אנו מודים מולי Stedfast לסיוע ניסוח דילול הדברה. אנו מודים גם טרוי אנדרסון להדרכה ניתוח probit ואת זכריה אדלמן לקבלת סיוע בתכנון הניסוי. מחקר זה מומן בחלקו על ידי פרס קרן האנטומולוגי ועל ידי קרנות מלגת ממשק הדברת וירג&#39;יניה.

הערה: פרוטוקול זה כולל שני מבחני הדברה בנפרד בטיפול ביצים באג המיטה instars הראשון. פרוטוקולי שניהם נערכו באמצעות אותו הדברה, לעומת זאת, הפרוטוקולים היו צריך להיות מותאמים על מנת להבטיח חשיפת חרקים כדי לתפעל את הדגימות בקלות. 1. Assay הדברה לטבול ביצה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך הזדווגו וניזון-היטב פשפשים נקבה בוגר ממושבה ומניח נקבות (5-10) לתוך צלחת פטרי עם נייר סינון. יש לפחות עשרה משכפל כדי להבטיח שלא יהיו ביצים מספיק עבור assay הדברה. בדקו אם הנקבות הטילו ביצים כל יום. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהם מטילים ביצים, לקחת הנקבות מתוך צלחת פטרי (6 ס&quot;מ × 5 ס&quot;מ) ולשים אותם לתוך מנות חדשות פטרי עם נייר סינון חדשים מדי יום ולהקליט את התאריך על צלחות פטרי ישנים וחדשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר את הביצים גיל 4 עד 5 ימים לפני תחילת assay. רגישות לשינויי דברה במהלך התפתחות עוברית, so חשוב לשלוט לגיל ביצה. עכב את כל שלבי החיים בשעה 12:12 L: photoperiod D, 60% לחות יחסית, ו -27 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הביצים הזדקנו כראוי, להסיר את ביצי פשפש המיטה בעדינות ניירות לסנן באמצעות מלקחיים רך-קצה. בעדינות לגרד את תחתית הביצה המצורפת נייר הסינון באמצעות המלקחיים ואז בעדינות לתפוס ללא הפעלת לחץ רב על הביצה להגביל ביצי פשפש מיטה לזרוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את ביצי פשפש מיטת סיר לקבוצות שלהם בתוך צלחות פטרי פלסטיק. הגבל את החשמל הסטטי משליך ביצים פשפש מיטה ידי שפשוף בתחתית כל צלחת פטרי בצד החיצוני בסדין מרכך כביסה. התייחסו לקבוצות של ביצי פשפש מיטה (5-10 ביצים לכל קבוצה) בבת אחת. קחו קבוצה אחת לשכפל ולהשתמש לפחות חמש (או יותר) משכפל עבור assay זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן דילולים סדרתי של חומרי הדברה כדי לקבל מגוון של 5 ריכוזים שונים (0.21-21 μL / מ&quot;ל ​​עבור imidacloprid (0.1%) / β-Cyfluthrin (0.5%) ו שליטהפתרון עם (מי ברז) ממס בלבד. הפוך 20 מ&quot;ל של כל ריכוז שיהיה מספיק נפח עבור assay טבילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות צנטריפוגה Cut (50 מיליליטר) ב -35 לקו המ&quot;ל מדיאלית באמצעות כלי סיבובי עם אבזר גלגל חתוך ולאחר מכן לחתוך חור לתוך הכובע של צינור צנטריפוגה (קוטר = 2.54 סנטימטרים) באמצעות אותו הכלי סיבובי עם אלומיניום תחמוצת שחיקה אבן אביזר. השאיר 5 סנטימטרים על קצה הכובע בעת החיתוך, כך הכובע ידפוק מאובטח לתוך הצינור (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים רשת בסדר לריבועים גדולים מספיק כדי להתאים לתוך כובע (~ 5 ס&quot;מ 2). הבריגו את רשת בחוזקה, ביטול כל בליטות, לתוך צינורות צנטריפוגה באמצעות כובע צינור צנטריפוגות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח קבוצת ביצי פשפש מיטה (לשכפל אחד) בעזרת מברשת צבע על הרשת הפנימית של צינור צנטריפוגות. טובלים את קבוצת פשפשים הפנימי של צינור צנטריפוגות לחתוך לתוך ריכוז הדברה למשך 5 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את צינור צנטריפוגות מתוך הפתרון הדברת דואר. לייבש את הרשת עם הביצים בתוך ידי נחת