עבודה זו נתמכה על ידי מענקים פקין האיגוד הרפואי המכללה נוער הקרן וקרנות מחקר בסיסי עבור האוניברסיטאות סנטרל (מענק מס 3332015200).

ניסויים בבעלי חיים כל בוצעו בהתאם כל ההנחיות הרלוונטיות, תקנות, וגופים רגולטוריים. בפרוטוקול הנוכחי להיות הפגינו בוצעה תחת הדרכה ואישור של המכון של מנתחי מיקרו חיה אתיקה הוועדה (IMAEC)-המכללה הרפואית האיגוד פקין (PUMC).
1. בעלי חיים
<ol><li>לפני תחילת הניסוי, לשמור על שלושה עכברים BALB/c לכל כלוב, עם טמפרטורה מבוקרת (24 ± 1 ° C) ולחות (55 ± 5%), תחת מחזור בהירה-כהה 12-h. לאפשר העכברים גישה חופשית מקבלים מזון ומים.</li>
	<li>לחלק באופן אקראי העכברים קבוצת ביקורת שאינו חולה סוכרת וקבוצת סוכרתית. במדויק שוקל כל עכבר בודדות ולחשב האחסון הזרקת באמצעות את מסת הגוף של כל עכבר.</li>
	<li>מהר העכברים במשך 4 שעות לפני הזרקת streptozotocin (STZ) ומספקים מים רגילים כרגיל ביום ניסיוני 1.</li>
	<li>להכין מאגר סודיום ציטרט 0.1 M ב- pH 4.3. לשים 1 מ"ל של הפתרון לתוך צינור 1.5-mL microcentrifuge, לעטוף את הצינור microcentrifuge בנייר אלומיניום, כדי למנוע חשיפה קלה.</li>
	<li>להמיס את STZ במאגר סודיום ציטרט (pH 4.3) כדי ריכוז העבודה הסופית של 5 מ"ג/מ"ל לפני השימוש.</li>
	<li>תן העכברים של קבוצה סוכרתית בקרום הבטן זריקות של STZ במינון של 40 מ"ג/ק"ג באמצעות מזרק 1-mL ומחט 25-G. מזריקים העכברים של הפקד שאינו חולה סוכרת באותו אמצעי אחסון של סודיום ציטרט מאגר (pH 4.3).</li>
	<li>תחזיר את העכברים הכלובים, לספק להם מזון רגיל ו- 10% סוכרוז מים.</li>
	<li>חזור על שלבים 1.3-1.7 בימים ניסיוני 2-5 (קרי, בארבע ימים רצופים).</li>
	<li>להחליף את המים 10% סוכרוז במים רגילים לאחר הזריקה STZ האחרון.</li>
	<li>מהר העכברים במשך 6 שעות, אבל לתת להם גישה חופשית למים, למדוד את רמות הגלוקוז בדם תשעה ימים מאוחר יותר (ניסיוני יום 14). לאסוף דגימת דם וריד הזנב לאשר היפרגליקמיה באמצעות מערכת ניטור של גלוקוז בדם. הערה: עכברים עם רמות גלוקוז בדם > 200 מ"ג / ד"ל נחשבים סוכרתית.</li>
</ol>2. הכנת המכשיר
<ol><li>ניקוי משטחים אופטיים של קצה המקדח ולמחבר בדיקה של המנגנון דופלר לייזר עם מטלית רכה, שאינם שוחקים להסיר אבק או חלקיקים כלשהם. חבר את הכבל היציאה של המכשיר (איור 1 א').</li>
	<li>להרכיב הדוכן כיול בכך שהוא מאפשר השטף רגיל להיות בשיווי משקל תרמי עם הסביבה ניסיוני (טמפרטורת החדר, בדרך כלל למשך 30 דקות). לנער את השטף הרגיל בעדינות עבור 10 s ולתת לנוח למשך 2 דקות.</li>
	<li>הצב המכולה סטנדרטי השטף באמצע הבסיס בכיול. התאם את המלחציים עד לגובה המרבי ולאבטח את המכשיר המלחציים כזה הוא מצביע כלפי מטה אל המיכל. ודא שתקן השטף ימוקם בצורה נכונה מתחת החללית.</li>
	<li>לאט הניעו את החללית עד הקצה שקוע כראוי את רמת השטף. בחר, הקש "כיול" על לייזר מכשיר דופלר ובחרו את הערוץ עובד המכשיר מחובר אליו. הפעל את התוכנית כיול עד הודעה "בהצלחה כיול" מוצג על המסך של לייזר מכשיר דופלר.</li>
	<li>אבטח את המכשיר באמצעות בדיקה מחזיקי. באופן ידני לאבטח את המכשיר כדי למנוע תנועה.</li>
	<li>לשמור על ניסיוני החדר בטמפרטורה קבועה (24 ± 1 ° C), לחות (~ 50-60%).</li>
	<li>לבטל את כל האור חיצוניים (כגון מנורות פלורסנט, ספוט) לפני ביצוע הניסוי כדי למנוע שינוי הנוצרות על-ידי אור חיצוני.</li>
</ol>3. הכנה של חיות
<ol><li>אוטוקלב כירורגי כלים ולאפשר להם להתקרר לטמפרטורת החדר לפני השימוש.</li>
	<li>תן העכברים 10 דקות כדי להתרגל לסביבה ניסיוני לפני גילוי הלבלב איון vasomotion microvascular על ידי לייזר דופלר.</li>
	<li>ממלאים מזרק 1-mL 1 מ"ל של סודיום פנטוברביטל 3%. להזריק הפתרון סודיום פנטוברביטל (i.p. 75 מ"ג/ק"ג) כדי עזים ומתנגד העכברים.</li>
	<li>מכסים את העיניים של העכבר עם גזה רפואיות בטעימת מראש כדי למנוע יובש.</li>
	<li>ודא העכבר לגמרי מאבד את הכרתו, כבר לא מגיב הזנב או hindfoot צובט עם מלקחיים. לפקח על ההרדמה לאורך כל האירוע הרדמה אינטרה-פעיל בכל 15 דקות לשמור על ההרדמה להשלים עם 10% נפח הזרקה הראשונית של הפתרון פנטוברביטל בעת הצורך.</li>
	<li>מקם כרית החימום עם חצי בידוד שכבה מתחת החיה במקום החיה במצב פרקדן, להעביר אותו לתחנת העבודה של הלייזר מכשיר דופלר. לתקן את העכבר פלטפורמת עבודה עם הדבקה.</li>
	<li>ספוגית בעור בטן של העכבר עם betadine ולאחר מכן 75% אתנול משמשת כדי לנגב את האזור בטן נקי.</li>
	<li>להזריק 2% lidocaine/0.5% נמשך תערובת (חצי) subcutaneously.  חותכים ס מ ~ 3-קוטר חור במרכז ספוג גזה. לכסות את אזור הבטן עם ספוג גזה.</li>
	<li>הרם בעור בטן עם מלקחיים, אעשה חתך אנכי הראשונית לאורך הקו האמצעי של הבטן בעזרת מספריים אזמל או עור.</li>
	<li>לתפוס את השריר שמתחת עם מלקחיים, פצעים וחתכים כדי להזין את חלל הבטן. שלא פוגעים בכל האיברים. מקפלים את העור והשרירים כבסיס החזה כדי לחשוף את חלל הבטן. בעדינות לחשוף בגוף הלבלב והטחול באמצעות זוג מלקחיים חרטום בלאנט.</li>
</ol>4. קירור והקפאה לניתוח
<ol><li>להפעיל את התוכנה על מנגנוני דופלר לייזר על ידי לחיצה על "קובץ" ← "חדש" כדי ליצור קובץ חדש מדידה. כדי לקבוע את תצורת המסכים מחוברים, תחת הלשונית "כללי", הגדרת משך הזמן פיקוח להפעלה "ללא תשלום." השתמש בברירת המחדל עבור הכרטיסיה "LDF מוניטור" לחץ על "הבא".</li>
	<li>להגדיר את תצוגת גרף ב- "הצגת תיבת הדו-שיח הגדרת." בחר את הערוצים "שטף, ריכוז או משחק, מהירות" על-ידי בדיקת בתיבות המתאימות. בחר את הפרמטרים הבאים: "מקור נתונים עבור הערוץ" ו "תווית, יחידות וצבע." לחץ על "הבא".</li>
	<li>הזן פרטי המשתמש על הנושא ועל מדידה (קרי, שם הנושא מספר, מרכזיה, פיקוח על הזמן, הערות, וכו ') "קובץ מידע בתיבת הדו-שיח" ולחץ "הבא" כדי לסיים את תצורת מדידה. הערה: חלון מדידה נוצר באופן אוטומטי על-ידי התוכנה (איור 1B).</li>
	<li>באופן ידני עולה האלקטרודה הלבלב. ודא כי המרחק בין הרקמות החללית ואת הלבלב נמצא במרחק 1 מ מ. מרחק לא ראוי נותן קריאת זרימת דם מוגברת באופן מלאכותי או ירידה.</li>
