The authors thank the staff of the Center for Comparative Medicine and Research (CCMR) at Dartmouth for their expert care of the mice used for these studies. The authors also acknowledge Emily Clough for her excellent administrative support.

כל עבודת החיה מנצלת פרוטוקולים נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש (IACUC) בבית הספר Geisel לרפואה בדארטמות. 1. במודל עכבר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינדוקציה של מחלות demyelinating TMEV-מושרה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את הכלובים המכילים 4- לעכברי SJL בת 6 שבועות בן / JHan מהמדף למרחב עבודה נוח. סמן את העכברים (למשל, עם תג אוזן או אגרוף באוזן), כדי לאפשר הערכה פרטנית של מחלה קלינית היסטולוגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר 30 μl של המניה מדביק TMEV (2 x 10 6 יחידות פלאק ויוצרים; PFU) ב- PBS לתוך מזרק אינסולין 29-מד המחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את מכונת גז הרדמה: לבדוק את המערכת כדי להבטיח את נוכחותם של כמויות מספיקות של חמצן isoflurane למשך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את מד הזרימה עד 1 ליטר / דקה. מניחים את החיה לתוך תא אינדוקציה ולסגור את הדף. הפעל את vaporizer ל -3.5% ולנטר את החיה עד שכיבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את החיה מן החדר ולבדוק את העכבר על ידי צובט את שודד הדרכים כדי להבטיח הרדמה נאותה. חוסר בתגובת קמצוץ חזק מצביע הרדמה נאותה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הזריקה עם אלכוהול איזופרופיל 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את 30 μl של המניה מדביק TMEV לתוך הימנית של המוח הגדול בזריקה ביד חופשית (איור 1). האתר של הזרקה הוא בערך באמצע הדרך בין קו העין ואוזן ואת ממש ליד קו האמצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את העכבר לכלוב החזקתה פעם ערנית לחלוטין וניידת (בדרך כלל 3 - 5 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים ידי exsanguination או זלוף לב 3 עד 6 חודשים לאחר הדבקת TMEV, תלוי במהירות של התפתחות המחלה. </li></ol></li></ol> 2. ניתוח Rotarod <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנגנון Rotarod <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברי מבחן לפני הדבקת TMEV לערוך להם היכרות עםמכונת להעריך מלאת בסיס איזון תיאום מנוע הרגילה שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את פרוטוקול הסתגלות על -5 ימים לאחר ההדבקה (dpi; כלומר, 5 ימים לפני ההדבקה TMEV). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר העכברים להסתגל לחדר הבדיקה טרם תחילת 30 דקות לפחות בדיקות כדי Rotarod, על מנת לאפשר להם להסתגל לסביבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כי הן יחידת Rotarod והמחשב מופעלים ומחוברים זה לזה (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום להגדיר את Rotarod עם פרמטרי פרוטוקול אימון dpi -5, כמתואר בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את קובץ העבודה עם המידע עדכני והזדהות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את הכלוב ובו הכיתה להיבדק מהמדף אל שולחן סמוך Rotarod. עכברים בדרך כלל נבדקים חוליות 4. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרים עכבר בזנב ולמקם אותו על המוט, עם גב מהמפעיל. חזור על השני באמצעות העכבר הרביעי. אם FAL עכברls או קופץ, ומכניס אותו מנתיבה על Rotarod עד שכל העכברים נמצאים בעמדה. התעלם אם בכלל עכברים להסתובב להתמודד עם המפעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר טעינת כל העכברים, ולחץ על כפתור &quot;Enter&quot; כדי להתחיל את הניסוי. שימו לב טיימרים להתחיל באופן אוטומטי ואת הסיבובים לדקה (סל&quot;ד) על תצוגה עבור כל שביל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כמו כל חיה נופלת מן המוט, להקליט את המהירות של המוט בעת הנפילה, כמו גם את משך הזמן שבו החיה נשארת על המוט. המוט ימשיך לסובב עד שהחיה האחרונה נפלה ממכלול המוט. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי כל העכברים נפלו, השתמש במטלית כדי להסיר כל boli ושתן צואה מן המוט. הנוכחות של שתן חומר צואתי יכולה להשפיע על היכולת של עכברים כדי לאחוז את המוט. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מנוחה של 3 דקות, לתת העכברים שניים ולאחר מכן לערוך מחקר שלישי. הזמן המקסימאלי לכל ניסוי יחיד הוא 240 שניות. נהל סך של 3 ניסויים במהלך כל היום בדיקות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את העכברים לכלוב ביתם ולהחזיר אותם בחזרה אל המדף. בסוף פגישת הניסוי, לנקות את Rotarod עם מים וסבון כדי להסיר את כל הצואה את המכונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את baseplate עם 70% אתנול. תרסיס את המכונה כולה עם דו תחמוצת כלור לחיטוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בימים - 4, - 3, - 2, ו - 1 pi, מראש להגדיר את Rotarod עם פרמטרים פרוטוקול הכשרה מתאימה, כפי שמתואר בטבלה 1, וחזור על שלבים 2.1.2 עד 2.1.12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קבלת אמצעי הבסיס, להדביק את העכברים עם TMEV. אפשר תקופת החלמה pi ל- 6 