צינור צנטריפוגות ישירות על גבי רקמה במעבדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הקבוצה של ביצים מתוך הצינור צנטריפוגות בעזרת מברשת צבע קטנה, בסדר-זיפים ולהכניס אותם לתוך צלחת נקייה פטרי עם נייר סינון נקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שיא תמותת ביצה (כישלון לבקוע) למשך 14 יום על מנת להבטיח את כל הביצים הייתה מספיק זמן כדי לבקוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נכון לתמותה בטיפול השליטה באמצעות הנוסחא של אבוט (תמותת בדיקת% -% שליטת תמותה / 100 - תמותה מלאה x 100). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כנס תמותה קליט עם הריכוזים המקביל לתוך תוכנת ניתוח 15 לחשב LC 50 ערכים. </li></ol> 2. Assay הדברה ראשית Instar <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד קבוצת פשפשים שניזון היטב (5 זכרים בוגרים ו -5 נשים בוגרות), רצוי נמאס 1 יום לפני, ולהכניס אותם לתוך צלחת פטרי (6 ס&quot;מ × 5 ס&quot;מ) עם נייר סינון מסופקים mating ו- הטלה. אפשר הפשפשים המבוגרים כדי להזדווג ולהטיל ביצים עבור כ 7-9 ימים. האכלה, להשתמש במערכת האכלה מלאכותית כי מפיצת מים חמים צינורות זכוכית סביב דם 16. לצורך המחקר, להשתמש בדם ארנב defibronated. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המבוגרים מן צלחות פטרי (6 ס&quot;מ × 5 ס&quot;מ) ולאפשר את הביצים בוקעות והופכות instars הראשון בתוך צלחות פטרי. זה לוקח בערך 7-9 ימים לביצי פשפש המיטה לבקוע בטמפרטורת חדר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף את instars הראשון יאכיל אותם באותו הגיל באמצעות מברשת צבע. גיל יכול להיקבע על ידי הסרת instars הראשון יומי והקלטה היום הם בקעו. מניחים אותם מנות חדשות, נקיות פטרי עד assay הדברה. נימפות instar ראשית הם לא מאוד יבושו עמידים, ולכן assay הדברה אמור להסתיים בהקדם האפשרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור assay, להכין דילולים סידוריים של imidacloprid / β-Cyfluthrin כדי לקבל מגוון של 5 ריכוזים שונים וכן solu מלאtion עם ממס בלבד. מוצרים בנוסחאות שכותרתו לבקרה פשפש מיטה בארצות הברית שימשו במחקרים אלה, ולכן הממס היה מים (על פי התווית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 150 aliquots μL של כל ריכוז הדברה ומים עבור קבוצת הביקורת על ניירות מסנן הפרט (# 1; 4.2 ס&quot;מ קוטר). הפץ את החרקים על נייר הסינון כולו באמצעות pipetter ידי החלת טיפות מסביב לקצה ומרכז שלם של נייר הסינון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את הניירות לסנן מטופל באופן אישי על גבי לוחות עץ כבדים פרט (7 סנטימטר 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבוצות שחרור instars הראשון (5 עד 10 בכל קבוצה) על ניירות לסנן פרט ועדיין רטובים עם קוטל חרקים ולכסות את instars הראשון עם התחתון הפוך של צלחת פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחי משקל על גבי צלחת פטרי למנוע פשפשי instar הראשונים לברוח פני שטח המטופל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמותת שיא של פשפשי instar הראשונים לאחר חשיפה של 24 שעות לכלריכוזי דברה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נכון לתמותה בטיפול השליטה באמצעות הנוסחא של אבוט (תמותת בדיקת% -% שליטת תמותה / 100 - תמותה מלאה x 100). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כנס נרשמה תמותה וריכוזית לתוך תוכנת ניתוח 15 לחשב LC 50 ערכים. </li></ol>