	<li>לחץ על סמל סרגל הכלים "התחל" כדי להתחיל להקליט את הנתונים יחידות (פו) microvascular הדם זלוף. לאסוף הנתונים PU ברציפות עבור 1 דקות בכל הפעלה. לחץ על "עצור" כדי לעצור את המדידה. בחר "קובץ" ← "שמירה בשם" שם ולשמור את הקובץ מדידה המוגמר.</li>
	<li>ידנית מיקום המכשיר לאחר כל הפעלה כדי למנוע תופעות מוספים ותשישות המותאמות לשפות אחרות של כויץ ויכולת הרפיה. חזור על שלבים 4.1-4.4 לקצור multi-point (קרי, שלוש נקודות שנבחרו באקראי מתוך רקמת הלבלב) microvascular פו נתונים עבור כל עכבר. למדוד את הנתונים פו של צלחת נטול השתקפות כפקד בסיסית.</li>
	<li>סגור את השכבה שריר הבטן, לשכבת העור בתפר. הנח את החיות בכלובים נקי לאחר הניסויים.</li>
	<li>לחמם בעלי חיים על ידי הצבת בכלובי ההתאוששות חצי-על כרית החימום. הערה: שימו לב חמימות, היגיינה, נוזל, צריכת המזון של זיהום. לנהל עכברים עם 2 מ"ג/ק"ג של Carprofen במשך 48 שעות כמו ניהול כאב לאחר הניתוח.  לבצע המתת חסד על ידי הזרקת סודיום פנטוברביטל 150 מ"ג/ק"ג i.p. כאשר עכברים שנצפו להיות במצב של מצוקה זה לא יכול להיות הביאו להקלה או כאב חמור.</li>
</ol>5. חישוב הפרמטרים של Microvascular Vasomotion
<ol><li>השתמש בפקודה "ייצוא" לייזר תוכנה דופלר כדי לייצא את הנתונים הגולמיים PU והזמן כקובץ ה"בסיס ופתח את הקובץ בתוך גיליון אלקטרוני.</li>
	<li>לחשב יחידת זלוף בסיסית הממוצע (PUb) (ראה שלב 4.6).</li>
	<li>לחשב את ממוצע הדם זלוף (פו) עבור 1 דקות של מדידה כדלקמן: ממוצע הדם זלוף (PU) = פו - פוb (משוואה 1).</li>
	<li>לחשב את התדר (מחזורים/דקה) עבור כל 1 דקות המדידה. הערה: התדירות של microvascular vasomotion מוגדר כמספר הפסגות שהתרחשו בגל microvascular vasomotion לדקה.</li>
	<li>לחשב את משרעת (ΔPU) עבור כל 1 דקות המדידה.<ol>
<li>לחשב את משרעת של microvascular vasomotion כהפרש בין מקסימום (PUמקסימום) מינימום (PUmin): משרעת (ΔPU) = פומקסימום - PUmin (משוואה 2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>לחשב את המהירות (פו) עבור כל 1 דקות המדידה.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Aalkjaer, C., Nilsson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasomotion:+cellular+background+for+the+oscillator+and+for+the+synchronization+of+smooth+muscle+cells.">Vasomotion: cellular background for the oscillator and for the synchronization of smooth muscle cells.</a> Br J Pharmacol. 144 (5), 605-616 (2005).</li><li>Serne, E. H., de Jongh, R. T., Eringa, E. C., IJzerman, R. G., Stehouwer, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+dysfunction:+a+potential+pathophysiological+role+in+the+metabolic+syndrome.">Microvascular dysfunction: a potential pathophysiological role in the metabolic syndrome.</a> Hypertension. 50 (1), 204-211 (2007).</li><li>Carmines, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+renal+microvascular+dysfunction+in+type+1+diabetes:+potential+contribution+to+end+organ+damage.">Mechanisms of renal microvascular dysfunction in type 1 diabetes: potential contribution to end organ damage.</a> Curr Vasc Pharmacol. 12 (6), 781-787 (2014).</li><li>Holowatz, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cutaneous+microvascular+ageing:+potential+insights+into+underlying+physiological+mechanisms+of+endothelial+function+and+dysfunction.">Human cutaneous microvascular ageing: potential insights into underlying physiological mechanisms of endothelial function and dysfunction.</a> J Physiol. 586 (14), 3301 (2008).</li><li>De Boer, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+dysfunction:+a+potential+mechanism+in+the+pathogenesis+of+obesity-associated+insulin+resistance+and+hypertension.">Microvascular dysfunction: a potential mechanism in the pathogenesis of obesity-associated insulin resistance and hypertension.</a> Microcirculation. 19 (1), 5-18 (2012).</li><li>Nilsson, G. E., Tenland, T., Oberg, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+laser+Doppler+flowmeter+for+measurement+of+tissue+blood+flow.">Evaluation of a laser Doppler flowmeter for measurement of tissue blood flow.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 27 (10), 597-604 (1980).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+the+blood+perfusion+values+determined+by+laser+speckle+imaging+and+laser+Doppler+imaging+in+normal+skin+and+port+wine+stains.">Relationship between the blood perfusion values determined by laser speckle imaging and laser Doppler imaging in normal skin and port wine stains.</a> Photodiagnosis Photodyn Ther. 13 (1), 1-9 (2016).</li><li>Fuchs, D., Dupon, P. P., Schaap, L. A., Draijer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+between+diabetes+and+dermal+microvascular+dysfunction+non-invasively+assessed+by+laser+Doppler+with+local+thermal+hyperemia:+a+systematic+review+with+meta-analysis.">The association between diabetes and dermal microvascular dysfunction non-invasively assessed by laser Doppler with local thermal hyperemia: a systematic review with meta-analysis.</a> Cardiovasc Diabetol. 16 (1), 11-22 (2017).</li><li>Yaginuma, N., Takahashi, T., Saito, K., Kyoguku, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microvasculature+of+the+human+pancreas+and+its+relation+to+Langerhans+islets+and+lobules.">The microvasculature of the human pancreas and its relation to Langerhans islets and lobules.</a> Pathol Res Pract. 181 (1), 77-84 (1986).