עבודה זו מומנה באמצעות המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ R43 / R44 NS064661.

בצע את ההנחיות מוסדיות לטיפול בבעלי חיים לעיקור כלי כירורגי, ולשנות את הפרוטוקול כנדרש בכדי לעמוד בהנחיות ולקבל אישור על ידי הוועדה מוסדי הטיפול בבעלי חיים ושימוש של המוסד שלך (IACUC). 1. הכנת כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקות ולהכין את המשדר כדי להבטיח ניתוח בטוח וסטרילי. הסר את המשדר מהאריזה האנטי-סטטית שלה וגם ספריי או לטבול באתנול 70%. משדר שטיפה עם תמיסת מלח סטרילית ומקום בין ספוגים גפן סטרילי ספוגים בתמיסת מלח סטרילית או לשמור שקוע בתמיסת מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף ולעקר את הכלים הנדרשים לניתוח; החיטוי קיטור לעיקור. ראה טבלה של חומרים וריאגנטים לרשימה של כלים כירורגיים. </li></ol> 2. השתלה כירורגית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים ולשמור על הרדמה על פי פרוטוקול שאושר על-IACUC. בייזום ובמהלך surגרי לבדוק רפלקס הבוהן קמצוץ כל 15 דקות. חוסר התגובה מציין רמה מספקת של הרדמה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגורים, להשתמש בהרדמה על ידי isoflurane (4%) עם O 2 (100%). למבוגרים, להשתמש קטמין (100 מ&quot;ג / קילוגרם) עם xylazine (10 מ&quot;ג / קילוגרם). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן עמדה במסגרת stereotaxic. מניחים את הטיפים אוזן בר בmeatus השמיעתי. מוגזם אל תהדקו ברים אוזן כגולגולת רכה מאוד בגורי חולדה צעירים. אבטח את חרטומו הרדמה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור חמים לבעלי החיים במהלך ניתוח על ידי הצבתו על כרית החימום מוגדרת 37 מעלות צלזיוס. בבעלי חיים מבוגרים, להחיל סיכה משחה לעיניו של בעל החיים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר אתר חתך ולשמור על שדה ניתוח סטרילי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוגית הקרקפת עם יישומים לסירוגין של 70% אתנול ו בבטאדין. התחל במרכז הקרקפת ולעשות מעגלים יותר ויותר רחבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כסה את בעל החיים עם וילון ולנהל את הניתוח על בעלי חיים עטופים. לשמור על Steriתחום כירורגית le ידי המצפה את ההגדרה כירורגית בסדינים מעוקרים, ציוד תרסיס עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללבוש כפפות מנתחים סטרילית ושמלה (או כפי שנדרש על ידי המוסד). כדי לסייע לשמור על שדה סטרילי, להשתמש עוזר כירורגית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושה חתך בקרקפת של החיה מעט מאחורי העיניים לאורך קו האמצע, כ 2 סנטימטר. היזהר בעת החדרת האזמל כגולגולת היא עדיין רכה מאוד בגורי חולדה צעירים. ביצוע חתך בודד כל כך החתך מדמם פחות, ומרפא מהר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשוף את הגולגולת. הכן אזור נקי ויבש על מנת למקסם את הקשר בין המשדר ועצמות הגולגולת. השתמש קליפים פרצה לתפוס קרקפת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משכו בעדינות את הקרקפת מקו האמצע בארבע פינות. חפש אתרים אנטומיים כגון גבחת ומבדה בגולגולת. עצמות גולגולת זכרו לא התמזגו בבעלי חיים בגיל זה. השתמש באטלס פקסינוס של קואורדינטות stereotaxic למצוא את המיקום הנכון לחור בר. </li></ol&gt; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכלי Dremel סוג עם מקדח בר-סוג. צור שני חורים בר בעמדות הקלטה רצויה עם החורים גדולים יותר מלהיות 300 מיקרומטר בקוטר. מניחים את החור בר לאלקטרודה ההתייחסות על המוח הקטן מאחורי מבדה של הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שהחוטים במכשיר מיושרים עם החורים בר. אם חוטי אלקטרודה אינם מיושרים, זיהום דבק של אלקטרודות עשוי, ויגרום לאות עניה. כדי ליישר את החוטים, לבדוק את ההתאמה של המשדר ועדינות לכופף אלקטרודות בשורה על האתרים המיועדים לחורים בר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתוך מוביל אלקטרודה. השתמש במספריים כירורגית כדי לקצץ את האלקטרודות לאורך הרצוי. עומק אלקטרודה הוא חשוב לסוג של הקלטה הנדרש לניסוי (כלומר, למקם את האלקטרודות מעל דורה להקלטות EEG, או להשתמש בקואורדינטות stereotaxic למבנים במוח שהוגדרו). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בנדיבות להחיל cyanoacrylate על הבסיס לא משדרo לכסות את האזור והקפד להימנע מציפוי אלקטרודות. דבק cyanoacrylate הוא מבודד חשמלי, זיהום אלקטרודות עם דבק יגרום שום אות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם הקלטה ממבני מוח עמוקים, הר משדר על בעל הצינורית ולמקם אותו בזרוע stereotaxic לשליטת Z- ציר. מנמיכים את המשדר באמצעות זרוע stereotaxic לנכס עומק ומניח ג&#39;ל cyanoacrylate סביב משדר. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גולגולת ביסודיות יבשה לפני הנחת משדר כדי להבטיח אג&quot;ח דבק חזק. החל משדר מצופה cyanoacrylate לגולגולת. דואג ליישר אלקטרודות עם מקביל חורים בר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נסה להימנע ממבנים של כלי דם גדולים מזיקים. החזק את המשדר במקום עם לחץ קל לדקה אחת. השתמש לחץ קל כדי ליצור קשר חזק בין המשדר והגולגולת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל cyanoacrylate נוסף, מספיק כדי לאטום ממשק משדר / גולגולת לחלוטין. כדי להבטיח AGOOD כושר וקשר חזק, למקסם את שטח הפנים של הדבק שקשר הגולגולת. החל דבק cyanoacrylate במעגל סביב המשדר, כדי לוודא שהן הגולגולת והקיר של המשדר מכוסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל מאיץ כימי (0.1 מיליליטר) באמצעות מזרק סביב cyanoacrylate בבסיס של המשדר המושתל. השתמש במשורה מאיץ, נזהר שלא יחולו על רקמות סמוכות. הערה: האצה כימית של ריפוי cyanoacrylate מבטיחה כי הקשר החזק בין המשדר והגולגולת נוצר במהירות. מאיץ cyanoacrylate שימושי לריפוי מהיר של דבק, אך לא הכרחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המאיץ על ידי שטיפת האזור ביסודיות עם תמיסת מלח סטרילית. מאיץ cyanoacrylate עלול לגרום לגירוי רקמות אם לא שטף מאזור החתך. לשטוף את האזור, למלא מזרק 1.0 מיליליטר עם תמיסת מלח סטרילית ולהשקות את האזור באמצעות מחט מזרק. בדרך כלל 0.5 מיליליטר של תמיסת מלח הוא מספיק כדי לשטוף אתהמאיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפור את העור סביב הבסיס של המשדר, אך אינו מכסה את המשדר. לראש משדר חייב להיות מעל העור להעביר ביעילות אותות עצביים. עור צריך להיות הדוק למדי סביב משדר והדבק סביב היחידה. השתמש Vicryl או תפר משי (חוט רך); עור בבעלי חיים בוגרים הוא רך ונפגע בקלות אם לא נעשה שימוש בתפרים רכים. לבעלי חיים בוגרים, להשתמש בכל חומר תפירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר בעלי חיים ממסגרת stereotaxic ומקום על שמיכה מחוממת להתאוששות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא בעלי החיים הם חמים (37 מעלות צלזיוס) ואמבולטורי (כלומר, התאוששו לחלוטין) לפני ההחזרה לסכר. ודא כי בעל החיים הוא התייבשות על ידי צובט את העור על הגב של החיה (אם בעל החיים הוא מיובש, העור יישאר מעוות). אם בעל חיים הוא מיובש, לנהל הזרקה תת-עורי של חיץ רינגר יונק. אל תשאירו את בעלי החיים ללא השגחה עד שהוא חזר להכרה מספיק כדי לשמור עלכיבה sternal. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל עצירות (0.05 מ&quot;ג / קילוגרם) לבעלי חיים לטיפול בכאב לאחר ניתוח והזרקה תת עורית של 0.1-מיליליטר bupivacaine סביב אתר ההזרקה. הערה: מהתחלה ועד סוף ההליך כולו אמור להסתיים ב5-10 דקות לבעלי חיים בגיל זה (יום לידה 6). זמן כירורגי עשוי להימשך זמן רב יותר לבעלי חיים מבוגרים. </li></ol></li></ol> 3. טיפול והשיכון הערה: סכרים מסוימים עשויים שלא לסבול גורים מושתלים עם המכשיר. סכרים ייתכן שיהיו הצורך נבחרו שסובלניים. זה מקובל לסכר להעביר גורים סביב הכלוב על ידי להרים אותם על ידי המשדר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שבעלים חיים נגמלים, ביחידים ביתם, כדי למנוע את הסרת ההתקנים מבן הזוג בכלוב שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים על ידי מנה הקטלנית של pentobarbital (25 מ&quot;ג / קילוגרם) או isoflurane (בצנצנת פעמון) כאשר סימני המצוקה נוכחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו לב, כמה כלובי דיור חיה עם מוסיף חוט רשאי היתרfere עם המשדרים המושתלים. הקפד לבדוק את הגובה של להכניס את החוט לוודא כי בעלי חיים לא יכולים לקבל את המשדר נתפס בין &#39;הברים&#39; של להכניס את החוט. יש להתייעץ עם הווטרינר שלך לעזרה. </li></ol> 4. ההקלטה EEG <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה בכלוב על ידי עצמו או שיתוף שוכנו עם המלטה והסכר. עם זאת, מקום אחד בלבד הושתל בבעלי חיים בכלוב אחד. אל תשאירו גורים לבד בתא ההקלטה במשך יותר מ 2 שעות. צג בעלי החיים לסימני מצוקה והתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את אספקת החשמל המסופקת לבסיס המקלט ולאמת את נורית ההפעלה מוארת. חבר את בסיס המקלט לנתוני מערכת רכישה באמצעות כבלים (כידון ניל-Concelman) BNC. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את כלוב בעלי החיים על גבי בסיס המקלט (איור 2). אור &quot;האות&quot; צריך להאיר מצביע על משדר זוהה. הנתונים עשויים להיות מוקלטים עכשיו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> To נתוני שיא, לחבר את בסיס המקלט לממיר אנלוגי לדיגיטלי ולחבר את ממיר למחשב (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב הדגימה של ההקלטה. להבטיח נתונים נדגם כראוי. בחר שיעור לפחות 250 הרץ דגימה (500 הרץ המומלץ) להקלטה (רוחב פס של המשדר הוא .1-100 הרץ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הנתונים דיגיטליים ולנתח באמצעות חבילות תוכנה לעיבוד אות כגון Matlab. </li></ol> 5. EEG ניתוח - כללי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע FFTs (התמרות פורייה מהירה) כדי להפוך את נתוני ה- EEG זמניים לתחום התדר של 0-100 הרץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע הערכה של צפיפות הספקטרלית כוח (PSDs) מFFT באמצעות 256 מגזרים האן-חלון המבוססת על שיטת וולש והמנורמלת על ידי 10 x 10 להיכנס (PSD). ספקטרום כוח להראות את התדרים הספציפיים ששולטים באות EEG על פני תקופת הזמן הרצויה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתוני קבוצה על פני בעלי חיים על ידי לקיחת הממוצע של PSD מכל חיהעל טיפולים בהתאמה זמן. צור מרווחי ביטחון של 95% על ידי 1.96 x ממוצע (PSD) / שורש הריבועי (n) כאשר n הוא מספר בעלי החיים (עקבות PSD). עלילה מרווחי ביטחון הממוצע ו -95% מהנתונים כדי להפיק דוח הכמותי של כל התוכן בתדירות של EEG על פני קבוצות של בעלי חיים כגון השוואת קבוצות שטופלו לעומת קבוצות ביקורת. </li></ol> (HI) פרוטוקול דגם 6. Perinatal היפוקסיה-איסכמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את P6 - 7 גור ​​חולדה בהרדמה isoflurane (4% עם 100% O 2) על ידי הצבת בעלי החיים בתיבת הרדמה (תיבה עם קלט ממאדה הרדמה). בייזום ובמהלך הניתוח לבדוק הבוהן קמצוץ רפלקס כל 15 דקות. חוסר התגובה מציין רמה מספקת של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את הגור על הגב שלה, לחשוף את הצוואר ולשפשף עם יישומים לסירוגין של 70% אתנול ו בבטאדין 10%. חזור לשפשף אתנול / בטאדין 3 פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך 1 סנטימטר בעור של הצוואר עם יםcissors על קו האמצע של הצוואר. הרם את העור עם מלקחיים ולעשות חתך במספריים. יש להיזהר שלא לחתוך את רקמת השריר בעת ביצוע החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש בטכניקה לנתיחה בוטה לחשוף עורק הראשי. כדי לבצע נתיחה בוטה, להשתמש בשני זוגות של מלקחיים בוטים-האף. הכנס את הטיפים לרקמות ולתת פעולת האביב של המכשיר כירורגי להפיץ את הרקמה. חזור על פעולה עד העורק הראשי חשוף. זהה את העורק הראשי בצבע אדום בהיר והנוכחות של דופק גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עורק תרדמה נפרד מהעצב התועה באמצעות מלקחיים בוטים. הכנס את קצו המלקחיים הבוטה בין העורק והעצב. שחרר את המלקחיים ולתת פעולת אביב הכלי להפריד את הצוואר מהעצב התועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרצת מקום מלחציים 4-5 גזרי מ&quot;מ בעורק הראשי. יש להיזהר שלא לפגוע בעורק עם מלחציים על ידי הימנעות תנועות מהירות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לצרוב את העורק הראשי בין מלחציים הפרצה. ללצרוב את העורק, לגעת בעורק בין מלחציים עם קצה cauterizer חם. לאחר העורק הוא חתך, להבטיח את שני הקצוות צרובים כראוי כדי למנוע דימום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מהדק, לסגור את החתך בצוואר עם 3 תפרים. לתפור רק את העור, לדאוג שלא תפר את רקמת השריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר לבעלי החיים להתאושש במשך שעה 1. לפקח נשימה של בעלי החיים ודימום מהצוואר. אם הדימום הוא בהווה, אל תחשוף את בעלי החיים לHI (שלב 6.10). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה בחדר בטמפרטורה מבוקרת על 37 מעלות צלזיוס וברציפות להציג 8% 2/92% תערובת N 2 O לתוך התא לשעה 2. </li></ol>