<ol>
	<li>Sabou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bed+bugs+reproductive+life+cycle+in+the+clothes+of+a+patient+suffering+from+Alzheimer's+disease+results+in+iron+deficiency+anemia.">Bed bugs reproductive life cycle in the clothes of a patient suffering from Alzheimer's disease results in iron deficiency anemia.</a> Parasite. 20, (2013).</li><li>Reinhardt, K., Kempke, D., Naylor, R. A., Siva-Jothy, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+to+bites+by+the+bedbug,+Cimex+lectularius.">Sensitivity to bites by the bedbug, Cimex lectularius.</a> Med. Vet. Entomol. 23, 163-166 (2009).</li><li>Leverkus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bullous+allergic+hypersensitivity+to+bed+bug+bites+mediated+by+IgE+against+salivary+nitrophorin.">Bullous allergic hypersensitivity to bed bug bites mediated by IgE against salivary nitrophorin.</a> J. invest. entomol. 126, 91-96 (2006).</li><li>Fletcher, C. L., Ardern-Jones, M. R., Hay, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Widespread+bullous+eruption+due+to+multiple+bed+bug+bites.">Widespread bullous eruption due to multiple bed bug bites.</a> Clin. Exp. Dermatol. 27, 74-75 (2002).</li><li>Pritchard, M. J., Hwang, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+anemia+from+bedbugs.">Severe anemia from bedbugs.</a> Can. Med. Assoc. J. 181, 287-288 (2009).</li><li>Goddard, J., de Shazo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Psychological+effects+of+bed+bug+attacks+(Cimex+lectularius+L).">Psychological effects of bed bug attacks (Cimex lectularius L).</a> Am. J. Med. 125, 101-103 (2012).</li><li>Harlan, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bed+bugs+101:+the+basics+of+Cimex+lectularius.">Bed bugs 101: the basics of Cimex lectularius.</a> Am. Entomol. 52, 99-101 (2006).</li><li>Pinto, L. J., Cooper, R., Kraft, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Bed Bug Handbook: The Complete Guide to Bed Bugs and Their Control. , (2007).</li><li>Toloza, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+patterns+of+insecticide+resistance+in+eggs+and+first+instars+of+Triatoma+infestans+(Hemiptera:+Reduviidae)+from+Argentina+and+Bolivia.">Differential patterns of insecticide resistance in eggs and first instars of Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) from Argentina and Bolivia.</a> J. Med. Entomol. 45, 421-426 (2008).</li><li>Cueto, G. M., Zerba, E. N., Picollo, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+pyrethroid+resistance+in+eggs+of+Pediculus+humanus+capitis+(Phthiraptera:+Pediculidae)+from+Argentina.">Evidence of pyrethroid resistance in eggs of Pediculus humanus capitis (Phthiraptera: Pediculidae) from Argentina.</a> J. Med. Entomol. 45, 693-697 (2008).</li><li>Ho, S. H., Goh, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deltamethrin+as+a+potential+ovicidal+pyrethroid+against+Plutella+xylostella+L.">Deltamethrin as a potential ovicidal pyrethroid against Plutella xylostella L.</a> Toxicol. let. 22, 161-164 (1984).</li><li>Bell, C. H., Hole, B. D., Evans, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+occurrence+of+resistance+to+phosphine+in+adult+and+egg+stages+of+strains+of+Rhyzopertha+dominica+(F.)(Coleoptera:+Bostrichidae).">The occurrence of resistance to phosphine in adult and egg stages of strains of Rhyzopertha dominica (F.)(Coleoptera: Bostrichidae).</a> J. Stored Prod. Res. 13, 91-94 (1977).</li><li>Campbell, B. E., Miller, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insecticide+Resistance+in+Eggs+and+First+Instars+of+the+Bed+Bug,+Cimex+lectularius+(Hemiptera:+Cimicidae).">Insecticide Resistance in Eggs and First Instars of the Bed Bug, Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae).</a> Insects. 6, 122-132 (2015).</li><li>Price, L. A., Mills, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+toxicity+of+phosphine+to+the+immature+stages+of+resistant+and+susceptible+strains+of+some+common+stored+product+beetles,+and+implications+for+their+control.">The toxicity of phosphine to the immature stages of resistant and susceptible strains of some common stored product beetles, and implications for their control.</a> J. Stored Prod. Res. 24, 51-59 (1988).</li><li>Robertson, J. L., Preisler, H. K., Russel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PoloPlus: Probit and Logit Analysis User's Guide. , (2003).</li><li>Montes, C., Cuadrillero, C., Vilella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+a+laboratory+colony+of+Cimex+lectularius+(Hemiptera:+Cimicidae)+using+an+artificial+feeding+technique.">Maintenance of a laboratory colony of Cimex lectularius (Hemiptera: Cimicidae) using an artificial feeding technique.</a> J. Med. Entomol. 39, 675-679 (2002).</li><li>Brogdon, W. G., McAllister, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simplification+of+adult+mosquito+bioassays+through+use+of+time-mortality+determinations+in+glass+bottles.">Simplification of adult mosquito bioassays through use of time-mortality determinations in glass bottles.</a> J. Am. Mosq. Control. Assoc. 14, 159-164 (1998).</li><li>Katarzyna, K., Saddler, A., Koella, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+age+and+larval+nutrition+on+phenotypic+expression+of+insecticide-resistance+in+Anopheles+mosquitoes.">Effects of age and larval nutrition on phenotypic expression of insecticide-resistance in Anopheles mosquitoes.</a> PLoS One. 8 (3), (2013).</li><li>Outram, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+affecting+the+resistance+of+insect+eggs+to+sulphuryl+fluoride-II:+the+distribution+of+sulphuryl-35+S+fluoride+in+insect+eggs+after+fumigation.">Factors affecting the resistance of insect eggs to sulphuryl fluoride-II: the distribution of sulphuryl-35 S fluoride in insect eggs after fumigation.</a> J. Stored. Prod. Res. 3, 353-358 (1967).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

