi-dimensional (2D) and three-dimensional (3D) cellular environments. The engineered systems can have applications in microscopy, biomechanics, biochemistry and cell biology assays.

כמו כריך microenvironments לרתום ניידים / חומרי אינטראקציות

Cell culture has been traditionally carried out on bi-dimensional (2D) substrates where cells adhere using ventral receptors to the biomaterial surface. ...

A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet high-throughput, method to perform single-cell culture experiments. Here, we report a microfluidic chip-based strategy for high-efficiency single-cell isolation (~77%) and demonstrate its capability of performing long-term single-cell culture (up to 7 d) and cellular heterogeneity analysis using clonogenic assay. These applications were demonstrated with KT98 mouse neural stem cells, and A549 and MDA-MB-435 human cancer cells. High single-cell isolation efficiency and long-term culture capability are achieved by using different sizes of microwells on the top and bottom of the microfluidic channel. The small microwell array is designed for precisely isolating single-cells, and the large microwell array is used for single-cell clonal culture in the microfluidic chip. This microfluidic platform constitutes an attractive approach for single-cell culture applications, due to its flexibility of adjustable cell culture spaces for different culture strategies, without decreasing isolation efficiency.

Here, we present a protocol for isolating and culturing single cells with a microfluidic platform, which utilizes a new microwell design concept to allow for high-efficiency single cell isolation and long-term clonal culture.

פלטפורמת Microfluidic עבור בידוד תפוקה גבוהה מתא בודד ותרבות

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet ...

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In particular, light-mediated click reactions, such as photoinitiated thiol&#8722;ene and thiol&#8722;yne reactions, afford spatiotemporal control over material properties and allow the design of systems with a high degree of user-directed property control. Fabrication and modification of hydrogel-based biomaterials using the precision afforded by light and the versatility offered by these thiol&#8722;X photoclick chemistries are of growing interest, particularly for the culture of cells within well-defined, biomimetic microenvironments. Here, we describe methods for the photoencapsulation of cells and subsequent photopatterning of biochemical cues within hydrogel matrices using versatile and modular building blocks polymerized by a thiol&#8722;ene photoclick reaction. Specifically, an approach is presented for constructing hydrogels from allyloxycarbonyl (Alloc)-functionalized peptide crosslinks and pendant peptide moieties and thiol-functionalized poly(ethylene glycol) (PEG) that rapidly polymerize in the presence of lithium acylphosphinate photoinitiator and cytocompatible doses of long wavelength ultraviolet (UV) light. Facile techniques to visualize photopatterning and quantify the concentration of peptides added are described. Additionally, methods are established for encapsulating cells, specifically human mesenchymal stem cells, and determining their viability and activity. While the formation and initial patterning of thiol-alloc hydrogels are shown here, these techniques broadly may be applied to a number of other light and radical-initiated material systems (e.g., thiol-norbornene, thiol-acrylate) to generate patterned substrates.

We describe a sequential process for light-mediated formation and subsequent biochemical patterning of synthetic hydrogel matrices for three-dimensional cell culture applications. The construction and modification of hydrogels with cytocompatible photoclick chemistry is demonstrated. Additionally, facile techniques to quantify and observe patterns and determine cell viability within these hydrogels are presented.

אור בתיווך גיבוש דפוסים של הידרוג עבור יישומי תרבית תאים

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In ...

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional Poly(&#949;-caprolactone) Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology with great potential for biomedical applications. The technique facilitates the direct deposition of biocompatible polymer fibers to fabricate well-ordered scaffolds in the sub-micron to micro scale range. The establishment of a stable, viscoelastic, polymer jet between a spinneret and a collector is achieved using an applied voltage and can be direct-written. A significant benefit of a typical porous scaffold is a high surface-to-volume ratio which provides increased effective adhesion sites for cell attachment and growth. Controlling the printing process by fine-tuning the system parameters enables high reproducibility in the quality of the printed scaffolds. It also provides a flexible manufacturing platform for users to tailor the morphological structures of the scaffolds to their specific requirements. For this purpose, we present a protocol to obtain different fiber diameters using melt electrospinning writing (MEW) with a guided amendment of the parameters, including flow rate, voltage and collection speed. Furthermore, we demonstrate how to optimize the jet, discuss often experienced technical challenges, explain troubleshooting techniques and showcase a wide range of printable scaffold architectures.