<ol>
	<li>Boylan, G. B., Stevenson, N. J., Vanhatalo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+neonatal+seizures.">Monitoring neonatal seizures.</a> Semin. Fetal Neonatal Med. 18 (4), 208-208 (2013).</li><li>Panzica, F., Varotto, G., Rotondi, F., Spreafico, R., Franceschetti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+Epileptogenic+Zone+from+Stereo-EEG+Signals:+A+Connectivity-Graph+Theory+Approach.">Identification of the Epileptogenic Zone from Stereo-EEG Signals: A Connectivity-Graph Theory Approach.</a> Front Neurol. 6 (4), 175 (2013).</li><li>Arciniegas, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+electrophysiologic+assessments+and+mild+traumatic+brain+injury:+state-of-the-science+and+implications+for+clinical+practice.">Clinical electrophysiologic assessments and mild traumatic brain injury: state-of-the-science and implications for clinical practice.</a> Int J Psychophysiol. 82 (1), 41-52 (2011).</li><li>Mizrahi, E. M., Kellaway, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+concussion+in+children:+assessment+of+injury+by+electroencephalography.">Cerebral concussion in children: assessment of injury by electroencephalography.</a> Pediatrics. 73 (4), 419-425 (1984).</li><li>Pisarenco, I., Caporro, M., Prosperetti, C., Manconi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-density+electroencephalography+as+an+innovative+tool+to+explore+sleep+physiology+and+sleep+related+disorders.">High-density electroencephalography as an innovative tool to explore sleep physiology and sleep related disorders.</a> Int J Psychophysiol. S0167-8760 (14), 3-8 (2014).</li><li>Konadhode, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulation+of+MCH+neurons+increases+sleep.">Stimulation of MCH neurons increases sleep.</a> J. Neurosci. 33 (25), 10257-10263 (2013).</li><li>Bertram, E. H., Williamson, J. M., Cornett, J. F., Spradlin, S., Chen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+and+construction+of+a+long-term+continuous+video-EEG+monitoring+unit+for+simultaneous+recording+of+multiple+small+animals.">Design and construction of a long-term continuous video-EEG monitoring unit for simultaneous recording of multiple small animals.</a> Brain Res. Protoc. 1-2 (1), 85-97 (1997).</li><li>Stables, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapy+discovery+for+pharmacoresistant+epilepsy+and+for+disease-modifying+therapeutics:+Summary+of+the+NIH/NINDS/AES+Models+II+Workshop.">Therapy discovery for pharmacoresistant epilepsy and for disease-modifying therapeutics: Summary of the NIH/NINDS/AES Models II Workshop.</a> Epilepsia. 44 (12), 1472-1478 (2003).</li><li>White, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+unsupervised+algorithms+for+the+detection+of+seizures+in+continuous+EEG+recordings+from+rats+after+brain+injury.">Efficient unsupervised algorithms for the detection of seizures in continuous EEG recordings from rats after brain injury.</a> J. Neurosci. Methods. 152 (1-2), 255-266 (2006).</li><li>Bertram, E. H., Cornett, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ontogeny+of+seizures+in+a+rat+model+of+limbic+epilepsy:+evidence+for+a+kindling+process+in+the+development+of+chronic+spontaneous+seizures.">The ontogeny of seizures in a rat model of limbic epilepsy: evidence for a kindling process in the development of chronic spontaneous seizures.</a> Brain Res. 625 (2), 295-300 (1993).</li><li>Bertram, E. H., Cornett, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+a+rat+model+of+chronic+spontaneous+limbic+seizures.">The evolution of a rat model of chronic spontaneous limbic seizures.</a> Brain Res. 661 (1-2), 157-162 (1994).</li><li>Williams, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+spontaneous+recurrent+seizures+after+kainate-induced+status+epilepticus.">Development of spontaneous recurrent seizures after kainate-induced status epilepticus.</a> J. Neurosci. 29 (7), 2103-2112 (2009).</li><li>Kadam, S. D., White, A. M., Staley, K. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+electroencephalographic+monitoring+with+radio-telemetry+in+a+rat+model+of+perinatal+hypoxia-ischemia+reveals+progressive+post-stroke+epilepsy.">Continuous electroencephalographic monitoring with radio-telemetry in a rat model of perinatal hypoxia-ischemia reveals progressive post-stroke epilepsy.</a> J. Neurosci. 30 (1), 404-415 (2010).</li><li>Galanopoulou, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+mechanisms+of+catastrophic+epilepsy+--+overview+from+animal+models.">Basic mechanisms of catastrophic epilepsy -- overview from animal models.</a> Brain Dev. 35 (8), 748-756 (2013).</li><li>Lerche, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+channels+in+genetic+and+acquired+forms+of+epilepsy.">Ion channels in genetic and acquired forms of epilepsy.</a> J Physiol. 591 (Pt 4), 753-764 (2013).</li><li>Rossignol, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WONOEP+appraisal:+new+genetic+approaches+to+study+epilepsy).">WONOEP appraisal: new genetic approaches to study epilepsy).</a> Epilepsia. 55 (8), 1170-1186 (2014).</li><li>Westmark, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+fragile+X+phenotypes+by+manipulation+of+A&#946;PP/A&#946;+levels+in+Fmr1KO+mice.">Reversal of fragile X phenotypes by manipulation of A&#946;PP/A&#946; levels in Fmr1KO mice.</a> PLoS One. 6 (10), e26549 (2011).</li><li>Sukhotinsky, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+delay+of+status+epilepticus+onset+in+an+in+vivo+rodent+epilepsy+model.">Optogenetic delay of status epilepticus onset in an in vivo rodent epilepsy model.</a> PLoS One. 8 (4), e62013 (2013).</li><li>Krook-Magnuson, E., Armstrong, C., Oijala, M., Soltesz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-demand+optogenetic+control+of+spontaneous+seizures+in+temporal+lobe+epilepsy.">On-demand optogenetic control of spontaneous seizures in temporal lobe epilepsy.</a> Nat Commun. 4, 1376 (2013).</li><li>Paz, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Closed-loop+optogenetic+control+of+thalamus+as+a+tool+for+interrupting+seizures+after+cortical+injury.">Closed-loop optogenetic control of thalamus as a tool for interrupting seizures after cortical injury.</a> Nat Neurosci. 16 (1), 64-70 (2013).</li><li>Monod, N., Pajot, N., Guidasci, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neonatal+EEG:+statistical+studies+and+prognostic+value+in+full-term+and+pre-term+babies.">The neonatal EEG: statistical studies and prognostic value in full-term and pre-term babies.</a> Electroecephalogr Clin Neurophysiol. 32 (5), 529-544 (1972).</li><li>Deshpande, L. S., Carter, D. S., Blair, R. E., DeLorenzo, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Prolonged+Calcium+Plateau+in+Hippocampal+Neurons+in+Rats+surviving+Status+Epilepticus+Induced+by+the+Organophosphate+Diisopropylfluorophosphate.">Development of a Prolonged Calcium Plateau in Hippocampal Neurons in Rats surviving Status Epilepticus Induced by the Organophosphate Diisopropylfluorophosphate.</a> Toxicol Sci. 116 (2), 623-631 (2010).</li><li>Todorovic, M. S., Cowan, M. L., Balint, C. A., Sun, C., Kapur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+status+epilepticus+induced+by+two+organophosphates+in+rats.">Characterization of status epilepticus induced by two organophosphates in rats.</a> Epilpsy Res. 101 (3), 268-276 (2012).</li><li>Lehmkuhle, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+quantitative+method+for+analyzing+electrographic+status+epilepticus+in+rats.">A simple quantitative method for analyzing electrographic status epilepticus in rats.</a> J. Neurophysiol. 101 (3), 1660-1670 (2009).</li><li>Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Fisher, J. H., Ekstrand, J. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recording+EEG+in+immature+rats+with+a+novel+miniature+telemetry+system.">Recording EEG in immature rats with a novel miniature telemetry system.</a> J. Neurophysiol. 109 (3), 900-911 (2013).</li><li>Pouliot, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+electrographic+analysis+of+the+effect+of+sec-butyl-propylacetamide+on+pharmacoresistant+status+epilepticus.">A comparative electrographic analysis of the effect of sec-butyl-propylacetamide on pharmacoresistant status epilepticus.</a> Neuroscience. 12 (231), 145-156 (2012).</li><li>Levine, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxic-ischemic+encephalopathy+in+rats.">Anoxic-ischemic encephalopathy in rats.</a> Am J Pathol. 36, 1-17 (1960).</li><li>Vannucci, R. C., Vaccucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+perinatal+hypoxic-ischemic+brain+damage.">A model of perinatal hypoxic-ischemic brain damage.</a> Ann N Y Acad Sci. 835, 234-249 (1997).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2012).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2013).</li><li>Bolkvadze, T., Pitkanen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+post-traumatic+epilepsy+after+controlled+cortical+impact+and+lateral+fluid-percussion-induced+brain+injury+in+the+mouse.">Development of post-traumatic epilepsy after controlled cortical impact and lateral fluid-percussion-induced brain injury in the mouse.</a> J. Neurotrauma. 29 (5), 789-812 (2012).</li></ol>