A critical step in this assay is to ensure that no eggs that are removed from a surface are damaged prior to the assay. Many insects cement their eggs to a substrate, therefore, a preliminary test may be needed to ensure that removal does not cause mortality. This test can be conducted with several replications of a treated group (bed bugs removed from filter paper) compared to a control group (bed bugs not removed). Similar low rates of mortality (or no mortality) between the treated and control group will ensure that ...

באגים מיטה הם מזיקים אורבאניים משמעותיים שיכול לגרום לאובדן דם, גירויים בעור, נדודי שינה, דיכאון, וחרדת מארחי האדם שלהם 1, 2, 3, 4, 5, 6. העלויות של ביטול ושליטת פשפשים הן גבוהות ולעתים קרובות פעמים מצריכות ביקורים מרובים לבית על ידי חברת דברת 7. ביקורים מרובים בדרך כלל נדרשים בגלל ההתנהגות הנסתרת של פשפשים ואת הקשיים הקשורים להרוג אותם. בפרט, ביצי פשפש מיטה קשות לשלוט בגלל גודלם הקטן ואת ההגנה על העובר על ידי קליפת הביצה. נכון לעכשיו, מנהג נפוץ עבור חברות הדברה רבות ברחבי ארצות הברית הוא לטפל בית פשפשים באמצעות הדברה כימית. זה ידועכי הביצים קשות לשלוט, כל כך הרבה חברות יישמו מסגרת הזמן של שבועות מחדש טיפולים 8. זה מאפשר ביצי פשפש מיטה מספיק זמן כדי לבקוע, כך instar הראשונה תצא ו כביכול להיות קל להרוג עם חומרי הדברה. עם זאת, יש מחסור במחקרים להערכת היעילות של חומרי הדברה נוזלי נגד ביצים באג המיטה instars הראשון. ביצי חרקים תועדו אמור להיות שלב החיים הכי קשה לשלוט ב חרקים מזיקים עירוני, למעט פשפשים, בנוסף מזיקי חקלאות רבים. רוב הקשיים הללו יוחסו קליפת הביצה, בעוד כמה מחקרים דיווחו התנגדות חרקים. ההתנגדות בשלב הביצה תועד Triatoma infestans 9, Pediculus humanus capitis 10, Plutella xylostella 11, Rhyzopertha דומיניקה 12, <em&gt; Cimex lectularius 13, וחיפושיות מוצר מרובים מאוחסנים (כלומר Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus ו Rhyzopertha דומיניקה). 14 פיתוח העמידות בשלב הביצה בשלבים בשלים, כמו גם סיבוכים הקשורים חדיר דברה דרך קליפת הביצה, מחייב את הצורך bioassays היעיל דברה נגד שלבי החיים האלה. פרוטוקול זה מספק הליך צעד-אחר-צעד לקביעת היעילות של חומרי הדברה בשלב הביצה instar הראשון של פשפשים משותפים, Cimex lectularius. שני פרוטוקולים אלה הם מבחני ריכוז בתגובה לאפשר כימות של ערכים 50 LC. מבחני ריכוז תגובה משמשים ללימודי טוקסיקולוגית, אולם פרוטוקול זה הותאם לטיפול בקבוצות בקלות ביצים באג מיטת instars הראשון. מבחנים אלה יכולים להיות מותאמיםביצים &#39;מינים שונים של חרקים ונמצאים בשלבים שונים בחיים לא בשלה.

<table><tbody><tr><td>Petri dishes</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>08-757-105</td><td>Plastic</td></tr><tr><td>Filter paper</td><td>Whatman</td><td>1001-042</td><td></td></tr><tr><td>Featherweight forceps</td><td>Fisher Scientific Inc.</td><td>4750</td><td></td></tr><tr><td>Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)</td><td>Bayer CropScience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)</td><td>FMC Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge tube</td><td></td><td>06-443-18</td><td>50 mL; flat-top threaded</td></tr><tr><td>Fine mesh</td><td></td><td>7250C</td><td></td></tr><tr><td>KimWipe</td><td></td><td>06-666A</td><td>11 cm x 21 cm</td></tr><tr><td>Small paint brush</td><td></td><td></td><td>Any small paint brush</td></tr><tr><td>Hardboard panels</td><td></td><td></td><td>Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store</td></tr><tr><td>Metal weights</td><td></td><td></td><td>Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface</td></tr></tbody></table>

a method for evaluating insecticide efficacy against bed bug, cimex lectularius, eggs and first instars