</li><li>Brissova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+microenvironment,+modulated+by+vascular+endothelial+growth+factor-A+signaling,+promotes+beta+cell+regeneration.">Islet microenvironment, modulated by vascular endothelial growth factor-A signaling, promotes beta cell regeneration.</a> Cell Metab. 19 (3), 498-511 (2014).</li><li>de Moraes, R., Van Bavel, D., Gomes Mde, B., Tibirica, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+non-supervised+low+intensity+aerobic+excise+training+on+the+microvascular+endothelial+function+of+patients+with+type+1+diabetes:+a+non-pharmacological+interventional+study.">Effects of non-supervised low intensity aerobic excise training on the microvascular endothelial function of patients with type 1 diabetes: a non-pharmacological interventional study.</a> BMC Cardiovasc Disord. 16 (1), 23-31 (2016).</li><li>Humeau-Heurtier, A., Guerreschi, E., Abraham, P., Mahe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relevance+of+laser+Doppler+and+laser+speckle+techniques+for+assessing+vascular+function:+state+of+the+art+and+future+trends.">Relevance of laser Doppler and laser speckle techniques for assessing vascular function: state of the art and future trends.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 60 (3), 659-666 (2013).</li><li>Park, H. S., Yun, H. M., Jung, I. M., Lee, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Laser+Doppler+for+the+Evaluation+of+Pedal+Microcirculatory+Function+in+Diabetic+Neuropathy+Patients.">Role of Laser Doppler for the Evaluation of Pedal Microcirculatory Function in Diabetic Neuropathy Patients.</a> Microcirculation. 23 (1), 44-52 (2016).</li><li>Sun, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculatory+vasomotor+changes+are+associated+with+severity+of+peripheral+neuropathy+in+patients+with+type+2+diabetes.">Microcirculatory vasomotor changes are associated with severity of peripheral neuropathy in patients with type 2 diabetes.</a> Diab Vasc Dis Res. 10 (3), 270-276 (2013).</li><li>Pan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+PEMF+on+microcirculation+and+angiogenesis+in+a+model+of+acute+hindlimb+ischemia+in+diabetic+rats.">Effects of PEMF on microcirculation and angiogenesis in a model of acute hindlimb ischemia in diabetic rats.</a> Bioelectromagnetics. 34 (3), 180-188 (2013).</li><li>Jumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Signs+of+End-Organ+Damage+in+Retinal+Arterioles+in+Patients+with+Type+2+Diabetes+Compared+to+Hypertensive+Patients.">Early Signs of End-Organ Damage in Retinal Arterioles in Patients with Type 2 Diabetes Compared to Hypertensive Patients.</a> Microcirculation. 23 (6), 447-455 (2016).</li><li>Nguyen, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+blood+flow+is+increased+in+type+1+diabetes+mellitus+patients+with+advanced+stages+of+retinopathy.">Retinal blood flow is increased in type 1 diabetes mellitus patients with advanced stages of retinopathy.</a> BMC Endocr Disord. 16 (1), 25-33 (2016).</li><li>Forst, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Microcirculation+in+Type+1+Diabetic+Patients+With+and+Without+Peripheral+Sensory+Neuropathy.">Retinal Microcirculation in Type 1 Diabetic Patients With and Without Peripheral Sensory Neuropathy.</a> J Diabetes Sci Technol. 8 (2), 356-361 (2014).</li><li>Hu, H. F., Hsiu, H., Sung, C. J., Lee, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+laser-Doppler+flowmetry+measurements+with+spectral+analysis+to+study+different+microcirculatory+effects+in+human+prediabetic+and+diabetic+subjects.">Combining laser-Doppler flowmetry measurements with spectral analysis to study different microcirculatory effects in human prediabetic and diabetic subjects.</a> Lasers Med Sci. 31 (1), 1-8 (2016).</li><li>Klonizakis, M., Manning, G., Lingam, K., Donnelly, R., Yeung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+diabetes+on+the+cutaneous+microcirculation+of+the+feet+in+patients+with+intermittent+claudication.">Effect of diabetes on the cutaneous microcirculation of the feet in patients with intermittent claudication.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 61 (3), 439-444 (2015).</li><li>Khazraei, H., Shafa, M., Mirkhani, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ranolazine+on+cardiac+microcirculation+in+normal+and+diabetic+rats.">Effect of ranolazine on cardiac microcirculation in normal and diabetic rats.</a> Acta Physiol Hung. 101 (3), 301-308 (2014).</li><li>Fujita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+inner+ear+susceptibility+to+noise+injury+in+mice+with+streptozotocin-induced+diabetes.">Increased inner ear susceptibility to noise injury in mice with streptozotocin-induced diabetes.</a> Diabetes. 61 (11), 2980-2986 (2012).</li><li>Wiernsperger, N., Nivoit, P., De Aguiar, L. G., Bouskela, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcirculation+and+the+metabolic+syndrome.">Microcirculation and the metabolic syndrome.</a> Microcirculation. 14 (4-5), 403-438 (2007).</li><li>Chawla, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+content,+tone,+integrity,+and+haemodynamics+for+guiding+fluid+therapy:+a+conceptual+approach.">Vascular content, tone, integrity, and haemodynamics for guiding fluid therapy: a conceptual approach.</a> Br J Anaesth. 113 (5), 748-755 (2014).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