בני הזוג. יש לי Lehmkuhle ודודק אינטרס כלכלי בEpitel, Inc, מעצבים של מערכת הקלטת biopotential האלחוטית אפוק.

זה יכול להיות מאוד יקר לבצע הקלטות electrographic לטווח ארוך בדגמים קטנה-חיה של מחלה. על ידי הסתמכות על מעגלים חשמליים פשוטים והדגשת צריכת הספק נמוך, הצלחנו ליצור מערכת משדר (איורים 1 ו -2) שמפחיתה את העלות של ניסויי ניטור ארוך טווח. העלות הכוללת של ניסוי ניטור 6 חודשים יכולה להיות נמוכה כמו 470 $, בתוספת העלות של בעלי החיים (~ 1.5 $ החיה אש&quot;ל, $ 200 משדר). הגודל הקטן של המשדר מאפשר הקלטות רציפות ללא הפרעות electrographic בקטנים-בעלי חיים, מודלים פרה-קליניים של מחלה אנושית, אשר קשות מאוד להשיג עם מערכות מבוססות תדר רדיו קשור או אלחוטיות הקלטה (איור 4). לבסוף, הטבע רכוב הגולגולת של המשדר מפחית את זמן ניתוח ולחץ על בעלי החיים, כי אחר יכול להתפשר ניסוי. כאן, אנו מציגים ניסויי הוכחה של עיקרון משלושה הבדלמודלים erent ניסיוניים של התקפים: סביב הלידה היפוקסיה-איסכמיה 13, 27, 28 בגור חולדה (איור 4), אפילפטיקוס המושרה DFP מצב (איור 5) והתקפים במודל גנטי-induced של מומים לב וכלי דם העמוקים (איור 6). אולי ההיבט הקריטי ביותר לקבלת הקלטות electrographic ללא חפץ, לטווח ארוך הוא כדי לוודא גישת אלקטרודה חסרת מעצורים לאזור בקליפת המוח של עניין (איור 4-6). זה כולל את האלקטרודה התייחסות / מכנה המשותפת. במיוחד קריטי הוא מצרף את המשדר לגולגולת ליישומי EEG אפידורל. במהלך תהליך זה, ניתן בטעות מעיל קצה אלקטרודות עם cyanoacrylate ניתנו האורך קצר מאוד של אלקטרודות. ציפוי אלקטרודות בcyanoacrylate יכול להחליש את אותות EEG או לחלוטין בודד אותם בתרחיש הגרוע ביותר. כמו כן, חוסר ב חיבור חשמלי טובetween התייחסות / מכנה משותף והמוח של החיה ימנע פעולה נכונה של מגבר ההפרש במשדר, וכתוצאה מכך חשמלי פלט אות &quot;רועש&quot;. לעתים קרובות, לאחר ניתוח, יכולים להיות בסכנת אותות באיכות טובה עד 48 שעות בשל בצקת סביב החורים בר בגולגולת. כבצקת שוככת, אותות, בדרך כלל, לשפר. זה יכול להימנע על ידי הצבת אלקטרודות על פני השטח של הגולגולת בלי חורים בר. ההשלכות של תהליך זה גדלו פוטנציאל למעייל אלקטרודות עם cyanoacrylate, צמצמו פעילות בתדירות גבוהה בשל המאפיינים נמוכים לעבור החשמליים של עצם הגולגולת, והפוטנציאל לבודד את רעש התייחסות / מכנה המשותף טיוח באותות חשמלי. מיקום נכון תרגול של אלקטרודות ניתן לעשות עם פיסה דקה של עץ או פורניר המחקה את העובי של גולגולת העכבר או חולדה. התוצאות שהוצגו בכתב היד הזה ממחישות את קואהlity של הקלטות שניתן להשיג באמצעות טכנולוגיה אלחוטית טלמטריה. השתלה כירורגית בשיטה המתוארת במסמך זה יכול לקחת קצת כמו 10 דקות, תלוי במורכבות של הניתוח. לגישה ניתוחית למבני מוח עמוקים, כגון אזור CA1 של ההיפוקמפוס, עדיף לצרף את המשדר לmicromanipulator רכוב על מסגרת stereotaxic. Micromanipulator יספק מנתח עם הדיוק להשתיל את המשדר לפי קואורדינטות stereotaxic פורסמו באטלס של עכבר והחולדה 29 30 המוחות. ניתן לעשות זאת פשוט על ידי tacking חתיכת צינור מזרק למשדר עם cyanoacrylate ולאחר מכן ההרכבה המזרק בmicromanipulator. שליטת micromanipulator של x, y, z וקואורדינטות תספק יציבות נוספת בעת התקנת משדר לגולגולת לפני תפירת העור סגור. התוספת של ברגי עצם סביב PErimeter של המשדר יכול לעזור לעגן את המשדר לגולגולת, למרות שהם לא הכרחיים. ברגי עצם יכולים להיות יעילים, לעומת זאת, בדגמים מסוימים של בעלי חיים של התקפי אפילפסיה ו, כגון חולדה הבוגרת שטופלה ליתיום-pilocarpine. בעלי חיים אלה נוטים להיות התקפים עוויתי ספונטניים עם פעילות מוטורית אינטנסיבית שעלולה לגרום נזק למשדר במהלך ההתקף. מורכבות נוספות ניתן להוסיף לניסויים אלה. לדוגמא, משדר תואם מודלים רבים ושונים של פגיעה מוחית טראומטית, כגון השפעת קליפת המוח מבוקר 31. העמידות של מכשיר משדר נבדקה על ידי השתלת חיות עם משדרים בP7, ולאחר מכן שיכונם במתקן בעלי החיים. לאחר 12 חודשים, רוב השתלים נותרו על כנן בגולגולת. כאשר בעלי החיים היו מורדמים, הגולגולות נראים נורמלי והמשדר היה מוטבע בעצמות הגולגולת, הדורש כוח משמעותי כדי לחלץ אותו. היזהר בעת מבני מוח עמוקים<html> הם למדו; כמוח גדל, ואלקטרודות להישאר נייחות, עמדתו הסופית של אלקטרודות שניתן הייתה לצפות לשינוי. לטכניקות המתוארות כאן, אלקטרודות הוצבו בדרך כלל מעל הדורה, שאיפשר גם את המוח והגולגולת לגדול ולאלקטרודות להישאר בעמדות המקוריות שלהם. הגורם המגביל בכמה זמן ניתן להשתמש במשדר הוא בגודל הסוללה (כלומר עד שהסוללה נגמר). עיצוב עצמאי מונוליטי (כלומר משדר מוטבע באפוקסי הקשה) של הדיור של המשדר משאיל את עצמו לשימוש עם גורים בוגרים שוכנו עם הסכר וההמלטה שלהם. לעתים קרובות, שיתוף דיור מושתל חיות עם תוצאות רצועות קווי בהרס של החומרה או קניבלים של הגורים מושתלים על ידי הסכר. הצורה החלקה דופן של המשדר מאפשרת להשתלה עם כמעט שום כשל חומרה או אובדן של גורים בשל קניבלים. ss = &quot;jove_content&quot;&gt; תכנית שידור מצמידים קיבולי צריכת החשמל הנמוך במערכת זו משאילה את עצמו היטב לשימוש בתרחישים ניסיוניים רבים ושונים כגון מיקום בחממה בטמפרטורה מבוקרת או אפילו לשימוש עם מנגנונים ניסיוניים, כגון תאי plethysmography. כמו כן, את הצורה של אנטנת המקלט ניתן להשפיע כדי שתתאים בסביבות שונות בהתנהגות, כגון מגוון T-maze.The הגבוה של המשדר הוא רק כמה אינץ &#39;כמשדר חייב להיות מסוגל (זוג capacitively &quot;כונן&quot; ל) אנטנת המקלט ומסתמך על בעלי החיים ששוכנים בכליאת מכרסמים סטנדרטית או כלוב מתאים המכוסה בשטח אנטנת מקלט. המשדר פועל כקוטב אחד של שדה חשמלי ואילו גופו של בעל החיים משמש כקוטב אחר. השדה הוא כזה שאורינטציות מסוימות, כגון 90 מעלות מחוץ לשלב עם אנטנת המקלט, ייכשלו לנהוג אנטנת המקלט וכתוצאה מכך &quot;לנשור&quot;. זוהי תופעה נדירה למדי. עבודה עתידית עם טכנולוגיה זו תאפשר הקלטה מבעלי חיים רבים באותו הכלוב שיפחית את עלויות עלייה למטוס ולאפשר לאינטראקציה חברתית. התפתחויות נוספות יהיו כרוכות בהגדלת מספר הערוצים, כולל טמפרטורה, וelectromyogram. העיצוב הנוכחי של המכשיר מספק רוחב פס, כי הוא מותאם לקידוד מחדש של להקות EEG קלאסיות, שאינה מתאים להקלטה של ​​אדוות מהירות או תנודות בתדירות גבוהה. בעתיד, המכשיר יכול להיות שונה כדי להקליט את רכיבי תדר הגבוה של האות, אבל במחיר של חיי סוללה. סוגים שונים של מתמרים יכללו את לחץ דם ואת לחץ-נפח, ואפילו בנייה של הסדר אלקטרודה משדר לממדים למשתמש מסוים לפי קואורדינטות stereotactic של מבני המוח הרצויים.