הערכות רעילות תקן של חומרי הדברה נגד חרקים מזיקים נערכות בעיקר מחרקים מבוגרים. הערכות מבוססות על מנה-תגובה או עקום ריכוז תגובה, שבו עליות תמותת המינון או הריכוז של חרקים הוא גדלה. ריכוז קטלני רגיל (LC 50) מנה קטלנית (LD 50) בדיקות שתוצאתן תמותת 50% מהון מניות של אוכלוסיית בדיקה יכולים להיות אתגר עבור הערכה רעילה של חומרי הדברה נגד שלבי חי חרק לא למבוגרים, כגון ביצי instar מוקדם או בשלבי nymphal . עם זאת, מידע זה חיוני להבנת יעילות דברה בכל שלבי חייהם פשפש המיטה, אשר משפיעה המאמצים לבקרה וטיפול. פרוטוקול זה השתמש מבדק טבילת תקן שונה ביצי באג המיטה assay חרקי קשר לטיפול instars הראשון nymphal. מבחנים אלו לייצר עקומת ריכוז תגובת לכמת נוסף LC 50 ערכים עבור הערכות דברה.

הביצים היו טבלו 5 ריכוזים שונים של imidacloprid / β-Cyfluthrin (μL / מיליליטר). Instars הראשון הונחו על גבי משטחי מטופלים של חמישה ריכוזים שונים של imidacloprid / β-Cyfluthrin (איור 2). השתמשנו בשלוש אוכלוסיו?...

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug,  Cimex lectularius, Eggs and First Instars at JoVE.com

A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug,  Cimex lectularius, Eggs and First Instars

ערכות דברה לעתים קרובות ממוקדות נגד חרקים בוגרים, ולא בשלבים בשלים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול להערכת הדברה נגד ביצי פשפש מיטה עם השוואה לשלב פשפש מיטת nymphal הראשון. פרוטוקולים אלה יכולים להיות מותאמים עבור וחרקים אחרים להעריך יעילות דברה בשלבי חיים לא למבוגרים.

שיטה להערכת יעילות הדברה נגד פשפש מיטה,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, ביצים ראשית Instars

Standard toxicity evaluations of insecticides against insect pests are primarily conducted on adult insects. Evaluations are based on a dose-response or ...

a-method-for-evaluating-insecticide-efficacy-against-bed-bug-cimex

Research

JoVE Journal

Environment

A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug, Cimex lectularius, Eggs and First Instars

11.2K Views.  University of Florida.  ערכות דברה לעתים קרובות ממוקדות נגד חרקים בוגרים, ולא בשלבים בשלים. כאן, אנו מציגים פרוטוקול להערכת הדברה נגד ביצי פשפש מיטה עם השוואה לשלב פשפש מיטת nymphal הראשון. פרוטוקולים אלה יכולים להיות מותאמים עבור וחרקים אחרים להעריך יעילות דברה בשל?...

Video: A Method for Evaluating Insecticide Efficacy against Bed Bug,  Cimex lectularius, Eggs and First Instars

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Life tables provide a means of measuring the schedules of birth and death from populations over time. They also can be used to quantify the sources and rates of mortality in populations, which has a variety of applications in ecology, including agricultural ecosystems. Horizontal, or cohort-based, life tables provide for the most direct and accurate method of quantifying vital population rates because they follow a group of individuals in a population from birth to death. Here, protocols are presented for conducting and analyzing cohort-based life tables in the field that takes advantage of the sessile nature of the immature life stages of a global insect pest, Bemisia tabaci. Individual insects are located on the underside of cotton leaves and are marked by drawing a small circle around the insect with a non-toxic pen. This insect can then be observed repeatedly over time with the aid of hand lenses to measure development from one stage to the next and to identify stage-specific causes of death associated with natural and introduced mortality forces. Analyses explain how to correctly measure multiple mortality forces that act contemporaneously within each stage and how to use such data to provide meaningful population dynamic metrics. The method does not directly account for adult survival and reproduction, which limits inference to dynamics of immature stages. An example is presented that focused on measuring the impact of bottom-up (plant quality) and top-down (natural enemies) effects on the mortality dynamics of B. tabaci in the cotton system.

Methodology for Developing Life Tables for Sessile Insects in the Field Using the Whitefly, Bemisia tabaci, in Cotton As a Model System

Life tables allow quantification of the sources and rates of mortality in insect populations and contribute to understanding, predicting and manipulating population dynamics in agroecosystems. Methods for conducting and analyzing cohort-based life tables in the field for an insect with sessile immature life stages are presented.