במקרים המערבות microvascular לקוי (למשל, סוכרת, דלקת לבלב חריפה, מחלות microvascular היקפיים, וכו '.), כמה מחלות להוביל זרימת דם מופחתת. מלבד שינויים בזרימת הדם, ישנם אינדיקטורים חשובים, כגון microvascular vasomotion, במראה למעמד הפונקציונאלי של מנתחי מיקרו. מחוון ספציפי, microvascular vasomotion, מוגדר בדרך כלל תנודה ...

כפרמטר של מצב תפקודי microcirculation, microvascular vasomotion לוקח אחריות עבור משלוח ו- exchange של חמצן, חומרים מזינים, הורמונים, חיוני כדי הסרת מוצרים מטבולית, כגון פחמן דו-חמצני ופסולת תאים 1. microvascular vasomotion גם מסדיר הפצה זרימת הדם זלוף רקמות, ובכך להשפיע על לחץ דם microcirculatory המקומי ואת התגובות דלקת, אשר יכול לגרום לבצקת למחלות רבות. לכן, microvascular vasomotion חשוב מאוד לשמור על הפונקציה פיזיולוגיים של איברים2,3,4, רקמות ותאים רכיב. ירידת ערך של microvascular vasomotion עשוי להיות אחד הצעדים מפתח בהתפתחות של מחלות הקשורות microcirculation5.
לייזר דופלר פותחה בתחילה עבור כימות בשדה המחקר microcirculation6ופיקוח. טכניקה זו, יחד עם גישות טכניות אחרות (למשל, לייזר חודרני7, transcutaneous חמצן, וכו '.), יש נחשב תקן הזהב עבור הערכת זרימת הדם microcirculation. הרציונל לכך הדם זלוף של microcirculation המקומי (קרי, נימים, רבים, venules, וכו ') יכול להיקבע על ידי המנגנון מצויד עם לייזר דופלר, מבוססת על עיקרון דופלר. אורך הגל והתדירות של פליטה מאולצת אור להשתנות בעת תזוזה מפגש מרגש כדוריות הדם microvessels, או שהם נותרים ללא שינוי. לכן, ב microcirculation, את המספר ואת המהירות של כדוריות הדם הם הגורמים העיקריים הנוגעים הגודל ואת התפלגות השכיחויות של האור דופלר-העביר, בעוד הכיוון של זרימת הדם microvascular הוא לא רלוונטי. באמצעות שיטות שונות, מגוון רחב של רקמות שימשו ללימודים microcirculatory, כולל את mesenteries ואת הגבי צ'יימברס skinfold של עכברים, חולדות, אוגרים, ואפילו בני8. עם זאת, בפרוטוקול הנוכחי, אנו מתמקדים פונקציונליות המצב של הלבלב איון microvascular vasomotion, אשר מוערך באמצעות לייזר דופלר ומערכת פרמטר הערכה תוצרת בית.
הלבלב איון microcirculation מורכב בעיקר הלבלב איון microvessels ותערוכות תכונות ייחודיות. רשת הנימים הלבלב איון מראה צפיפות חמש-פעמים-גבוהה יותר מאשר לרשת הנימים של עמיתו אקסוקרינית שלה9. מתן כצינור להעברת קלט גלוקוז, אינסולין להפיץ, תאי אנדותל איון לספק חמצן לתאים פעילים סמויה איון תאי β. יתר על כן, המתעוררים ראיות גם מדגים כי איון microvessels מעורבים בוויסות ביטוי גנים אינסולין והישרדות β-תא אלא גם ב המשפיעים על תפקוד תאי β; מקדם התפשטות β-תא; והפקת מספר vasoactive, האנגיוגנזה חומרים ו פקטורי גדילה10. לכן, מבחינה זו, אנו מבינים כי למעמד הפונקציונאלי של הלבלב איון vasomotion microvascular עלול להשפיע על תפקוד תאי β איון, להיות מעורבים בפתוגנזה של מחלות כגון דלקת לבלב חריפה/כרונית, סוכרת, ועוד מחלות הקשורות הלבלב.
ניתוח השינויים הפתולוגיים למעמד הפונקציונאלי של הלבלב איון vasomotion microvascular יכול להיות אסטרטגיה אפשרית כדי לקבוע התרומות של microcirculation הלבלב איון כדי המחלות שהוזכרו לעיל. הליך שלב אחר שלב מפורט המתאר את הגישה לקבוע הלבלב איון microvascular vasomotion ויוו מספקים כאן. מדידות טיפוסי מוצגים ואז נציג תוצאות. לבסוף, יתרונותיה וחסרונותיה של השיטה מודגשים דיון, יחד עם עוד יישומים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MoorVMS-LDF2</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>GI80</td>
			<td>PeriFlux 5000 (Perimed Inc.) can be used as an alternative apparatus to harvest data</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoorVMS-PC Software</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>GI80-1</td>
			<td>Software of MoorVMS-LDF2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration stand</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>GI-cal</td>
			<td>Calibration tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration base</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>GI-cal</td>
			<td>Calibration tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibration flux standard</td>
			<td>Moor Instruments</td>
			<td>GI-cal</td>
			<td>Calibration tool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Touch UltraEasy glucometer</td>
			<td>Johnson and Johnson</td>
			<td>#1955685</td>
			<td>Confirm hyperglycemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Touch UltraEasy strips</td>
			<td>Johnson and Johnson</td>
			<td>#1297006</td>
			<td>Confirm hyperglycemia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozotocin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0130</td>
			<td>Dissolve in sodium citrate buffer (pH 4.3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3761</td>
			<td>Working concentration 3 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Inc.</td>
			<td>200121</td>
			<td>Working concentration 75 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>335</td>
			<td>Working concentration 10 %</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical gauze</td>
			<td>China Health Materials Co.</td>
			<td>S-7112</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt-nose forceps</td>
			<td>Shang Hai Surgical Instruments Inc.</td>
			<td>N-551</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tapes</td>
			<td>3M Company</td>
			<td>3664CU</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze sponge</td>
			<td>Fu Kang Sen Medical Device CO.</td>
			<td>BB5447</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Yu Lin Surgical Instruments Inc.</td>
			<td>175C</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin scissor</td>
			<td>Carent</td>
			<td>255-17</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Ning Bo Surgical Instruments Inc.</td>
			<td>3325-77</td>
			<td>Surgical</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe and 25-G needle</td>
			<td>MISAWA Inc.</td>
			<td>3731-2011</td>
			<td>Scale: 1 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laser doppler: a tool for measuring pancreatic islet microvascular vasomotion in vivo