ימים. </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td rowspan="2"> פרוטוקול </td><td rowspan="2"> יום הבדיקה </td><td rowspan="2"> תדירות </td><td rowspan="2"> מהירות ההתחלה (סל&quot;ד) </td><td rowspan="2"> מקסמהירות (סל&quot;ד) </td><td> תְאוּצָה </td><td> ניסויים </td><td> ITI </td></tr><tr><td> (סל&quot;ד / sec) </td><td> (N x שניות) </td><td> (דקות) </td></tr><tr><td rowspan="4"> הַדְרָכָה </td><td> - 5 dpi </td><td> יום 1 </td><td> 1 </td><td> 12 </td><td> 03/01 </td><td> 3x240 שניות </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 4 dpi </td><td> יום 1 </td><td> 1 </td><td> 13 </td><td> 03/01 </td><td> 3x240 שניות </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 3 dpi </td><td> יום 1 </td><td> 1 </td><td> 14 </td><td> 03/01 </td><td> 3x240 שניות </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 2; - 1 dpi </td><td> יום 1 </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 03/01 </td><td> 3x240 שניות </td><td> 3 </td></tr><tr><td rowspan="2"> נִסיוֹנִי </td><td> מ +7 כדי +50 dpi </td><td> 2 / שבוע </td><td>5 </td><td> 40 </td><td> 30/05 </td><td> 3x240 שניות </td><td> 3 </td></tr><tr><td> מ 51-150 dpi </td><td> שבוע 1 </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 30/05 </td><td> 3x240 שניות </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> טבלה 1: Rotarod פרמטרים באימוני פרוטוקולי ניסוי. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוטוקול הניסוי Rotarod <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום +7 dpi, מראש להגדיר את Rotarod עם פרמטרים פרוטוקול הניסוי המתאים, כפי שמתואר בטבלה 1. חזור על שלבים 2.1.2 עד 2.1.10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בסוף הניסוי # 3, שוקל כל עכבר ולעשות לעצמך את משקל הגוף על גליון הנתונים. לנקות ולחטא את Rotarod לפי השלבים 2.1.11 ו 2.1.12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את העכברים פעמים בשבוע במשך 6 השבועות הבאים, כפי שתואר לעיל. לאחר 6 שבועות (שבו העכברים הגיעו סביר בשלב מפנה) 8,9, לבדוק את העכברים פעם בשבוע עם אותה experimentaפרוטוקול l. פרוטוקול הבדיקה בפועל נמשך בממוצע 150 ימים, תלוי כמובן המחלה הספציפית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אינדקס נוירולוגיות פונקציונלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לייצא את הנתונים הגולמיים לתוך קובץ גיליון אלקטרוני לנתח את התוצאות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נתונים אקספרסים ככל שהזמן פועלים (איור 3 א): זוהי הפעם ריצה הרגילה בתוספת זמן הסיבוב הפסיבי פחות זמן עיכוב סיבוב (טבלה 2) 10. חשב את זמן הריצה הממוצע של שלושה ניסויים ליום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אין מהיר הנתונים כמדד פונקציונלי נוירולוגיות (NFI; איור 3). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשבתי את סף ביצועי הבסיס של כל עכבר בודד. סף ביצועי בסיס נקבע כממוצע של כל זמנים פועלים מהיום + 15 עד + 45 pi 6,7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשבתי את NFI כממוצע של שלוש רצות הממוצע האחרונות מחולק סף ביצועי בסיס של זה 6,7 עכבר ספציפי &lt;/ Sup&gt;. הערה: אם נבדק פעמים רצופות עבור עכבר ביום + 72, + 76, ו + 79 pi הם 55 שניות, 45 שניות, ו -50 שניות, ובפעם הבסיס לאותה העכבר היה 135 שניות, את NFI בשביל זה עכבר על 79 dpi יהיה [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 או 0.37. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבטא את הנתונים כקובץ NFI מתואם (adjNFI; איור 3 ג): להתאים את נתוני NFI לפי ערך אוכלוסייה עבור הניסוי הבודד. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את adjNFI על ידי חלוקת שווי NFI ידי הממוצע NFI שהשיגו בקבוצה שטופלה-דמה באותו יום ספציפי. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> טווח </td><td> הַגדָרָה </td></tr><tr><td> זמן ריצה רגיל </td><td> הזמן הכולל העכבר מבלה פועל באופן פעיל על מוט מסתובב, כלומר, חביון ליפול. </td></tr><tr><td> זמן סיבוב פסיבי </td><td> אהר של זמן העכבר נשאר על המוט במצב הסיבוב הפסיבי. </td></tr><tr><td> זמן השהיה סיבוב </td><td> משך זמן העכבר נשאר על המוט במהלך מצב הסיבוב הפסיבי </td></tr><tr><td> מצב סיבוב פסיבי </td><td> כאשר העכבר תופס את המוט מסתובב מבלי ambulate. </td></tr><tr><td> זמן הפעלה סה&quot;כ </td><td> הסכום הכולל של זמן העכבר נשאר על מוט מסתובב במהלך הפגישה. </td></tr><tr><td> ביצועי Baseline </td><td> ביצועי המנוע טרום נזק העריכו לקבוע סף הביצועים מינימום. </td></tr><tr><td> מדד תפקוד נוירולוגי (NFI) </td><td> מדד קליני, אשר משווה כל ביצועי מנוע עכבר, כלומר, זמן ריצה, בכל עת כדי ביצועי השיא שלה. </td></tr><tr><td> מדד תפקוד נוירולוגים מתואם (adjNFI) </td><td> כאשר תהליך נורמליזציה מוחל להתאים נתוני NFI לפי ערך אוכלוסייההניסוי היחיד. </td></tr><tr><td> ערך האוכלוסין </td><td> ממוצע ערך NFI מתקבל על ידי הקבוצה שטופל מדומה ליום מסוים. </td></tr></tbody></table> טבלה 2: הגדרות של Rotarod פרמטרים שאומצו לכמת נוירולוגיות ירידת ערך.