מתודולוגיית פיתוח טבלאות החיים עבור חרקים Sessile בשימוש השדה כנימת עש הטבק, כנימת עש הטבק, כותנה כמו מערכת מודל

Life tables provide a means of measuring the schedules of birth and death from populations over time. They also can be used to quantify the sources and ...

Functional Characterization of Carboxylesterases in Insecticide Resistant House Flies, Musca Domestica

Carboxylesterase-mediated metabolism is thought to play a major role in insecticide resistance in various insects. Several carboxylesterase genes were found up-regulated in the resistant house fly strain, whereas their roles in conferring insecticide resistance remained to be explored. Here, we designed a protocol for the functional characterization of carboxylesterases. Three example experiments are presented: (1) expression and isolation of carboxylesterase proteins through a baculovirus-mediated insect Spodoptera frugiperda (Sf9) cell expression system; (2) a cell-based MTT (3-[4, 5-dimethykthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide) cytotoxicity assay to measure the tolerance of insect cells to different permethrin treatments; and (3) in vitro metabolic studies to explore the metabolic capabilities of carboxylesterases toward permethrin. The carboxylesterase gene Md&#945;E7 was cloned from a resistant house fly strain ALHF and used to construct a recombinant baculovirus for Sf9 cells infection. The cell viabilities against different permethrin treatments were measured with the MTT assay. The enhanced cell tolerance of the experimental group (Md&#945;E7-recombinant baculovirus infected cells) compared with those of the control groups (CAT-recombinant baculovirus infected cells and GFP-recombinant baculovirus infected cells) to permethrin treatments suggested the capabilities of Md&#945;E7 in metabolizing insecticides, thereby protecting cells from chemical damages. Besides that, carboxylesterase proteins were expressed in insect Sf9 cells and isolated to conduct an in vitro metabolic study. Our results indicated a significant in vitro metabolic efficiency of Md&#945;E7 toward permethrin, directly indicating the involvement of carboxylesterases in metabolizing insecticides and thus conferring insecticide resistance in house flies.

Functional Characterization of Carboxylesterases in Insecticide Resistant House Flies, Musca Domestica

Here, we present a protocol to produce house fly carboxylesterase proteins in vitro with a baculovirus mediated insect cell expression system and later functionally characterize their roles in metabolizing permethrin, thereby, conferring pyrethroid resistance by conducting cell-based MTT assay and in vitro metabolic studies.

אפיון פונקציונלי Carboxylesterases הבית בקוטלי חרקים עמידים בזבובים, דומסטיקה זבוב

Carboxylesterase-mediated metabolism is thought to play a major role in insecticide resistance in various insects. Several carboxylesterase genes were ...

Biochemistry

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant viruses they vector. Despite numerous studies of the biology of these species in different environments, a key life history parameter, offspring sex ratios, has received little attention, yet is important for predicting population dynamics. The primary sex ratio (sex ratio at oviposition) of Bemisia tabaci has never been reported but can be found by determining the egg fertilization rate of this haplodiploid insect. The technique involves the dechorionation of eggs with bleach, a series of fixation steps, and the application of the general DNA fluorescent stain, DAPI (4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole, a DNA-binding fluorescent dye), to bind to female and male pronuclei. Here, we present the technique, and an example of its application, to test whether an endosymbiotic bacterium, Rickettsia sp. nr. bellii, influenced the primary sex ratio of B. tabaci. This method may assist in population studies of whiteflies, or in determining if sex allocation exists with certain environmental stimuli.

Determining the Egg Fertilization Rate of Bemisia tabaci Using a Cytogenetic Technique

We present a simple cytogenetic technique using 4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) to determine the fertilization rate and primary sex ratio of the haplodiploid invasive pest Bemisia tabaci.

קביעת שיעור הפריה הביצית של כנימת עש הטבק בטכניקה Cytogenetic

A few species of sap-sucking whiteflies are some of the most damaging terrestrial pests worldwide because of the crop damage they inflict and plant ...