כמו מצב תפקודי של מנתחי מיקרו, microvascular vasomotion חשוב המסירה של חמצן וחומרים מזינים והסרה של פחמן דו-חמצני וחומרי פסולת. ירידת ערך של microvascular vasomotion עשוי להיות צעד מכריע בהתפתחות של מחלות הקשורות microcirculation. בנוסף, הלבלב איון vascularized מאוד הוא מותאם כדי לתמוך תפקוד המערכת האנדוקרינית. במובן זה, זה נראה אפשרי להסיק כי למעמד הפונקציונאלי של הלבלב איון vasomotion microvascular עלול להשפיע על תפקוד הלבלב איון. ניתוח השינויים הפתולוגיים למעמד הפונקציונאלי של הלבלב איון vasomotion microvascular יכול להיות אסטרטגיה אפשרית כדי לקבוע תרומות microcirculation הלבלב איון זה גורם למחלות הקשורות, כמו סוכרת, דלקת לבלב, וכו '. לכן, פרוטוקול זה מתאר באמצעות צג זרימת דם דופלר לייזר כדי לקבוע את מצב תפקודי של הלבלב איון vasomotion microvascular, ולהקים פרמטרים (כולל ממוצע הדם זלוף, משרעת, תדירות יחסית מהירות של הלבלב איון vasomotion microvascular) להערכת מצב תפקודי microcirculatory. במודל של עכברים סוכרתיים הנוצרות על-ידי streptozotocin ', הבחנו מצב תפקודי לקוי של הלבלב איון vasomotion microvascular. לסיכום, גישה זו להערכת הלבלב איון microvascular vasomotion ויוו עלול לגלות מנגנונים הקשורים למחלות הלבלב איון.