<ol>
	<li>Lipton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theiler's+virus+infection+in+mice:+an+unusual+biphasic+disease+process+leading+to+demyelination.">Theiler's virus infection in mice: an unusual biphasic disease process leading to demyelination.</a> Infect Immun. 11, 1147-1155 (1975).</li><li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Primer of Neuroimmunological Disease. , (2012).</li><li>Rustay, N. R., Wahlsten, D., Crabbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+genetic+susceptibility+to+ethanol+intoxication+in+mice.">Assessment of genetic susceptibility to ethanol intoxication in mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2917-2922 (2003).</li><li>McGavern, D. B., Zoecklein, L., Drescher, K. M., Rodriguez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+neurologic+deficits+in+a+chronic+progressive+murine+model+of+CNS+demyelination.">Quantitative assessment of neurologic deficits in a chronic progressive murine model of CNS demyelination.</a> Exp Neurol. 158, 171-181 (1999).</li><li>Zoecklein, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+comparison+of+demyelinating+disease+induced+by+the+Daniel's+strain+and+BeAn+strain+of+Theiler's+murine+encephalomyelitis+virus.">Direct comparison of demyelinating disease induced by the Daniel's strain and BeAn strain of Theiler's murine encephalomyelitis virus.</a> Brain Pathol. 13, 291-308 (2003).</li><li>Gilli, F., Li, L., Campbell, S. J., Anthony, D. C., Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+B-cell+depletion+in+the+Theiler's+model+of+multiple+sclerosis.">The effect of B-cell depletion in the Theiler's model of multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 359, 40-47 (2015).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+FTY720+in+the+Theiler's+virus+model+of+multiple+sclerosis.">The effect of FTY720 in the Theiler's virus model of multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 308, 41-48 (2011).</li><li>Homanics, G. E., Quinlan, J. J., Firestone, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+and+behavioral+responses+of+inbred+C57BL/6J+and+strain+129/SvJ+mouse+lines.">Pharmacologic and behavioral responses of inbred C57BL/6J and strain 129/SvJ mouse lines.</a> Pharmacol Biochem Be. 63, 21-26 (1999).</li><li>Balkaya, M., Krober, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia.">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cerebr Blood F Met. 33, 330-338 (2013).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Columbus Instruments Rotamex-5 Manual. , 1-33 (2005).</li><li>Dunham, N. W., Miya, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+note+on+a+simple+apparatus+for+detecting+neurological+deficit+in+rats+and+mice.">A note on a simple apparatus for detecting neurological deficit in rats and mice.</a> J Am Pharm Ass. 46, 208-209 (1957).</li><li>Ulrich, R., Kalkuhl, A., Deschl, U., Baumgartner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+learning+approach+identifies+new+pathways+associated+with+demyelination+in+a+viral+model+of+multiple+sclerosis.">Machine learning approach identifies new pathways associated with demyelination in a viral model of multiple sclerosis.</a> J Cell Mol Med. 14, 434-448 (2010).</li><li>Lynch, J. L., Gallus, N. J., Ericson, M. E., Beitz, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+nociception,+sex+and+peripheral+nerve+innervation+in+the+TMEV+animal+model+of+multiple+sclerosis.">Analysis of nociception, sex and peripheral nerve innervation in the TMEV animal model of multiple sclerosis.</a> Pain. 136, 293-304 (2008).</li><li>Pirko, I., Johnson, A. J., Lohrey, A. K., Chen, Y., Ying, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+gray+matter+T2+hypointensity+correlates+with+disability+in+a+murine+model+of+MS.">Deep gray matter T2 hypointensity correlates with disability in a murine model of MS.</a> J Neurol Sci. 282, 34-38 (2009).</li><li>Oleszak, E. L., Chang, J. R., Friedman, H., Katsetos, C. D., Platsoucas, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Theiler's+virus+infection:+a+model+for+multiple+sclerosis.">Theiler's virus infection: a model for multiple sclerosis.</a> Clin Microbiol Rev. 17, 174-207 (2004).</li><li>McCarthy, D. P., Richards, M. H., Miller, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+multiple+sclerosis:+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+Theiler's+virus-induced+demyelinating+disease.">Mouse models of multiple sclerosis: experimental autoimmune encephalomyelitis and Theiler's virus-induced demyelinating disease.</a> Methods Mol Biol. 900, 381-401 (2012).</li><li>. International Mouse Phenotyping Resource of Standardised Screens Available from: <a target="_blank" href="https://www.mousephenotype.org/impress/protocol/158/1">https://www.mousephenotype.org/impress/protocol/158/1</a> (2016)</li><li>Bohlen, M., Cameron, A., Metten, P., Crabbe, J. C., Wahlsten, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calibration+of+rotational+acceleration+for+the+rotarod+test+of+rodent+motor+coordination.">Calibration of rotational acceleration for the rotarod test of rodent motor coordination.</a> J Neurosci Methods. 178, 10-14 (2009).</li><li>Hopkins, M. E., Bucci, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interpreting+the+effects+of+exercise+on+fear+conditioning:+the+influence+of+time+of+day.">Interpreting the effects of exercise on fear conditioning: the influence of time of day.</a> Behav Neurosci. 124, 868-872 (2010).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