המבוגר ביותר - ועדיין בשימוש נרחב ביותר - הטכניקה להקלטת biopotentials במוח הוא אלקטרואנצפלוגרם (EEG). הוא משמש קליני להפרעות נוירולוגיות, כולל זיהוי התקף 1, לוקליזציה של תפיסת מוקדים 2, ואבחנה של זעזוע המוח 3,4. טכניקה זו גם בשימוש נרחב כדי לספק מידע בסיסי על המנגנונים של שינה ולאבחן הפרעות שנת 5,6. כמו באבחון הקליני של אפילפסיה, EEG הפך חיוני למחקר translational במודלים של בעלי חיים של שניהם אפילפסיה הגנטית ונרכשת. ביישומי מחקר הנוכחיים, &quot;קווית&quot; או הקלטות &quot;קשורות&quot; הן סטנדרטיים, ומבוצעות באופן שיגרתי במכרסמים מבוגרים במשך שבועות בכל פעם 7. עם זאת, רעש חשמלי, חפצי תנועה, ואת הסיכון שקשור בעלי חיים יפגעו בעצמם על ידי משיכת הכבל יש לי compr הארוךomised ניסויים אלה. לכן, כדי לשפר את תנאי ניסוי ושיעורי הצלחה, אנחנו צריכים לפתח טכנולוגיות חדשות שתאפשר לחיסול ממשק קווי בין בעלי החיים והמכשור. האזור הבולט ביותר של פיתוח הוא תכנון ויישום של מערכות טלמטריה המאפשרת להקלטות באיכות גבוהה, תוך שמירה על חיים ארוכים שימושיים ומזעור אי נוחות לנושאי בעלי חיים. הקטנת הגודל הפיזי של התקנים אלה תאפשר מחקר translational במודלים של מכרסמים בילוד ונוער של הפרעות נוירולוגיות. הקלטות EEG נמוכות ערוץ-ספירה בחולדות מועסקות בהרחבה לפתח טיפולים חדשים לדיכוי התקפים אפילפטיים מסוגלים תרגום לבני אדם. הקלטות מאתר אחד או יותר לתקופה ממושכת לפתוח אפשרויות רבות לשימוש במודלים של מכרסמים של אפילפסיה במחקר translational. חלק גדול מהמחקר העכשווי בתחום זה נועד לחסום את המופע של seiz הכרוניures או הפיתוח של אפילפסיה (epileptogenesis כלומר,), ומאמצי מחקר כזה דורשים נרחבים אם ניטור EEG לא רציף לassay את האפקטיביות של הטיפול המוצע 8; מערכת קטנה, פשוטה, telemetric עם אחד, שתיים, או ארבעה ערוצים הפועלים בין .1-100 הרץ לכל ערוץ תהיה בתוקף לקדם סוג זה של מחקר translational. התקפי Electrographic מתרחשים לעתים קרובות עם התנהגויות מינימליות (ובוודאי ללא פרכוסים), אשר מגבילה את השימושיות של מבחני מבוססים על התקפי התנהגות. האסטרטגיה של שילוב הקלטת EEG וניטור וידאו בו זמנית מאפשרת את האפשרות של לכידת כל תפיסה; ויתר על כן, גישות אנליטיות אלה עשויות לאפשר הערכה כמותית של הקוצים interictal המתרחשים במוח אפילפסיה בין &quot;ictal&quot; (או תפיסה) אירועים 9. יתר על כן, היכולת להשיג הקלטות EEG נמוך חפץ באיכות גבוהה רציף, שלטכנולוגיה האלחוטית היא בדרך כללמעולה, יאפשר לפיתוח של שימוש באלגוריתמים מבוסס מחשב ללימוד צורות גל ספציפי EEG (למשל, תטא, גמא), כמו גם זיהוי אוטומטי של התקפים, הפחתת עומס העבודה של הניסוי באופן משמעותי. המודל פרה-הקליני הראשוני ללימוד אפילפסיה כרונית לאחר פגיעה מוחית הוא העכברוש המבוגר או עכבר, או באמצעות כימותרפיה-convulsant (כלומר, חומצה או pilocarpine kainic) או סטטוס אפילפטיקוס המושרה חשמלי (SE), שאחריו אפילפסיה כרונית. בתנאים אלה, פרכוסים החמורים הקשורים SE או ההתקפים הבאים בבעלי החיים אפילפסיה יכולים להוביל לפגיעה מבעלי החיים או הקריעה מושך ברצועה ושחרור הברגים שלשמור את הקובץ המצורף של headcap. סופו של דבר, זה בעיה, כי בדרך כלל זה מסתיים ניסויים אלה, ובכל זאת הצורך בקבלה רשומות EEG ברזולוציה גבוהה לטווח ארוך לניסויים במטרה לפתח טיפולים חדשים לכרוניאפילפסיה היא בעל חשיבות עליונה. בנוסף, דיור, ניטור, וניתוח הנתונים מבעלי החיים מושתלים לטווח ארוך היא השקעה ניכרת בשתי עלויות הישירות וזמן חוקר; לכן, סיום מוקדם של הניסוי יכול לגרום לעלויות משמעותיות לחוקרים. כמודלים של התקדמות אפילפסיה אלה, ההתקפים בדרך כלל הפכו תכופים יותר וחמורים יותר 10-12, ויגדילו את הסבירות שבעלי החיים נפגעו, בדיוק כפי שהתועלת שלהם לפיתוח טיפולים חדשים הופך הגדול ביותר. בעלי חיים אלה יכולים באופן שיגרתי לפתח עשרות התקפים עוויתי ליום, לעתים קרובות מתרחשים באשכולות 13. כנראה אחת ההתפתחויות החשובות ביותר במדעים ביו-רפואיים היה השימוש בגן ​​מיקוד במודלים של עכברים. גישה זו אפשרה, ותמשיך לאפשר, פיתוח מודלים של בעלי החיים של אפילפסיה גנטית שלשכפל תסמונות אדם בפועל 14-16. יכולות להתבצע מניפולציות גנטיות כטיפולי הוכחה של העיקרון לדכא התקפים אפילפטיים או אפילו לחסום את ההתפתחות של אפילפסיה לאחר פגיעה מוחית 17-20. סוג זה של מחקר ירוויח באופן דרמטי מהיכולת לבצע הקלטה רציפה תפוקה גבוהה של EEG. נכון להיום, ניתן להקליט מעכברים עם שתי מערכות קשורות או טלמטריה; עם זאת, האתגרים של קבלת באיכות גבוהה, הקלטות ללא חפץ הם באופן משמעותי יותר קשות מאשר חולדות, ולעתים קרובות זה דורש צורות שונות של תרמילים שעכברים ברציפות ינסו להסיר. מתח יכול להגדיל את חומרת התקפים, תדירות ו / או משך זמן, ובכך סופו של דבר לשנות את אפילפסיה של חיות ניסוי, כך בלבול המחקר. , מערכת קטנה, קל משקל פרופיל נמוך טלמטריה הזעירה תאפשר ההקלטה של ​​הטווח ארוך EEG ממודלי עכבר גנטיים של מחלות בבני אדם. בנוסף לבעיות שתוארו לעיל, הקלטת EEG במודל מכרסם בוגרים של מחלה יש סט הייחודי משלו אתגרים. בעלי חיים בוגרים יכולים לשקול קטן כמו 6 גרם (P8 עכבר) 17 גרם (עכברים P6). זה כמעט בלתי אפשרי לבצע הקלטות סידוריים רב היום קשורות EEG עקב מתח מוגבר מרצועה וחוסר היכולת לאפשר גידול טבעי של הגור על ידי הסכר. עד בעלי חיים נגמלים, הם חייבים להישאר בטיפול של הסכר. הסכר הוא נוטה להרוס כל הרכבה מחבר מוחץ על הגור, לסיים את הגור, ובמקרים מסוימים לסיים את כל ההמלטה. יתר על כן, הגולגולת המכרסם בוגרת מקשה על הר כל הדום אלקטרודה לגולגולת עם יושרה מכאנית. אתגרים אלה, ייחודיים למכרסמים לא בוגרים, דורשים פתרון חדשני לביצוע הקלטות electrographic טווח ארוך חזק,. כאן אנו מתמקדים בהוכחת ההשתלה וההקלטה של ​​EEG באמצעות משדר אלחוטי זעיר רומן וניסויים הנוכחיים הוכחה של עיקרון שלוש דוגמאות לשימוש במערכת הזעירה האלחוטית טלמטריה: 1) imמודל גור חולדה בוגר של היפוקסיה-איסכמיה, 2) עכברים בוגרים שטופלו בDFP לגרום לסטטוס אפילפטיקוס והתקפים ספונטניים שלאחר מכן, ו- 3) מודל גנטי של מומים מחלה כלי דם אשר לגרום להתקפים ומוות בעכברים בוגרים. מערכת טלמטריה האלחוטית הזעירה תוכננה כדי לענות על ארבע דרישות עיקריות: (1) השתלה כירורגית פולשנית; תאימות לדיור של גורי מכרסמים עם הסכר והמלטה (2); (3) צריכת חשמל נמוכה של היחידה, ובכך מאפשרת לחודשים של ניטור רציף ללא מחדש השתלה כירורגית; ו- (4) יכולת להקליט גל EEG באיכות גבוהה עם חפצי תנועה מינימאליים. משדר האלחוטי שוקל &lt;0.6, 2.3, ו -4 G ו&lt; 0.3, 0.8, ו -1.4 סנטימטר 3 תלוי בסוללה עם טביעת רגל של 5 x 7, 7 x 9, או 7 מ&quot;מ x 12 שבקלות עולה לגולגולת של בעלי החיים עם ג&#39;ל cyanoacrylate. אין צורך בעוגני בורג עצם להדביק היטב את המכשיר להגולגולת, צמצום מספר החורים שצריכות נקדחו בגולגולת וזמן הניתוח. המכשיר מסוגל הגברת שני ערוצים של EEG או פוטנציאלי שדה מקומיים ממבני מוח עמוקים, כמו בהיפוקמפוס, במשך 2 שבועות, 2 חודשים, או 6 חודשים בתצורה זו. הגודל הקטן של משדר האלחוטי מפחית סיכון לזיהום, מגביר את הניידות של בעלי חיים, וסופו של דבר מפחית את התחלואה ותמותה שאחרת מגדילה את הזמן, כסף, ומספר בעלי החיים הדרושים לניסוי. כל האלקטרוניקה והסוללה בעציצים באפוקסי הכיתה רפואית שהופך את המכשיר עמיד למים וקשים, המונע את הסכר מהלעיסה במכשיר אחר שעלולות להפוך את המכשיר לבלתי שמיש. בניגוד למשדרי רדיו תדר מערכת טלמטריה משתמשת צימוד קיבולי בין המשדר ומקלט אנטנה שיושבת מתחת לכלוב בעלי החיים, המאפשרים למשתמש לשמור על בעלי חיים בדיור מכרסמים סטנדרטיים. ערוצים מרובים של recording לאפשר ההקלטה של ​​biopotentials רב מודלי, כגון רל ואלקטרו. מודלים של בעלי החיים של עמיתים נלווים ייהנו מהיכולת להקליט biopotentials בהתנהגות 21-23. שילוב עם ניטור התנהגות EEG יספק לחוקרים עם כלי טוב יותר למחקר ומחקרים פרה-קליניים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Gloves</td>
			<td>Protective Industrial Products</td>
			<td>100-3201 PF</td>
			<td>Power Free Sterile Latex Surgical Glove</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle</td>
			<td>FST</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blade #15</td>
			<td>FST</td>
			<td>10015-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Burr tool</td>
			<td>Ram Products, Inc.</td>
			<td>Microtorque II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine burr</td>
			<td>FST</td>
			<td>19007-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aneurism clip</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS-5422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11022-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped applicators</td>
			<td>McKesson</td>
			<td>24-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle Driver</td>
			<td>WPI</td>
			<td align="right">521725</td>
			<td>Olsen-Hegar Needle Holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate gel</td>
			<td>Henkel</td>
			<td>Loctite 4541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate accelerant</td>
			<td>Henkel</td>
			<td>Loctite 7452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td colspan="2">Vicryl RB-1 J304</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elecrocautery disposable</td>
			<td>Bovie</td>
			<td>AA01</td>
			<td>Fine Tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Tray</td>
			<td>FST</td>
			<td>20311-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epitel Receiver Base</td>
			<td>Epitel Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epitel wireless transmitter</td>
			<td>Epitel Inc</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopac digitizer</td>
			<td>Biopac</td>
			<td>MP-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-compatible computer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

long-term continuous eeg monitoring in small rodent models of human disease using the epoch wireless transmitter system

מחלות רבות מתקדמות נוירולוגית בבני אדם, כמו אפילפסיה, דורשות מודלים של בעלי חיים פרה-קליניים המתפתחים לאט המחלה על מנת לבדוק התערבויות בשלבים שונים של תהליך המחלה. מודלים של בעלי החיים אלה הם קשים במיוחד ליישום במכרסמים לא בוגרים, אורגניזם מודל קלאסי למחקר במעבדה של הפרעות אלה. EEG מתמשך הקלטה במודלים של בעלי חיים צעירים של התקפים והפרעות נוירולוגיות אחרות מהווה אתגר טכני בשל הגודל הקטן הפיזי של מכרסמים צעירים ותלותם בסכר לפני הגמילה. לכן, יש צורך ברור לא רק לשיפור מחקר פרה-קליני שיהיה טוב יותר לזהות את אותם הטיפולים מתאימים לתרגום למרפאת, אלא גם צורך במכשירים חדשים מסוגלים להקליט EEG המתמשך במכרסמים לא בוגרים. כאן אנו מתארים את הטכנולוגיה מאחורי ולהדגים את השימוש של מערכת טלמטריה זעירה רומן, במיוחד מהונדס לשימוש בחולדות בוגרות oעכברי r, שהוא גם יעיל לשימוש בבעלי חיים מבוגרים.