תצלום של הלייזר מדידה microvascular vasomotion מכשיר דופלר מצויד דיודת לייזר חצי מנצח מוצג איור 1A. תוכנה ממשק המשתמש מוצג איור 1B. באמצעות השיטה הנ ל, הפרמטרים והמודינמיקה של הלבלב איון vasomotion microvascular אותרו גם שליטה שאינו חולה סוכרת וגם בעכברים סוכרתיי?...

Watch this Scientific Journal Video about Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo at JoVE.com

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

לייזר דופלר: כלי למדידת הלבלב איון Microvascular Vasomotion In Vivo

הלבלב איון vasomotion microvascular מווסת את איון דם הפצה ושומר את תפקוד תאי β איון פיזיולוגיים. פרוטוקול זה מתאר באמצעות צג דופלר לייזר כדי לקבוע למעמד הפונקציונאלי של הלבלב איון microvascular vasomotion ויוו וכדי להעריך את תרומתם של הלבלב איון microcirculation למחלות הקשורות הלבלב.

As a functional status of microcirculation, microvascular vasomotion is important for the delivery of oxygen and nutrients and the removal of carbon ...

laser-doppler-tool-for-measuring-pancreatic-islet-microvascular

Research

JoVE Journal

Medicine

Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

8.2K Views.  Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College. הלבלב איון vasomotion microvascular מווסת את איון דם הפצה ושומר את תפקוד תאי β איון פיזיולוגיים. פרוטוקול זה מתאר באמצעות צג דופלר לייזר כדי לקבוע למעמד הפונקציונאלי של הלבלב איון microvascular vasomotion ויוו וכדי להעריך את תרומתם של הלבלב איון microcirculation למחלות הקשורות הלבלב.

Video: Laser Doppler: A Tool for Measuring Pancreatic Islet Microvascular Vasomotion In Vivo