למרות מספר מגבלות, מבחן ביצועי Rotarod מייצג כלי חשוב להערכת תפקוד מוטורי ועל תפקוד TMEV-IDD וכן את ההשפעה של התערבויות פרמקולוגיות על התקדמות מוגבלת בעכברים. מבחן Rotarod תואר לראשונה בשנת 1957 ככולים למדידת גירעונות נוירולוגיות במכרסמים <s...

Murine Encephalomyelitis וירוס של Theiler (TMEV) הוא וירוס RNA חד-גדילי neurotropic כי מדביק את מערכת העצבים המרכזית murine בהתמדה (CNS). בעכברים רגישים, זיהום עם TMEV גורם מחלה demyelinating החיסונית בתיווך, כרונית-פרוגרסיבי, הידועה כמחלת demyelinating הנגרמת TMEV (TMEV-IDD). זיהום ניסיוני של עכברים לוקח מהלך מחלה דומה לזו שנצפתה בצורות מתקדמות של טרשת נפוצה (MS). TMEV-IDD מאופיין בשני שלבים: בשלב האקוטי בשלב הכרוני. בשלב החריף הוא 1,2 דלקת מוח קל, בדרך כלל תת-קליני. השלב השני, כרונית, החל כחודש לאחר ההדבקה, מורכב נכות שהתקדמה לאטה מאופיין demyelination, דלקות, 1,2 נזק axonal. החולשה שנצפתה בעכברים קשור עוויתות, מדי פעם, עוויתות טוניק חמורה. מאחר שקיימים כרגע אין medications כדי לשפר הנכות מתקדמת בחולים, חוקרים נמשכים במיוחד על ידי TMEV-IDD, המייצג במודל חיה אופטימלית לניטור השפעת סמים שינוי מחלה על התקדמות המחלה. עם זאת, בעכברים כמו גם אצל חולי טרשת נפוצים, הפיקוח על התקדמות מוגבלת הצריך הסתכלות קלינית מתמשכת לאורך תקופות ממושכות של זמן. בעכברים, ניטור ארוך טווח התקדמות נכות יכול להיות מושלם עם מבחן ביצועים Rotarod. מבחן ביצועי Rotarod הוא מבחן התנהגותי סטנדרטי מעריך פונקציות קשורות מנוע כגון קואורדינציה, שיווי משקל, עייף במכרסמים. העכברים יש לשמור על שיווי משקלם על מוט מחרטות, אשר מסתובב תחת אצה רציפה; חביון הזמן לרדת מ מוט זה נרשם. בעלי חיים עם חוסר תפקוד נוירולוגי אינם מסוגלים להישאר על מוט מסתובב כל עוד שולטת, והם בדרך כלל להשיל כאשר מהירות סיבוב עולה שלהםקיבולת מנוע. ירידת ערך הנוירולוגיות יותר החיות יש, כמה שיותר מהר הם נופלים שבקצה המוט ואת קצר חביון הזמן הוא. היתרון של בדיקת Rotarod על מערכות בקיע החזותיות המסורתיות הוא שזה מייצר אובייקטיבי, מדיד משתנה הזמן חביון-אשר יכול בסופו של דבר לשמש עבור ניתוחים סטטיסטיים לכמת את ההשפעות של טיפולי פרוצדורות 3. במעבדה של Neuroimmunology (לוני) ב Dartmouth, עכברים כפופים פרוטוקול הסתגלות, שבו הם נבחנים לפני ההדבקה TMEV כדי לערוך להם היכרות עם המכונה ועל מנת להעריך את &quot;הבסיס&quot; ושליטה מוטורית תיאום האיזון הרגיל שלהם 4, 5. לאחר הבסיס הוא הקים את עכברים נגועים עם TMEV, הם נבחנים פעם או פעמיים בשבוע במשך תקופה של מספר חודשים. פרוטוקול הבדיקה בפועל נמשך בממוצע 150 ימים, ובכך מאפשר הערכה שלהירידה של שיווי משקל, קואורדינציה, ושליטה מוטורית על כל מהלך מחל demyelinating. כמה מאות TMEV-IDD ואת שטופלו דמה עכברים נבדקו עד כה עבור ליקוי נוירולוגי בדארטמות. עכברים אלו קיבלו טיפולים אימונו שונים, אבל לא תרופתי כבר נמצא יעיל בהפחתת התקדמות הנכות 6,7. המאמר הנוכחי ואת הפרוטוקול הקשור מתארים כיצד לאפיין את ליקוי הנוירולוגים המתקדם שהפגין עכברי TMEV-IDD. במיוחד, הפרוטוקול מציע המלצות של פרמטרים לבדיקה ספציפיים ככל הנראה מתאים בדרך כלל לומד נכות נוירולוגית בעכברי TMEV-IDD באמצעות מבחן Rotarod. הליך זה מספק בסיס, שלעומתו ניתן להעריך (1) הרלוונטית של מודל העכבר הזה ל- MS המתקדמת (2) התועלת שלה לבדיקת טיפולים שמטרתם בטיפול במצבי נוירולוגית מתקדמות כגון MS. ברור,מבחן ביצועי Rotarod והפרוטוקול ופרמטרי בדיקות אופטימיזציה הנוכחי אינם יעילים רק באיתור נכות נוירולוגית הדרגתית במודל עכבר TMEV-IDD, אבל הם גם שימושיים בחשיפת ליקויים הנגרמת וירוס אחרים ו / או עכבר גנטי מודלים של מחלות ניווניות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="636">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mice SJL/JCrHsd 4 to 6 week old</td>
			<td style="width:83px;">Envigo</td>
			<td style="width:119px;">#052</td>
			<td style="width:219px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">TMEV virus stock</td>
			<td style="width:83px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Isoflurane vaporizer</td>
			<td style="width:83px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:119px;">#340471</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Insulin Syringes U- 100 29g x 0.5cc</td>
			<td style="width:83px;">BD</td>
			<td style="width:119px;">#328203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod for Mice with RS-232 and Software</td>
			<td style="width:83px;">Columbus Instruments</td>
			<td style="width:119px;">#0890M</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring progressive neurological disability in a mouse model of multiple sclerosis