Genetics

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these insecticides against adult insects or their impact on reproductive output. However, currently available methods assess adult mortality only, limiting the selection of novel insecticides with a different mode of action. In this work, different experimental methods were examined to identify the diverse effects on the CBB under laboratory conditions. For this, green coffee fruits (GFs) were collected and disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution followed by UV light irradiation. In parallel, CBB adults from a colony were disinfected by immersion in sodium hypochlorite solution. To assess fruit protection (preinfestation), the fruits were placed in plastic boxes, and the insecticides were applied. Then, the CBB adults were released at a rate of two CBBs per GF. The GFs were left under controlled conditions to evaluate CBB infestation and survival after 1, 7, 15, and 21 days. To evaluate insecticide efficacy after CBB infestation (postinfestation), CBB adults were released to the GFs in a 2:1 ratio for 3 h at 21 &#176;C. Infested fruits showing CBB adults with their abdomens partially exposed were selected and placed in 96-well racks, and the CBBs boring into the fruits were treated directly. After 20 days, the fruits were dissected, and the CBB biological stages inside each fruit were recorded. The GFs served as substrates that mimic natural conditions to evaluate toxic, chemical, and biological insecticides against the CBB.

Methodology to Test Control Agents and Insecticides Against the Coffee Berry Borer Hypothenemus hampei

A method using green coffee fruits (GFs) was developed to test the toxicity of insecticides against the coffee berry borer (CBB). Insecticides or toxic substances were applied to disinfected GFs before or after CBB infestation. Insect mortality, repellency, and reproductive capacity, in addition to other parameters, were evaluated.

מתודולוגיה לבדיקת סוכני בקרה וקוטלי חרקים כנגד היפותנאמוס של ברי ברי הקפה

Prior to recommending insecticides to treat the coffee berry borer (CBB) Hypothenemus hampei, it is valuable to know the mortality and repellency of these ...

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

Bioassays עבור ההתנגדות הדברה ניטור

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

Biology

Using Single Sensillum Recording to Detect Olfactory Neuron Responses of Bed Bugs to Semiochemicals

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house single or multiple neurons inside, are considered to make the major contribution in responding to the chemical stimuli. By directly recording action potential in the olfactory sensillum after exposure to stimuli, single sensillum recording (SSR) technique provides a powerful approach for investigating the neural responses of insects to chemical stimuli. For the bed bug, which is a notorious human parasite, multiple types of olfactory sensillum have been characterized. In this study, we demonstrated neural responses of bed bug olfactory sensilla to two chemical stimuli and the dose-dependent responses to one of them using the SSR method. This approach enables researchers to conduct early screening for individual chemical stimuli on the bed bug olfactory sensilla, which would provide valuable information for the development of new bed bug attractants or repellents and benefits the bed bug control efforts.

Bed bugs rely on olfactory receptor neurons housed in their antennal olfactory sensilla to detect semiochemicals in the environment. Utilizing single sensillum recording, we demonstrate a method to evaluate bed bug response to semiochemicals and explore the coding process involved.

שימוש יחיד Sensillum הקלטה לזיהוי תגובות חוש הריח Neuron של באגס במיטה לSemiochemicals

The insect olfactory system plays an important role in detecting semiochemicals in the environment. In particular, the antennal sensilla which house ...

Neuroscience

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such as Zika, dengue and malaria. Assays for rapid, high-throughput analyses of unformulated novel chemistries against mosquito larvae and adults are presented. We describe protocols for single point-dose and dose response assays to evaluate the toxicity of small molecule chemistries to the Aedes aegypti vector of Zika, dengue and yellow fever,&#160;the malaria vector, Anopheles gambiae and the northern house mosquito, Culex quinquefasciatus, on contact and via ingestion. As an example, we evaluated the toxicity of amitriptyline, a small molecule antagonist of G protein-coupled receptors, via larval, adult topical and adult blood-feeding assay. The protocols provide a starting point to investigate insecticide potential. Results are discussed in the context of additional experiments to explore product applications and mechanisms for delivery.

Protocols are described for assessing the toxicity of chemistries to immature and adult mosquitoes for development as new classes of larvicides, adulticides and endectocides. The protocols enable high-throughput testing of multiple chemistries at single-point dose and subsequent evaluation via dose response assay to determine toxicity on contact or via ingestion.

פרוטוקולים לבדיקת הרעילות של הרומן בדיקות, חרקים הביוכימיה על היתושים

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Topical Application Bioassay to Quantify Insecticide Toxicity for Mosquitoes and Fruit Flies

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. Insecticide resistance surveillance of mosquito populations is typically done through Centers for Disease Control and Prevention (CDC) bottle bioassays or World Health Organization (WHO) tube tests. However, these methods can result in a high degree of variability in mortality data due to variable insecticide contact with&#160;the insect, the relatively small numbers of organisms tested, extensive variation in mass between populations, and constantly changing environmental conditions, leading to variable outcomes. This paper presents the topical application bioassay, adapted as a high-throughput phenotypic bioassay for both mosquitoes and fruit flies, to test large numbers of insects along&#160;a range of insecticide concentrations.
This assay 1) ensures consistent treatment and insecticide contact with every organism, 2) produces highly specific dose-response curves that account for differences in average mass between strains and sexes (which is particularly important for field-collected organisms), and 3) allows for the calculation of statistically rigorous median lethal doses (LD50), which are necessary for resistance ratio comparisons-an alternative surveillance approach from diagnostic dose mortality, which is also used for larvicide resistance surveillance. This assay will be a complementary tool for accurately phenotyping mosquito populations and, as illustrated using fruit flies, is easily adaptable for use with other insects. We argue that this assay will help fill the gap between genotypic and phenotypic insecticide resistance in multiple insect species.