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected cells can be used for a variety of investigations, such as transcriptomic or proteomic studies, DNA assessment or chromosomal analysis 2,3. An especially challenging application of LMD is transcriptome analysis, which, due to the lability of RNA 4, can be particularly prominent when cells are dissected from tissues that are rich of RNases, such as the pancreas. A microdissection protocol that enables fast identification and collection of target cells is essential in this setting in order to shorten the tissue handling time and, consequently, to ensure RNA preservation. 
Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic beta cells from surgical specimens to be used for transcriptomic studies 5. Small pieces of pancreas of about 0.5-1 cm3 were cut from the healthy appearing margins of resected pancreas specimens, embedded in Tissue-Tek O.C.T. Compound, immediately frozen in chilled 2-Methylbutane, and stored at -80 &deg;C until sectioning. Forty serial sections of 10 &mu;m thickness were cut on a cryostat under a -20 &deg;C setting, transferred individually to glass slides, dried inside the cryostat for 1-2 min, and stored at -80 &deg;C. 
Immediately before the laser microdissection procedure, sections were fixed in ice cold, freshly prepared 70% ethanol for 30 sec, washed by 5-6 dips in ice cold DEPC-treated water, and dehydrated by two one-minute incubations in ice cold 100% ethanol followed by xylene (which is used for tissue dehydration) for 4 min; tissue sections were then air-dried afterwards for 3-5 min. Importantly, all steps, except the incubation in xylene, were performed using ice-cold reagents - a modification over a previously described protocol 6. utilization of ice cold reagents resulted in a pronounced increase of the intrinsic autofluorescence of beta cells, and facilitated their recognition. For microdissection, four sections were dehydrated each time: two were placed into a foil-wrapped 50 ml tube, to protect the tissue from moisture and bleaching; the remaining two were immediately microdissected. This procedure was performed using a PALM MicroBeam instrument (Zeiss) employing the Auto Laser Pressure Catapulting (AutoLPC) mode. The completion of beta cell/islet dissection from four cryosections required no longer than 40-60 min. Cells were collected into one AdhesiveCap and lysed with 10 &mu;l lysis buffer. Each single RNA specimen for transcriptomic analysis was obtained by combining 10 cell microdissected samples, followed by RNA extraction using the Pico Pure RNA Isolation Kit (Arcturus). This protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their rapid and accurate recognition and collection. Further improvement of this procedure could enable the dissection of phenotypically different beta cells, with possible implications for better understanding the changes associated with type 2 diabetes.

Laser microdissection is a technique that allows the recovery of selected cells from minute amounts of parenchyma. Here we describe a protocol for acquiring human pancreatic islets from surgical specimens to be used for transcriptomic studies. Our protocol improves the intrinsic autofluorescence of human beta cells, thus facilitating their collection.

פרוטוקול משופר עבור microdissection הליזר של איי לבלב אנושיים מדוגמאות כירורגים

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

צעדים לעצמיים ב<em&gt; Ex vivo</emניסוי כבד וכליה&gt; perfused בשר חזירים

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Fundus Photography as a Convenient Tool to Study Microvascular Responses to Cardiovascular Disease Risk Factors in Epidemiological Studies

The microcirculation consists of blood vessels with diameters less than 150 &#181;m. It makes up a large part of the circulatory system and plays an important role in maintaining cardiovascular health. The retina is a tissue that lines the interior of the eye and it is the only tissue that allows for a non-invasive analysis of the microvasculature. Nowadays, high-quality fundus images can be acquired using digital cameras. Retinal images can be collected in 5 min or less, even without dilatation of the pupils. This unobtrusive and fast procedure for visualizing the microcirculation is attractive to apply in epidemiological studies and to monitor cardiovascular health from early age up to old age.
Systemic diseases that affect the circulation can result in progressive morphological changes in the retinal vasculature. For example, changes in the vessel calibers of retinal arteries and veins have been associated with hypertension, atherosclerosis, and increased risk of stroke and myocardial infarction. The vessel widths are derived using image analysis software and the width of the six largest arteries and veins are summarized in the Central Retinal Arteriolar Equivalent (CRAE) and the Central Retinal Venular Equivalent (CRVE). The latter features have been shown useful to study the impact of modifiable lifestyle and environmental cardiovascular disease risk factors.
The procedures to acquire fundus images and the analysis steps to obtain CRAE and CRVE are described. Coefficients of variation of repeated measures of CRAE and CRVE are less than 2% and within-rater reliability is very high. Using a panel study, the rapid response of the retinal vessel calibers to short-term changes in particulate air pollution, a known risk factor for cardiovascular mortality and morbidity, is reported. In conclusion, retinal imaging is proposed as a convenient and instrumental tool for epidemiological studies to study microvascular responses to cardiovascular disease risk factors.

Retinal image analysis is an unobtrusive procedure for visualizing the microcirculation. The impact of cardiovascular disease risk factors can result in changes of retinal vessel calibers. The procedures to acquire fundus images and the steps for calculating the vessel calibers are described.

צילום קרקעית העין ככלי נוח ללמוד תגובות כלי הדם לגורמי סיכון קרדיווסקולריים מחלות באפידמיולוגיים לימודים

The microcirculation consists of blood vessels with diameters less than 150 &#181;m. It makes up a large part of the circulatory system and plays an ...

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound and aortic blood pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is raised then lowered incrementally by intravenous infusion of vasoactive drugs phenylephrine and sodium nitroprusside. Aortic diameter is measured for each pressure step to characterize the pressure-diameter relationship of the ascending aorta. Stiffness indices derived from the pressure-diameter relationship can be calculated from the data collected. Calculation of arterial compliance is described in this protocol.
This technique can be used to investigate mechanisms underlying increased aortic stiffness associated with cardiovascular disease and aging. The technique produces a physiologically relevant measure of stiffness compared to ex vivo approaches because physiological influences on aortic stiffness are incorporated in the measurement. The primary limitation of this technique is the measurement error introduced from the movement of the aorta during the cardiac cycle. This motion can be compensated by adjusting the location of the probe with the aortic movement as well as making multiple measurements of the aortic pressure-diameter relationship and expanding the experimental group size.

Measuring Ascending Aortic Stiffness In Vivo in Mice Using Ultrasound

We describe a technique for measuring aortic stiffness from its pressure-diameter relationship in vivo in mice. Aortic diameter is recorded by ultrasound and aortic pressure is measured invasively with a solid-state pressure catheter. Blood pressure is changed incrementally and the resulting diameter is measured.