אנחנו פיתחנו ויישמנו את הרעיון של הקלטת EEG ממכרסמי מבוגר יחיד, schematized באיור 1 לתהליך אישור IACUC, העיצוב חייב לשלב גם לתוך קיימים מתקני בעלי חיים מוסדיים.; לכן, המערכת נועדה להיות מותקן בקלות במתקן סטנדרטי בבעלי חיים ללא שימוש בשטח נוסף: בעלי החיים שוכן בכלוב רגיל &quot;מתקן-נושא בעלי חיים&quot; דיור שממוקם בתוך מקלט עם כלוב פאראדיי משולב להפחתה רעש חשמלי. האות מכל בסיס מקלט שנערכה על ידי חוטים לdigitizer שמחובר למחשב (איור 1). יש צורך במחשב בודד כדי לאסוף נתונים מהמרחק של עד 32 בעלי החיים שנרשמו במקביל, בהתאם ליכולת של מערכת רכישת נתונים של המשתמש. סוג זה של התקנה צורך מעט חשמל ומייצר חום קטן, תכונה תואמת עם מתקני בעלי חיים אקלים מבוקר. הנתונים יכולים להיותלטווח ארוך מוצג בזמן אמת על המסך, המאפשר ניטור ניסוי, ומאוחסן בכוננים קשיחים חיצוניים (יחידת אחסון 10 TB). על מנת למזער את הנזק על ידי המלטה וקניבלי גור על ידי הסכר, שבדקנו גורמי צורת משדר שונים. העיצוב הסופי היה גליל כיפה; צורה קשה לחולדות לנשוך ונזק. משדר בודד על הגולגולת של חולדה בוגרת מוצג באיור 2 א וגרסה מוקדמת של צפיפות גבוהה (32 בעלי חיים) בסיסי מקלט ואסדות הקלטה שבי דיור מכרסמים סטנדרטי ממוקם מוצגת באיור 2. יעילות צריכת חשמל הייתה שיקול חשוב מאוד; בחרנו צימוד קיבולי כפרוטוקול העברת נתונים. העיצוב הבא מאפשר הקלטת EEG המתמשך במשך 6 חודשים בהתאם לקיבולת סוללה (איור 2 א). עכברים צעירים כמו יום לידה 12 (P12, איור 3 א) וחולדות צעירות כמו P6 (Figurדואר 3B) לסבול משדר די טוב. הקפדת משדר לגולגולת עם cyanoacrylate מאפשרת חיות לגדול עם משדר לבגרות (איור 3 ג), תוך שמירה על רכישה רציפה של נתוני ה- EEG. גורם צורה הממוזערת הייחודית של ממשק משדר אלחוטי ומשאיל את עצמו לעבודה עם מודלים של בעלי חיים בתנאים הניאו וסביב לידה. הנתונים באיור 4 מראה דו-ערוצי הקלטת EEG של תת-פעילות של התקפים חריפים שלהלן (HI) (קשירת עורק הראשי ואחריו 2 שעות של היפוקסיה עם O 8% 2 תערובת) אוטם חוסר חמצן-איסכמי בP7 Sprague-Dawley גור חולדה 13. טיפול HI גורם נגע גדול בחצי הכדור ipsilateral לתרדמת ligated. כאן, ההקלטות להראות אשכול של שני התקפים כלליים על שני ההמיספרות של המוח נפגע. העקבות השחורות מתארת ​​את פעילות ה- EEG בחצי הכדור הנגדי לנגע,עקבות כחולות מציגה EEG באונות ipsilateral (כלומר באזור של הנגע). בעוד פעילות ההתקפים נמצאת בשני ההמיספרות של המוח, בחצי כדור ispilateral תערוכות דיכוי רקע EEG, אשר מעיד על נזק מוחי מתמשך 21. סטטוס אפילפטיקוס יכול להיגרם בחולדות מבוגרות על ידי הזרקת החיות עם organophosphate, DFP 22,23. הנתונים בפריקות EEG איור 5 תכנית חוזר על עצמו, שמעידים על סטטוס אפילפטיקוס (ראו הרחבות זמניות איור 5 א &#39;, ב&#39;). להלן מדגם העקבות, כמובן הזמן של הסטטוס אפילפטיקוס מעל 12 שעות כבר ניתח עם מודל מעורב תופעות שאינם ליניארי שמכמת את עוצמת ההתקפים לאורך זמן. החומרה של הסטטוס אפילפטיקוס מוגדרת על ידי כוח EEG בלהקת גמא (20-60 הרץ). כאן, הכח שתואר לעיל היה בממוצע על פני 12 בעלי חיים וזמם על 12 שעות עם מרווחי ביטחון של 95%. ה<html> נתוני דואר תערוכות עלייה ניכר בכוח גמא בתוך השעה הראשונה של טיפול DFP, שנמשך מעל 12 שעות שבמהלכו בעלי החיים היו במעקב באופן רציף. השיטה של ​​הניתוח הבא מאפשרת למדוד כמותית של חומרת הסטטוס אפילפטיקוס החריף, תופעה ניתחה בעבר בעיקר באמצעים התנהגותיים. אנו כוללים טכניקת ניתוח זה כדוגמא, כי הוא מנצל את כוח חישוב בלהקות EEG קלאסיים וכבר נעשה שימוש נרחב במחקרים פרה-קליניים לבדיקת היעילות של תרופות נוגדות פרכוסים במעבדה שלנו 24-26. אולי ההיבט החשוב ביותר של ביצוע הקלטות רציפות, ללא הפרעה אלחוטיות עם טלמטריה האלחוטית הוא היכולת להקליט אירועים ספונטניים חריגים המתרחשים בשכיחות נמוכה. נתונים אלו סוגים להדגים את התועלת הרחבה של מערכת משדר האלחוטית. 554fig1.jpg &quot;/&gt; איור 1:. סכמטי של מערכת הקלטת אפוק מערכת ההקלטה האלחוטית מורכבת משני רכיבים: משדר רכוב גולגולת אלחוטית שמגביר את biosignal, ו -2) צלחת מקלט ממוקמת מתחת דיור מכרסמים סטנדרטי 1). הפלט של בסיס המקלט הוא אות אנלוגי המורכב מbiosignal demodulated המוגבר עד למקסימום של 4 V שיא-לשיא. אות זה אז יכולה להיות מוזנת למערכת רכישת נתונים להקלטה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52554/52554fig2.jpg" /> איור 2:. משדר ומקלט משדר זה ​​בפרט אלחוטי () שוקל 4 גרם ומחליף &lt;1.4 סנטימטר 3 של נפח ועם טביעת רגל של 7 x 12 מ&quot;מ מותקן בקלות לגולגולת של חולדות ועכברים. המשדר יכול להגביר 2 ערוצים של biopotentials עד 6 חודשים לאחר שהסוללה הוא ניקוזאד. סוללות גדולות יותר יכולות לשמש לזמן הקלטה ארוך יותר. בעלי חיים ממוקמים בכליאת מכרסמים סטנדרטית על גבי מקלט אפוק (B). מופיע בצד ימין הוא דוגמא מוקדמת של שתי אסדות הקלטה נפרדות לכל מסוגלים להקליט מ -16 בעלי חיים בו זמנית מדגים את טביעת הרגל קטנה יחסית (2 &quot;x 4&quot;, 60 סנטימטרים x 120 סנטימטרים בערך) של כל אחד מאסדות ההקלטה. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52554/52554fig3.jpg" /> איור 3:. השתלת משדר האלחוטי בחולדות ועכברים המשדר מאפשר הקלטות EEG מתמשכות לתקופה של עד 6 חודשים בעכברים צעירים כמו יום לידה 12 (P12, למעלה). התמונה האמצעית היא של גור החולדה P7 מושתל עם משדר הזעיר. משדר נשאר מחובר היטב לגולגולת כחיה מתבגרת. בעלי החיים בתחתית הוא P280 והושתל במשדר דמה בP7 גיל. המערכת מאפשרת simultaהקלטות EEG neous ורציפות מבעלי חיים רבים בגילי P7 באמצעות גמילה, צמצום מספר ההמלטות הדרושות לטווח ארוך פרה-קליני,, מחקרי ניטור EEG. <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/52554/52554fig4.jpg" /> איור 4: Dual-ערוץ הקלטת התקפים נגרמים היפוקסיה-איסכמיה עם מערכת טלמטריה הקלטות ערוץ הכפול של EEG החריג עם טלמטריה האלחוטית בגור חולדה P7 לאחר קשירת הצוואר (איסכמיה) במהלך 8% טיפול O 2 (היפוקסיה).. (א) ו- (ב), הרחיבו את הנופים של הגל. פעילות התקפים נמצאת בשני ההמיספרות (השחור, כחול) עם דיכוי EEG משמעותי נוכח בחצי הכדור עם אוטם איסכמי (כחולה). <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/52554/52554fig5.jpg" /> איור 5: הקלטת epilepti מעמדcus בחולדות מבוגרות. הקלטות EEG השטח (כלומר, dural) עם מערכת טלמטריה האלחוטית הזעירה בתגובה לdiisopropylfluorophosphate טיפול (DFP) בחולדה בוגרת. תקופות מוצלות בזכר העליון (A ו- B) מתרחבות נופים של צורות הגל בעקבות להלן. הנתונים שנרשמו עם משדר האלחוטי אז יכולים להיות מנותחים בתחום התדר המאפשר השוואות סטטיסטיות במדגם של בעלי חיים. (ג) נתונים הם מרווחי ביטחון הממוצע ו -95% מכוח להקת גמא (20-60 הרץ) הבאים אפילפטיקוס המושרה DFP מעמד (N = 12) מעל 12 שעות לאחר מתן של DFP. <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/52554/52554fig6.jpg" /> ה הקלטה של התקפים ושינויים בEEG במודל של עכברים מהונדסים של מומים מחלה כלי דם כאן, אנו להקליט מעכבר מהונדס (): איור 6.בעובר פעילות התקפים. בהתחלה, דפוס EEG הרגיל הוא הווה (1); מייד לפני ההתקף יש תקופה של דיכאון טרום ictal (2), שאחריו מקבץ של חמישה התקפים (3). בעקבות ההתקפים, פריקות ictal נורמליות נמצאות באות (4). יש חיה בקרה לא התקפים ולא תכונות חריגות EEG (B).