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating disease, with clinical features similar to the progressive forms of multiple sclerosis (MS). The mice show progressive disability with loss of motor and sensory functions, which can be assessed with multiple apparatuses and protocols. Among them, the Rotarod performance test is a very common behavioral test, its advantage being that it provides objective measurements, but it is often used assuming that it is straightforward and simple. In contrast to visual scoring systems used in some models of MS, which are highly subjective, the Rotarod test generates an objective, measurable, continuous variable (i.e., length of time), allowing almost perfect inter-rater concordances. However, inter-laboratory reliability is only achieved if the various testing parameters are replicated. In this manuscript, recommendations of specific testing parameters, such as size, speed, and acceleration of the rod; amount of training given to the animals; and data processing, are presented for the Rotarod test.

מטרת הניסוי נציג זו הייתה להשוות את נכות נוירולוגית הנגרמת על ידי זן דניאלס (DA) ומתח שעועית של TMEV. למטרות המחקר הנוכחי, קבוצה של 32 נקבות עכברים SJL נדבקו intracranially עם TMEV, או זן DA (n = 16) או זן שעועית (n = 16), וסימנים קליניים שלהם נוטרו לאורך זמן. קבוצה נוספת של 20 ...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis at JoVE.com

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

An optimized testing protocol is presented in this paper for the Rotarod performance test, used for measuring progressive neurological disability in TMEV-infected mice.

מדידת נכות נוירולוגית מתקדמת עכבר דגם של טרשת נפוצה

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

measuring-progressive-neurological-disability-mouse-model-multiple

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.9K Views.  Geisel School of Medicine at Dartmouth. An optimized testing protocol is presented in this paper for the Rotarod performance test, used for measuring progressive neurological disability in TMEV-infected mice. 

Video: Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

Multiple-mouse Neuroanatomical Magnetic Resonance Imaging

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and evaluating mouse models of human disease. MRI is an excellent modality for investigating genetically altered animals. It is capable of whole brain coverage, can be used in vivo, and provides multiple contrast mechanisms for investigating different aspects of neuranatomy and physiology. The advent of high-field scanners along with the ability to scan multiple mice simultaneously allows for rapid phenotyping of novel mutations.
Effective mouse MRI studies require attention to many aspects of experiment design. In this article, we will describe general methods to acquire quality images for mouse phenotyping using a system that images mice concurrently in shielded transmit/receive radio frequency (RF) coils in a common magnet (Bock et al., 2003). We focus particularly on anatomical phenotyping, an important and accessible application that has shown a high potential for impact in many mouse models at our imaging centre. Before we can provide the detailed steps to acquire such images, there are important practical considerations for both in vivo brain imaging (Dazai et al., 2004) and ex vivo brain imaging (Spring et al., 2007) that should be noted. These are discussed below.

Magnetic resonance imaging (MRI) has become an increasingly popular tool for examining the phenotype of genetically altered mice. This article illustrates the methods necessary to achieve high-throughput phenotyping of genetically altered mice using multiple-mouse MRI.

מרובה עכבר Neuroanatomical תהודה מגנטית

The field of mouse phenotyping with magnetic resonance imaging (MRI) is rapidly growing, motivated by the need for improved tools for characterizing and ...