Melt Electrospinning Writing of Three-dimensional Poly(&amp;#949;-caprolactone) Scaffolds with Controllable Morphologies for Tissue Engineering Applications

This protocol serves as a comprehensive guideline to fabricate scaffolds via electrospinning with polymer melts in a direct writing mode. We systematically outline the process and define the appropriate parameter settings for achieving targeted scaffold architectures.

להמיס Electrospinning הכתיבה של פיגומים Poly(ε-caprolactone) תלת מימדי עם מורפולוגיות לשליטה עבור יישומי הנדסת רקמות

This tutorial reflects on the fundamental principles and guidelines for electrospinning writing with polymer melts, an additive manufacturing technology ...

An Ultrahigh-throughput Microfluidic Platform for Single-cell Genome Sequencing

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of cellular heterogeneity in biological systems. However, single-cell sequencing of large populations has been hampered by limitations in processing genomes for sequencing. In this paper, we describe a method for single-cell genome sequencing (SiC-seq) which uses droplet microfluidics to isolate, amplify, and barcode the genomes of single cells. Cell encapsulation in microgels allows the compartmentalized purification and tagmentation of DNA, while a microfluidic merger efficiently pairs each genome with a unique single-cell oligonucleotide barcode, allowing &gt;50,000 single cells to be sequenced per run. The sequencing data is demultiplexed by barcode, generating groups of reads originating from single cells. As a high-throughput and low-bias method of single-cell sequencing, SiC-seq will enable a broader range of genomic studies targeted at diverse cell populations.

Single-cell sequencing reveals genotypic heterogeneity in biological systems, but current technologies lack the throughput necessary for the deep profiling of community composition and function. Here, we describe a microfluidic workflow for sequencing &gt;50,000 single-cell genomes from diverse cell populations.

פלטפורמת Microfluidic על קוליים בתפוקה של רצף הגנום בתא יחיד

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of ...

A Novel Tenorrhaphy Suture Technique with Tissue Engineered Collagen Graft to Repair Large Tendon Defects

Surgical management of large tendon defects with tendon grafts is challenging, as there are a finite number of sites where donors can be readily identified and used. Currently, this gap is filled with tendon auto-, allo-, xeno-, or artificial grafts, but clinical methods to secure them are not necessarily translatable to animals because of the scale. In order to evaluate new biomaterials or study a tendon graft made up of collagen type 1, we have developed a modified suture technique to help maintain the engineered tendon in alignment with the tendon ends. Mechanical properties of these grafts are inferior to the native tendon. To incorporate engineered tendon into clinically relevant models of loaded repair, a strategy was adopted to offload the tissue engineered tendon graft and allow for the maturation and integration of the engineered tendon in vivo until a mechanically sound neo-tendon was formed. We describe this technique using incorporation of the collagen type 1 tissue engineered tendon construct.

In this paper, we present an in vitro and in situ protocol to repair a tendon gap of up to 1.5 cm by filling it with engineered collagen graft. This was performed by developing a modified suture technique to take the mechanical load until the graft matures into the host tissue.

טכניקת תפירת טנורהאפי חדשנית עם שתל קולגן מהונדס רקמה לתיקון פגמים גדולים בגיד

Surgical management of large tendon defects with tendon grafts is challenging, as there are a finite number of sites where donors can be readily ...

A Microfluidic Platform for Stimulating Chondrocytes with Dynamic Compression

Mechanical stimuli are known to modulate biological functions of cells and tissues. Recent studies have suggested that compressive stress alters growth plate cartilage architecture and results in growth modulation of long bones of children. To determine the role of compressive stress in bone growth, we created a microfluidic device actuated by pneumatic pressure, to dynamically (or statically) compress growth plate chondrocytes embedded in alginate hydrogel cylinders. In this article, we describe detailed methods for fabricating and characterizing this device. The advantages of our protocol are: 1) Five different magnitudes of compressive stress can be generated on five technical replicates in a single platform, 2) It is easy to visualize cell morphology via a conventional light microscope, 3) Cells can be rapidly isolated from the device after compression to facilitate downstream assays, and 4) The platform can be applied to study mechanobiology of any cell type that can grow in hydrogels.