Watch this Scientific Journal Video about Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System at JoVE.com

Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System

Here we demonstrate the use of a wireless enabling technology for electroencephalogram (EEG) in neonatal rodent models of human disease. With telemetry, there are no encumbering connections, thus allowing natural behaviors.

ניטור EEG הרציף ארוך טווח במודלים של מכרסמים קטנים של מחלות אנושיות באמצעות מערכת אפוק משדר אלחוטי

Many progressive neurologic diseases in humans, such as epilepsy, require pre-clinical animal models that slowly develop the disease in order to test ...

long-term-continuous-eeg-monitoring-small-rodent-models-human-disease

Research

JoVE Journal

Neuroscience

25.4K Views.  Yale University School of Medicine. Here we demonstrate the use of a wireless enabling technology for electroencephalogram (EEG) in neonatal rodent models of human disease. With telemetry, there are no encumbering connections, thus allowing natural behaviors.

Video: Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution in assessing therapeutic efficacy. Between the two major classifications of administration, local vs. systemic, systemic delivery approaches are often preferred due to ease of administration. However, systemic delivery may result in suboptimal drug concentration being achieved in the CNS, and lead to erroneous conclusions regarding agent efficacy. Local drug delivery methods are more invasive, but may be necessary to achieve therapeutic CNS drug levels. Here, we demonstrate proper technique for three routes of systemic drug delivery: intravenous injection, intraperitoneal injection, and oral gavage. In addition, we show a method for local delivery to the brain: convection-enhanced delivery (CED). The use of fluorescently-labeled compounds is included for in vivo imaging and verification of proper drug administration. The methods are presented using murine models, but can easily be adapted for use in rats.

Thorough preclinical testing of drugs that act in the central nervous system often involves assessing and comparing drug biodistribution in association with specific routes of administration. Here, three commonly used methods of systemic delivery (intravenous, intraperitoneal, and oral) as well as a method for local delivery (convection-enhanced delivery) are demonstrated in mice.

תרופות משלוח מערכתית מקומי לטיפול במחלות של מערכת העצבים המרכזית מודלים מכרסמים

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system (CNS) structure and circuitry in today's healthcare industry. Cell-based therapies hold great promise to restore the lost nerve tissue and function for CNS disorders. However, cell therapies based on CNS-derived neural stem cells have encountered supply restriction and difficulty to use in the clinical setting due to their limited expansion ability in culture and failing plasticity after extensive passaging1-3. Despite some beneficial outcomes, the CNS-derived human neural stem cells (hNSCs) appear to exert their therapeutic effects primarily by their non-neuronal progenies through producing trophic and neuroprotective molecules to rescue the endogenous cells1-3. Alternatively, pluripotent human embryonic stem cells (hESCs) proffer cures for a wide range of neurological disorders by supplying the diversity of human neuronal cell types in the developing CNS for regeneration1,4-7. However, how to channel the wide differentiation potential of pluripotent hESCs efficiently and predictably to a desired phenotype has been a major challenge for both developmental study and clinical translation. Conventional approaches rely on multi-lineage inclination of pluripotent cells through spontaneous germ layer differentiation, resulting in inefficient and uncontrollable lineage-commitment that is often followed by phenotypic heterogeneity and instability, hence, a high risk of tumorigenicity7-10. In addition, undefined foreign/animal biological supplements and/or feeders that have typically been used for the isolation, expansion, and differentiation of hESCs may make direct use of such cell-specialized grafts in patients problematic11-13. To overcome these obstacles, we have resolved the elements of a defined culture system necessary and sufficient for sustaining the epiblast pluripotence of hESCs, serving as a platform for de novo derivation of clinically-suitable hESCs and effectively directing such hESCs uniformly towards clinically-relevant lineages by small molecules14 (please see a schematic in Fig. 1). Retinoic acid (RA) does not induce neuronal differentiation of undifferentiated hESCs maintained on feeders1, 14. And unlike mouse ESCs, treating hESC-differentiated embryoid bodies (EBs) only slightly increases the low yield of neurons1, 14, 15. However, after screening a variety of small molecules and growth factors, we found that such defined conditions rendered retinoic acid (RA) sufficient to induce the specification of neuroectoderm direct from pluripotent hESCs that further progressed to neuroblasts that generated human neuronal progenitors and neurons in the developing CNS with high efficiency (Fig. 2). We defined conditions for induction of neuroblasts direct from pluripotent hESCs without an intervening multi-lineage embryoid body stage, enabling well-controlled efficient derivation of a large supply of human neuronal cells across the spectrum of developmental stages for cell-based therapeutics.

We have established a protocol for induction of neuroblasts direct from pluripotent human embryonic stem cells maintained under defined conditions with small molecules, which enables derivation of a large supply of human neuronal progenitors and neuronal cell types in the developing CNS for neural repair.

גזירת יעיל של אבות עצב נוירונים האדם מן האדם תאים pluripotent גזע עובריים עם אינדוקציה מולקולה קטנה

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps shape attention and also protects cells from over-stimulation. Adaptation within the olfactory circuit of C. elegans was first described by Colbert and Bargmann1,2. Here, the authors defined parameters of the olfactory adaptation paradigm, which they used to design a genetic screen to isolate mutants defective in their ability to adapt to volatile odors sensed by the Amphid Wing cells type C (AWC) sensory neurons. When wildtype C. elegans animals are exposed to an attractive AWC-sensed odor3 for 30 min they will adapt their responsiveness to the odor and will then ignore the adapting odor in a chemotaxis behavioral assay for ~1 hr. When wildtype C. elegans animals are exposed to an attractive AWC-sensed odor for ~1 hr they will then ignore the adapting odor in a chemotaxis behavioral assay for ~3 hr. These two phases of olfactory adaptation in C. elegans were described as short-term olfactory adaptation (induced after 30 min odor exposure), and long-term olfactory adaptation (induced after 60 min odor exposure). Later work from L'Etoile et al.,4 uncovered a Protein Kinase G (PKG) called EGL-4 that is required for both the short-term and long-term olfactory adaptation in AWC neurons. The EGL-4 protein contains a nuclear localization sequence that is necessary for long-term olfactory adaptation responses but dispensable for short-term olfactory adaptation responses in the AWC4. By tagging EGL-4 with a green fluorescent protein, it was possible to visualize the localization of EGL-4 in the AWC during prolonged odor exposure. Using this fully functional GFP-tagged EGL-4 (GFP::EGL-4) molecule we have been able to develop a molecular readout of long-term olfactory adaptation in the AWC5. Using this molecular readout of olfactory adaptation we have been able to perform both forward and reverse genetic screens to identify mutant animals that exhibit defective subcellular localization patterns of GFP::EGL-4 in the AWC6,7. Here we describe: 1) the construction of GFP::EGL-4 expressing animals; 2) the protocol for cultivation of animals for long-term odor-induced nuclear translocation assays; and 3) the scoring of the long-term odor-induced nuclear translocation event and recovery (re-sensitization) from the nuclear GFP::EGL-4 state.

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

Here we describe a molecular readout of long-term olfactory adaptation in Caenorhabditis elegans. The Protein Kinase G, EGL-4, is necessary for stable adaptation responses in the primary sensory neuron pair called AWC. During prolonged odor exposure EGL-4 translocates from the cytosol to nucleus of the AWC.