Quantitative Analysis of Climbing Defects in a Drosophila Model of Neurodegenerative Disorders

Locomotive defects resulting from neurodegenerative disorders can be a late onset symptom of disease, following years of subclinical degeneration, and thus current therapeutic treatment strategies are not curative. Through the use of whole exome sequencing, an increasing number of genes have been identified to play a role in human locomotion. Despite identifying these genes, it is not known how these genes are crucial to normal locomotive functioning. Therefore, a reliable assay, which utilizes model organisms to elucidate the role of these genes in order to identify novel targets of therapeutic interest, is needed more than ever. We have designed a sensitized version of the negative geotaxis assay that allows for the detection of milder defects earlier and has the ability to evaluate these defects over time. The assay is performed in a glass graduated cylinder, which is sealed with a wax barrier film. By increasing the threshold distance to be climbed to 17.5 cm and increasing the experiment duration to 2 min&#160;we have observed a greater sensitivity in detecting mild mobility dysfunctions. The assay is cost effective and does not require extensive training to obtain highly reproducible results. This makes it an excellent technique for screening candidate drugs in Drosophila mutants with locomotion defects.

We present an optimized inexpensive and reliable negative geotaxis assay in Drosophila melanogaster as a model for neurodegenerative disorders. Being more sensitive to mild locomotor defects, this assay will help screen for potential genetic interactions and drug targets.

ניתוח כמותי של פגמים טיפוס בדגם תסיסנית של הפרעות ניווניות

Locomotive defects resulting from neurodegenerative disorders can be a late onset symptom of disease, following years of subclinical degeneration, and ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic transmission during repetitive nerve firing. Impaired endocytosis in pathological conditions leads to decreases in synaptic strength and brain functions. Here, we describe methods used to measure synaptic vesicle endocytosis at the mammalian hippocampal synapse in neuronal culture. We monitored synaptic vesicle protein endocytosis by fusing a synaptic vesicular membrane protein, including synaptophysin and VAMP2/synaptobrevin, at the vesicular lumenal side, with pHluorin, a pH-sensitive green fluorescent protein that increases its fluorescence intensity as the pH increases. During exocytosis, vesicular lumen pH increases, whereas during endocytosis vesicular lumen pH is re-acidified. Thus, an increase of pHluorin fluorescence intensity indicates fusion, whereas a decrease indicates endocytosis of the labelled synaptic vesicle protein. In addition to using the pHluorin imaging method to record endocytosis, we monitored vesicular membrane endocytosis by electron microscopy (EM) measurements of Horseradish peroxidase (HRP) uptake by vesicles. Finally, we monitored the formation of nerve terminal membrane pits at various times after high potassium-induced depolarization. The time course of HRP uptake and membrane pit formation indicates the time course of endocytosis.

Synaptic vesicle endocytosis is detected by light microscopy of pHluorin fused with synaptic vesicle protein and by electron microscopy of vesicle uptake.

מדידת אנדוציטוזה שלפוחית סינפטית של נוירונים בהיפוקמפוס בתרבית

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...

Establishing Mouse Models for Zika Virus-induced Neurological Disorders Using Intracerebral Injection Strategies: Embryonic, Neonatal, and Adult

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly and additional brain abnormalities. However, the mechanism underlying the pathogenesis of ZIKV in the developing brain remains unclear. Intracerebral surgical methods are frequently used in neuroscience research to address questions about both normal and abnormal brain development and brain function. This protocol utilizes classical surgical techniques and describes methods that allow one to model ZIKV-associated human neurological disease in the mouse nervous system. While direct brain inoculation does not model the normal mode of virus transmission, the method allows investigators to ask targeted questions concerning the consequence after ZIKV infection of the developing brain. This protocol describes embryonic, neonatal, and adult stages of intraventricular inoculation of ZIKV. Once mastered, this method can become a straightforward and reproducible technique that only takes a few hours to perform.

Here we describe a method for establishing a model of Zika virus-induced microcephaly in mouse. This protocol includes methods for embryonic, neonatal, and adult-stage intracerebral inoculation of the Zika virus.

יצירת מודלים העכבר עבור וירוס Zika-induced הפרעות נוירולוגיות באמצעות הזרקת גרם אסטרטגיות: עובריים Neonatal, למבוגרים

The Zika virus (ZIKV) is a flavivirus currently endemic in North, Central, and South America. It is now established that the ZIKV can cause microcephaly ...

Simultaneous Cryosectioning of Multiple Rodent Brains

Histology and immunohistochemistry are routine methods of analysis to visualize microscopic anatomy and localize proteins within biological tissue. In neuroscience, as well as a plethora of other scientific fields, these techniques are used. Immunohistochemistry can be done on slide mounted tissue or free-floating sections. Preparing slide-mounted samples is a time intensive process. The following protocol for a technique, called the Megabrain, reduced the time taken to cryosection and mount brain tissue by up to 90% by combining multiple brains into a single frozen block. Furthermore, this technique reduced variability seen between staining rounds, in a large histochemical study. The current technique has been optimized for using rodent brain tissue in downstream immunohistochemical analyses; however, it can be applied to different scientific fields that use cryosectioning.

Here, we present a protocol to freeze and section brain tissue from multiple animals as a timesaving alternative to processing single brains. This reduces staining variability during immunohistochemistry and reduces time cryosectioning and imaging.