This article provides detailed methods for fabricating and characterizing a pneumatically actuating microfluidic device for chondrocyte compression.

פלטפורמת מיקרופלואידיג לעירור כונדרוציטים עם דחיסה דינמית

Mechanical stimuli are known to modulate biological functions of cells and tissues. Recent studies have suggested that compressive stress alters growth ...

Establishing Single-Cell Based Co-Cultures in a Deterministic Manner with a Microfluidic Chip

Cell co-culture assays have been widely used for studying cell-cell interactions between different cell types to better understand the biology of diseases including cancer. However, it is challenging to clarify the complex mechanism of intercellular interactions in highly heterogeneous cell populations using conventional co-culture systems because the heterogeneity of the cell subpopulation is obscured by the average values; the conventional co-culture systems can only be used to describe the population signal, but are incapable of tracking individual cells behavior. Furthermore, conventional single-cell experimental methods have low efficiency in cell manipulation because of the Poisson distribution. Microfabricated devices are an emerging technology for single-cell studies because they can accurately manipulate single cells at high-throughput and can reduce sample and reagent consumption. Here, we describe the concept and application of a microfluidic chip for multiple single-cell co-cultures. The chip can efficiently capture multiple types of single cells in a culture chamber (~46%) and has a sufficient culture space useful to study the cells&#39; behavior (e.g., migration, proliferation, etc.) under cell-cell interaction at the single-cell level. Lymphatic endothelial cells and oral squamous cell carcinoma were used to perform a single-cell co-culture experiment on the microfluidic platform for live multiple single-cell interaction studies.

This report describes a microfluidic chip-based method to set up a single cell culture experiment in which high-efficiency pairing and microscopic analysis of multiple single cells can be achieved.

הקמת תרבויות בודדות מבוססות-משותפות באופן דטרמיניסטי עם שבב מיקרופלואידיסי

Cell co-culture assays have been widely used for studying cell-cell interactions between different cell types to better understand the biology of diseases ...

Developing 3D Organized Human Cardiac Tissue within a Microfluidic Platform

The leading cause of death worldwide persists as cardiovascular disease (CVD). However, modeling the physiological and biological complexity of the heart muscle, the myocardium, is notoriously difficult to accomplish in vitro. Mainly, obstacles lie in the need for human cardiomyocytes (CMs) that are either adult or exhibit adult-like phenotypes and can successfully replicate the myocardium&#39;s cellular complexity and intricate 3D architecture. Unfortunately, due to ethical concerns and lack of available primary patient-derived human cardiac tissue, combined with the minimal proliferation of CMs, the sourcing of viable human CMs has been a limiting step for cardiac tissue engineering. To this end, most research has transitioned toward cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) as the primary source of human CMs, resulting in the wide incorporation of hiPSC-CMs within in vitro assays for cardiac tissue modeling.
Here in this work, we demonstrate a protocol for developing a 3D mature stem cell-derived human cardiac tissue within a microfluidic device. We specifically explain and visually demonstrate the production of a 3D in vitro anisotropic cardiac tissue-on-a-chip model from hiPSC-derived CMs. We primarily describe a purification protocol to select for CMs, the co-culture of cells with a defined ratio via mixing CMs with human CFs (hCFs), and suspension of this co-culture within the collagen-based hydrogel. We further demonstrate the injection of the cell-laden hydrogel within our well-defined microfluidic device, embedded with staggered elliptical microposts that serve as surface topography to induce a high degree of alignment of the surrounding cells and the hydrogel matrix, mimicking the architecture of the native myocardium. We envision that the proposed 3D anisotropic cardiac tissue-on-chip model is suitable for fundamental biology studies, disease modeling, and, through its use as a screening tool, pharmaceutical testing.

The goal of this protocol is to explain and demonstrate the development of a three-dimensional (3D) microfluidic model of highly aligned human cardiac tissue, composed of stem cell-derived cardiomyocytes co-cultured with cardiac fibroblasts (CFs) within a biomimetic, collagen-based hydrogel, for applications in cardiac tissue engineering, drug screening, and disease modeling.

פיתוח רקמת לב אנושית מאורגנת תלת מימדית בתוך פלטפורמה מיקרופלואידית

The leading cause of death worldwide persists as cardiovascular disease (CVD). However, modeling the physiological and biological complexity of the heart ...