Readout מולקולרי של הסתגלות חוש ריח לטווח הארוך ב<em&gt; ג elegans</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses specifically on antisense oligonucleotides (ASOs), though the techniques shown in the video here can also be used to deliver a plethora of other drugs to the CNS. Antisense oligonucleotides (ASOs) have the capability to knockdown sequence-specific targets 1 as well as shift isoform ratios of specific genes 2. To achieve widespread gene knockdown or splicing in the CNS of mice, the ASOs can be delivered into the brain using two separate routes of administration, both of which we demonstrate in the video.
The first uses Alzet osmotic pumps, connected to a catheter that is surgically implanted into the lateral ventricle. This allows the ASOs to be continuously infused into the CNS for a designated period of time. The second involves a single bolus injection of a high concentration of ASO into the right lateral ventricle. Both methods use the mouse cerebral ventricular system to deliver the ASO to the entire brain and spinal cord, though depending on the needs of the study, one method may be preferred over the other.

We describe a method to target drugs to the central nervous system by either implanting a catheter or performing a bolus injection into the right lateral ventricle in mice. We focus specifically on the delivery of antisense oligonucleotides. This technique is readily adaptable to other drugs and to rats.

משלוח תוך חדרי ישיר של תרופות למערכת העצבים המרכזית מכרסם

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution has been a long sought tool for neuroscientists in the systems-level search for the neural circuitry governing complex behavioral states. Optogenetics is a cutting-edge tool that is revolutionizing the field of neuroscience and represents one of the first systematic approaches to enable causal testing regarding the relation between neural signaling events and behavior. By combining optical and genetic approaches, neural signaling can be bi-directionally controlled through expression of light-sensitive ion channels (opsins) in mammalian cells. The current protocol describes delivery of specific wavelengths of light to opsin-expressing cells in deep brain structures of awake, freely-moving rodents for neural circuit modulation. Theoretical principles of light transmission as an experimental consideration are discussed in the context of performing in vivo optogenetic stimulation. The protocol details the design and construction of both simple and complex laser configurations and describes tethering strategies to permit simultaneous stimulation of multiple animals for high-throughput behavioral testing.

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Optogenetics has become a powerful tool for use in behavioral neuroscience experiments. This protocol offers a step-by-step guide to the design and set-up of laser systems, and provides a full protocol for carrying out multiple and simultaneous in vivo optogenetic stimulations compatible with most rodent behavioral testing paradigms.

בoptogenetic גירוי vivo של מערכת העצבים המרכזית מכרסם

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes involved in physiological functions and vulnerability and death of these neurons is imparative to understanding the underlying causes and unraveling the cure for this common neurodegenerative disorder. Primary cultures of mesDA neurons provide a tool for investigation of the molecular, biochemical and electrophysiological properties, in order to understand the development, long-term survival and degeneration of these neurons during the course of disease. Here we present a detailed method for the isolation, culturing and maintenance of midbrain dopaminergic neurons from E12.5 mouse (or E14.5 rat) embryos. Optimized cell culture conditions in this protocol result in presence of axonal and dendritic projections, synaptic connections and other neuronal morphological properties, which make the cultures suitable for study of the physiological, cell biological and molecular characteristics of this neuronal population.

The causes of degeneration of midbrain dopaminergic neurons during Parkinson&#8217;s disease are not fully understood. Cellular culture systems provide an essential tool for study of the neurophysiological properties of these neurons. Here we present an optimized protocol, which can be utilized for in vitro modeling of neurodegeneration.

בידוד, תרבות והטווח ארוך תחזוקה של יסודיים mesencephalic דופאמין נוירונים ממוח עוברי מכרסם

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

A Simplified Method for Ultra-Low Density, Long-Term Primary Hippocampal Neuron Culture

Culturing primary hippocampal neurons in vitro facilitates mechanistic interrogation of many aspects of neuronal development. Dissociated embryonic hippocampal neurons can often grow successfully on glass coverslips at high density under serum-free conditions, but low density cultures typically require a supply of trophic factors by co-culturing them with a glia feeder layer, preparation of which can be time-consuming and laborious. In addition, the presence of glia may confound interpretation of results and preclude studies on neuron-specific mechanisms. Here, a simplified method is presented for ultra-low density (~2,000 neurons/cm2), long-term (&#62;3 months) primary hippocampal neuron culture that is under serum free conditions and without glia cell support. Low density neurons are grown on poly-D-lysine coated coverslips, and flipped on high density neurons grown in a 24-well plate. Instead of using paraffin dots to create a space between the two neuronal layers, the experimenters can simply etch the plastic bottom of the well, on which the high density neurons reside, to create a microspace conducive to low density neuron growth. The co-culture can be easily maintained for &#62;3 months without significant loss of low density neurons, thus facilitating the morphological and physiological study of these neurons. To illustrate this successful culture condition, data are provided to show profuse synapse formation in low density cells after prolonged culture. This co-culture system also facilitates the survival of sparse individual neurons grown in islands of poly-D-lysine substrates and thus the formation of autaptic connections.

Low density cultures of primary hippocampal neurons usually require glia feeder layer to supply neurotrophic factors and sustain longevity. We describe here a simplified method to culture ultra-low density neurons on glass coverslips in the presence of a high density neuronal feeder layer, which facilitates investigation of specific neuronal-autonomous mechanisms.

שיטה פשוטה עבור צפיפות Ultra-Low, לטווח ארוך ראשית בהיפוקמפוס Neuron תרבות

Culturing primary hippocampal neurons in vitro facilitates mechanistic interrogation of many aspects of neuronal development. Dissociated embryonic ...

Analyzing Neural Activity and Connectivity Using Intracranial EEG Data with SPM Software

Measuring neural activity and connectivity associated with cognitive functions at high spatial and temporal resolutions is an important goal in cognitive neuroscience. Intracranial electroencephalography (EEG) can directly record electrical neural activity and has the unique potential to accomplish this goal. Traditionally, averaging analysis has been applied to analyze intracranial EEG data; however, several new techniques are available for depicting neural activity and intra- and inter-regional connectivity. Here, we introduce two analytical protocols we recently applied to analyze intracranial EEG data using the Statistical Parametric Mapping (SPM) software: time-frequency SPM analysis for neural activity and dynamic causal modeling of induced responses for intra- and inter-regional connectivity. We report our analysis of intracranial EEG data during the observation of faces as representative results. The results revealed that the inferior occipital gyrus (IOG) showed gamma-band activity at very early stages (110 ms) in response to faces, and both the IOG and amygdala showed rapid intra- and inter-regional connectivity using various types of oscillations. These analytical protocols have the potential to identify the neural mechanisms underlying cognitive functions with high spatial and temporal profiles.

We present two analytical protocols that can be used to analyze intracranial electroencephalography data using the Statistical Parametric Mapping (SPM) software: time-frequency statistical parametric mapping analysis for neural activity, and dynamic causal modeling of induced responses for intra- and inter-regional connectivity.

ניתוח פעילות עצבית וקישוריות באמצעות נתוני EEG תוך-גולגולתי בתוכנה SPM

Measuring neural activity and connectivity associated with cognitive functions at high spatial and temporal resolutions is an important goal in cognitive ...

Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for experiments aimed at studying long-term learning in mice. By permanently wearing a device fixed on their heads, mice are continuously exposed to a sensory mismatch between visual and vestibular inputs while freely moving in home cages. Therefore, this protocol readily enables the study of the visual system and multisensory interactions over an extended timeframe that would not be accessible otherwise. In addition to lowering the experimental costs of long-term sensory learning in naturally behaving mice, this approach accommodates the combination of in vivo and in vitro experiments. In the reported example, video-oculography is performed to quantify the vestibulo-ocular reflex (VOR) and optokinetic reflex (OKR) before and after learning. Mice exposed to this long-term sensory conflict between visual and vestibular inputs presented a strong VOR gain decrease but exhibited few OKR changes. Detailed steps of device assembly, animal care, and reflex measurements are hereby reported.

The presented protocol produces a persistent sensory conflict for experiments aimed at studying long-term learning. By permanently wearing a fixed device on their heads, mice are continuously exposed to a sensory mismatch between visual and vestibular inputs while freely moving in home cages.

הקונפליקט חושי לטווח ארוך באופן חופשי להתנהג עכברים

Long-term sensory conflict protocols are a valuable means of studying motor learning. The presented protocol produces a persistent sensory conflict for ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from parallel fibers (PF) to Purkinje cells (PC) is considered the basis for motor learning, and deficiencies of both LTD and motor learning are observed in various gene-manipulated animals. Common motor learning sets, such as adaptation of the optokinetic reflex (OKR), the vestibular-ocular reflex (VOR), and rotarod test were used for evaluation of motor learning ability. However, results obtained from the GluA2-carboxy terminus modified knock-in mice demonstrated normal adaptation of the VOR and the OKR, despite lacking PF-LTD. In that report, induction of LTD was only attempted using one type of stimulation protocol at room temperature. Thus, conditions to induce cerebellar LTD were explored in the same knock-in mutants using various protocols at near physiological temperature. Finally, we found stimulation protocols, by which LTD could be induced in these gene-manipulated mice. In this study, a set of protocols are proposed to evaluate LTD-induction, which will more accurately allow examination of the causal relationship between LTD and motor learning. In conclusion, experimental conditions are crucial when evaluating LTD in gene-manipulated mice.

In some gene-manipulated animals, using a single protocol may fail to induce LTD in cerebellar Purkinje cells, and there may be a discrepancy between LTD and motor learning. Multiple protocols are necessary to assess LTD-induction in gene-manipulated animals. Standard protocols are shown.

הערכה של האינדוקציה לטווח ארוך של דיכאון פרוסות למבוגרים בלבד

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...