Cryosectioning בו זמנית של המוח מכרסמים מרובים

Histology and immunohistochemistry are routine methods of analysis to visualize microscopic anatomy and localize proteins within biological tissue. In ...

Lipidomics and Transcriptomics in Neurological Diseases

Lipids serve as the primary interface to brain insults or stimuli conducive to neurological diseases and are a reservoir for the synthesis of lipids with various signaling or ligand function that can underscore the onset and progression of diseases. Often changing at the presymptomatic level, lipids are an emerging source of drug targets and biomarkers. Many neurological diseases exhibit neuroinflammation, neurodegeneration, and neuronal excitability as common hallmarks, partly modulated by specific lipid signaling systems. The interdependence and interrelation of synthesis of various lipids prompts a multilipid, multienzyme, and multireceptor analysis in order to derive the commonalities and specificities of neurological contexts and to expedite the unravelling of mechanistic aspects of disease onset and progression. Ascribing lipid roles to distinct brain regions advances the determination of lipid molecular phenotype and morphology associated with a neurological disease.
Presented here is a modular protocol suitable for the analysis of membrane lipids and downstream lipid signals along with mRNA of enzymes and mediators underlying their functionality, extracted from discrete brain regions that are relevant for a particular neurological disease and/or condition. To ensure accurate comparative lipidomic profiling, the workflows and operating criteria were optimized and standardized for: i) brain sampling and dissection of regions of interest, ii) co-extraction of multiple lipid signals and membrane lipids, iii) dual lipid/mRNA extraction, iv) quantification by liquid chromatography multiple reaction monitoring (LC/MRM), and v) standard mRNA profiling. This workflow is amenable for the low tissue amounts obtained by sampling of the functionally discrete brain subregions (i.e. by brain punching), thus preventing bias in multimolecular analysis due to tissue heterogeneity and/or animal variability. To reveal peripheral consequences of neurological diseases and establish translational molecular readouts of neurological disease states, peripheral organ sampling, processing, and their subsequent lipidomic analysis, as well as plasma lipidomics, are also pursued and described. The protocol is demonstrated on an acute epilepsy mouse model.

This article presents a modular protocol for tissue lipidomics and transcriptomics, and plasma lipidomics in neurological disease mouse models targeting lipids underlying inflammation and neuronal activity, membrane lipids, downstream messengers, and mRNA-encoding enzymes/receptors underlying lipid function. Sampling, sample processing, extraction, and quantification procedures are outlined.

ליפידומיקה ותעתיק במחלות נוירולוגיות

Lipids serve as the primary interface to brain insults or stimuli conducive to neurological diseases and are a reservoir for the synthesis of lipids with ...

Comprehensive Autopsy Program for Individuals with Multiple Sclerosis

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 days a year. Participants consent to donate their brain and spinal cord. Most patients were followed by neurologists at the Cleveland Clinic Mellen Center for MS Treatment and Research. Their clinical courses and neurological disabilities are well-characterized. Soon after death, the body is transported to the MS Imaging Center, where the brain is scanned in situ by 3 T magnetic resonance imaging (MRI). The body is then transferred to the autopsy room, where the brain and spinal cord are removed. The brain is divided into two hemispheres. One hemisphere is immediately placed in a slicing box and alternate 1 cm-thick slices are either fixed in 4% paraformaldehyde for two days or rapidly frozen in dry ice and 2-methylbutane. The short-fixed brain slices are stored in a cryopreservation solution and used for histological analyses and immunocytochemical detection of sensitive antigens. Frozen slices are stored at -80 &#176;C and used for molecular, immunocytochemical, and in situ hybridization/RNA scope studies. The other hemisphere is placed in 4% paraformaldehyde for several months, placed in the slicing box, re-scanned in the 3 T magnetic resonance (MR) scanner and sliced into centimeter-thick slices. Postmortem in situ MR images (MRIs) are co-registered with 1 cm-thick brain slices to facilitate MRI-pathology correlations. All brain slices are photographed and brain white-matter lesions are identified. The spinal cord is cut into 2 cm segments. Alternate segments are fixed in 4% paraformaldehyde or rapidly frozen. The rapid procurement of postmortem MS tissues allows pathological and molecular analyses of MS brains and spinal cords and pathological correlations of brain MRI abnormalities. The quality of these rapidly-processed postmortem tissues (usually within 6 h of death) is of great value to MS research and has resulted in many high-impact discoveries.

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease with no cure. Analysis of brain tissue provides important clues to understanding the pathogenesis of the disease. Here we discuss the methodology and downstream analysis of MS brain tissue collected through a unique rapid autopsy program in operation at the Cleveland Clinic.

שלאחר המוות תוכנית מקיפה עבור אנשים עם טרשת נפוצה

We describe a rapid tissue donation program for individuals with multiple sclerosis (MS) that requires scientists and technicians to be on-call 24/7, 365 ...