We describe the methodology and importance of the topical application bioassay to measure insecticide susceptibility in mosquitoes and fruit flies. The presented assay is high-throughput, utilizes insect mass-thus allowing for calculating a mass-relativized lethal dose instead of concentration-and likely has lower variability than other similar methods.

יישום אקטואלי Bioassay כדי לכמת רעילות קוטל חרקים עבור יתושים וזבובי פירות

The continued use of insecticides for public health and agriculture has led to widespread insecticide resistance and hampering of control methods. ...

הערכת השפעות פיטוכימיות על Helicoverpa armigera באמצעות בדיקת האכלה

Developing a Feeding Assay System for Evaluating the Insecticidal Effect of Phytochemicals on Helicoverpa armigera

Helicoverpa armigera, a lepidopteran insect, is a polyphagous pest with a worldwide distribution. This herbivorous insect is a threat to plants and agricultural productivity. In response, plants produce several phytochemicals that negatively impact the insect's growth and survival. This protocol demonstrates an obligate feeding assay method to evaluate the effect of a phytochemical (quercetin) on insect growth, development, and survival. Under controlled conditions, the neonates were maintained until the second instar on a pre-defined artificial diet. These second-instar larvae were allowed to feed on a control and quercetin-containing artificial diet for 10 days. The insects' body weight, developmental stage, frass weight, and mortality were recorded on alternate days. The change in body weight, the difference in feeding pattern, and developmental phenotypes were evaluated throughout the assay time. The described obligatory feeding assay simulates a natural mode of ingestion and can be scaled up to a large number of insects. It permits one to analyze phytochemicals' effect on the growth dynamics, developmental transition, and overall fitness of H. armigera. Furthermore, this setup can also be utilized to evaluate alterations in nutritional parameters and digestive physiology processes. This article provides a detailed methodology for feeding assay systems, which may have applications in toxicological studies, insecticidal molecule screening, and understanding chemical effects in plant-insect interactions.

מחבר זרקור: התפתחות ואתגרים של בדיקות האכלה להדברת חרקים 

This protocol describes the obligate feeding assay to evaluate the potentially toxic effect of a phytochemical on the lepidopteran insect larvae. This is a highly scalable insect bioassay, easy to optimize the sublethal and lethal dose, deterrent activity, and physiological effect. This could be used for screening eco-friendly insecticides.

פיתוח מערכת בדיקת האכלה להערכת ההשפעה קוטלת החרקים של פיטוכימיקלים על Helicoverpa armigera

Helicoverpa armigera, a lepidopteran insect, is a polyphagous pest with a worldwide distribution. This herbivorous insect is a threat to plants and ...

שיטה להערכת יעילות הדברה נגד פשפש מיטה,

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

מתודולוגיית פיתוח טבלאות החיים עבור חרקים Sessile בשימוש השדה כנימת עש הטבק, כנימת עש הטבק, כותנה כמו מערכת מודל

אפיון פונקציונלי Carboxylesterases הבית בקוטלי חרקים עמידים בזבובים, דומסטיקה זבוב

קביעת שיעור הפריה הביצית של כנימת עש הטבק בטכניקה Cytogenetic

מתודולוגיה לבדיקת סוכני בקרה וקוטלי חרקים כנגד היפותנאמוס של ברי ברי הקפה

Bioassays עבור ההתנגדות הדברה ניטור

שימוש יחיד Sensillum הקלטה לזיהוי תגובות חוש הריח Neuron של באגס במיטה לSemiochemicals

פרוטוקולים לבדיקת הרעילות של הרומן בדיקות, חרקים הביוכימיה על היתושים

יישום אקטואלי Bioassay כדי לכמת רעילות קוטל חרקים עבור יתושים וזבובי פירות

פיתוח מערכת בדיקת האכלה להערכת ההשפעה קוטלת החרקים של פיטוכימיקלים על Helicoverpa armigera

פיתוח מערכת בדיקת האכלה להערכת ההשפעה קוטלת החרקים של פיטוכימיקלים על Helicoverpa armigera