Applying the RatWalker System for Gait Analysis in a Genetic Rat Model of Parkinson's Disease

Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder caused by the loss of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta. Gait abnormalities, including decreased arm swing, slower walking speed, and shorter steps are common in PD patients and appear early in the course of disease. Thus, the quantification of motor patterns in animal models of PD will be important for phenotypic characterization during disease course and upon therapeutic treatment. Most cases of PD are idiopathic; however, the identification of hereditary forms of PD uncovered gene mutations and variants, such as loss-of-function mutations in Pink1 and Parkin, two proteins involved in mitochondrial quality control that could be harnessed to create animal models. While mice are resistant to neurodegeneration upon loss of Pink1 and Parkin (single and combined deletion), in rats, Pink1 but not Parkin deficiency leads to nigral DA neuron loss and motor impairment. Here, we report the utility of FTIR imaging to uncover gait changes in freely walking young (2 months of age) male rats with combined loss of Pink1 and Parkin prior to the development of gross visually apparent motor abnormality as these rats age (observed at 4-6 months), characterized by hindlimb dragging as previously reported in Pink1 knockout (KO) rats.

Here we describe the RatWalker system, built by redesigning the MouseWalker apparatus to accommodate for the increased size and weight of rats. This system uses frustrated total internal reflection (FTIR), high-speed video capture, and open-access analysis software to track and quantify gait parameters.

יישום מערכת RatWalker לניתוח הליכה במודל חולדה גנטי של מחלת פרקינסון

Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder caused by the loss of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars ...

Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis

Multiple sclerosis (MS) is a neuroinflammatory disease with expanding axonal and neuronal degeneration and demyelination in the central nervous system, leading to motor dysfunctions, psychical disability, and cognitive impairment during MS progression. Positron emission tomography (PET) is an imaging technique able to quantify in vivo cellular and molecular alterations.
Radiotracers with affinity to intact myelin can be used for in vivo imaging of myelin content changes over time. It is possible to detect either an increase or decrease in myelin content, what means this imaging technique can detect demyelination and remyelination processes of the central nervous system. In this protocol we demonstrate how to use PET imaging to detect myelin changes in the lysolecithin rat model, which is a model of focal demyelination lesion (induced by stereotactic injection) (i.e., a model of multiple sclerosis disease). 11C-PIB PET imaging was performed at baseline, and 1 week and 4 weeks after stereotaxic injection of lysolecithin 1% in the right striatum (4 &#181;L) and corpus callosum (3 &#181;L) of the rat brain, allowing quantification of focal demyelination (injection site after 1 week) and the remyelination process (injection site at 4 weeks).
Myelin PET imaging is an interesting tool for monitoring in vivo changes in myelin content which could be useful for monitoring demyelinating disease progression and therapeutic response.

Positron Emission Tomography Imaging for In Vivo Measuring of Myelin Content in the Lysolecithin Rat Model of Multiple Sclerosis

This protocol has the aim of monitoring in vivo myelin changes (demyelination and remyelination) by positron emission tomography (PET) imaging in an animal model of multiple sclerosis.

הדמיית טומוגרפיה פליטת פוזיטרונים למדידת Vivo של תוכן מיאלין במודל עכברוש Lysolecithin של טרשת נפוצה

Multiple sclerosis (MS) is a neuroinflammatory disease with expanding axonal and neuronal degeneration and demyelination in the central nervous system, ...

Flow Cytometric Analysis of Multiple Mitochondrial Parameters in Human Induced Pluripotent Stem Cells and Their Neural and Glial Derivatives

Mitochondria are important in the pathophysiology of many neurodegenerative diseases. Changes in mitochondrial volume, mitochondrial membrane potential (MMP), mitochondrial production of reactive oxygen species (ROS), and mitochondrial DNA (mtDNA) copy number are often features of these processes. This report details a novel flow cytometry-based approach to measure multiple mitochondrial parameters in different cell types, including human induced pluripotent stem cells (iPSCs) and iPSC-derived neural and glial cells. This flow-based strategy uses live cells to measure mitochondrial volume, MMP, and ROS levels, as well as fixed cells to estimate components of the mitochondrial respiratory chain (MRC) and mtDNA-associated proteins such as mitochondrial transcription factor A (TFAM). 
By co-staining with fluorescent reporters, including MitoTracker Green (MTG), tetramethylrhodamine ethyl ester (TMRE), and MitoSox Red, changes in mitochondrial volume, MMP, and mitochondrial ROS can be quantified and related to mitochondrial content. Double staining with antibodies against MRC complex subunits and translocase of outer mitochondrial membrane 20 (TOMM20) permits the assessment of MRC subunit expression. As the amount of TFAM is proportional to mtDNA copy number, the measurement of TFAM per TOMM20 gives an indirect measurement of mtDNA per mitochondrial volume. The entire protocol can be carried out within 2-3 h. Importantly, these protocols allow the measurement of mitochondrial parameters, both at the total level and the specific level per mitochondrial volume, using flow cytometry.

This study reports a novel approach to measure multiple mitochondrial functional parameters based on flow cytometry and double staining with two fluorescent reporters or antibodies to detect changes in mitochondrial volume, mitochondrial membrane potential, reactive oxygen species level, mitochondrial respiratory chain composition, and mitochondrial DNA.

ניתוח ציטומטרי של זרימה של פרמטרים מיטוכונדריאליים מרובים בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי האדם ונגזרותיהם העצביות והגליליות

Mitochondria are important in the pathophysiology of many neurodegenerative diseases. Changes in mitochondrial volume, mitochondrial membrane potential ...