מדידה עולה אבי העורקים נוקשים<em&gt; In vivo</em&gt; בעכברים באמצעות אולטראסאונד

We present a protocol for measuring in vivo aortic stiffness in mice using high-resolution ultrasound imaging. Aortic diameter is measured by ultrasound ...

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion of endogenous insulin-producing pancreatic islet &#946;-cells remains an attractive strategy. &#946;-cells have limited spontaneous regenerative activity; consequently, a crucial research effort is to develop a precise understanding of the molecular pathways that restrain &#946;-cell growth and to identify drugs capable of overcoming these restraints. Herein an automated high-content image-based primary-cell screening method to identify &#946;-cell replication-promoting small molecules is presented. Several, limitations of prior methodologies are surmounted. First, use of primary islet cells rather than an immortalized cell-line maximizes retention of in vivo growth restraints. Second, use of mixed-composition islet-cell cultures rather than a &#946;-cell-line allows identification of both lineage-restricted and general growth stimulators. Third, the technique makes practical the use of primary islets, a limiting resource, through use of a 384-well format. Fourth, detrimental experimental variability associated with erratic islet culture quality is overcome through optimization of isolation, dispersion, plating and culture parameters. Fifth, the difficulties of accurately and consistently measuring the low basal replication rate of islet endocrine-cells are surmounted with optimized immunostaining parameters, automated data acquisition and data analysis; automation simultaneously enhances throughput and limits experimenter bias. Notable limitations of this assay are the use of dispersed islet cultures which disrupts islet architecture, the use of rodent rather than human islets and the inherent limitations of throughput and cost associated with the use of primary cells. Importantly, the strategy is easily adapted for human islet replication studies. This assay is well suited for investigating the mitogenic effect of substances on &#946;-cells and the molecular mechanisms that regulate &#946;-cell growth.

A High-content In Vitro Pancreatic Islet &#946;-cell Replication Discovery Platform

Critical challenges for the diabetes research field are to understand the molecular mechanisms that regulate islet &#946;-cell replication and to develop methods for stimulating &#946;-cell regeneration. Herein a high-content screening method to identify and assess the &#946;-cell replication-promoting activity of small molecules is presented.

A-תכולה גבוהה<em&gt; במבחנה</em&gt; פלטפורמת Discovery הלבלב איילט β-cell שכפול

Loss of insulin-producing &#946;-cells is a central feature of diabetes. While a variety of potential replacement therapies are being explored, expansion ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

זרחן-31 ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית: כלי למדידת<em&gt; In vivo</em&gt; קיבולת זרחון חמצוני מיטוכונדריאלי של שריר שלד אדם

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Surgical Angiogenesis in Porcine Tibial Allotransplantation: A New Large Animal Bone Vascularized Composite Allotransplantation Model

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic options have significant risk of failure and substantial morbidity.
Use of bone vascularized composite allotransplantation (VCA) would offer both a close match of resected bone size and shape and the healing and remodeling potential of living bone. At present, life-long drug immunosuppression (IS) is required. Organ toxicity, opportunistic infection and neoplasm risks are of concern to treat such non-lethal indications.
We have previously demonstrated that bone and joint VCA viability may be maintained in rats and rabbits without the need of long-term-immunosuppression by implantation of recipient derived vessels within the VCA. It generates an autogenous, neoangiogenic circulation with measurable flow and active bone remodeling, requiring only 2 weeks of IS. As small animals differ from man substantially in anatomy, bone physiology and immunology, we have developed a porcine bone VCA model to evaluate this technique before clinical application is undertaken. Miniature swine are currently widely used for allotransplantation research, given their immunologic, anatomic, physiologic and size similarities to man. Here, we describe a new porcine orthotopic tibial bone VCA model to test the role of autogenous surgical angiogenesis to maintain VCA viability.
The model reconstructs segmental tibial bone defects using size- and shape-matched allogeneic tibial bone segments, transplanted across a major swine leukocyte antigen (SLA) mismatch in Yucatan miniature swine. Nutrient vessel repair and implantation of recipient derived autogenous vessels into the medullary canal of allogeneic tibial bone segments is performed in combination with simultaneous short-term IS. This permits a neoangiogenic autogenous circulation to develop from the implanted tissue, maintaining flow through the allogeneic nutrient vessels for a short time. Once established, the new autogenous circulation maintains bone viability following cessation of drug therapy and subsequent nutrient vessel thrombosis.

Currently any kind of vascularized composite allotransplantation depends on long-term-immunosuppression, difficult to support for non-life-critical indications. We present a new porcine tibial VCA model that can be used to study bone VCA and demonstrate the use of surgical angiogenesis to maintain bone viability without the need of long-term immune-modulation.

אנגיוגנזה כירורגי אלוגרפט הטיביאלי חזירי: עצם חדשים בעלי חיים גדולים Vascularized דגם אלוגרפט ללא הפרדות צבע

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic ...

לייזר דופלר: כלי למדידת הלבלב איון Microvascular Vasomotion In Vivo

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

פרוטוקול משופר עבור microdissection הליזר של איי לבלב אנושיים מדוגמאות כירורגים

צעדים לעצמיים ב

בF-MRI ¹⁹ vivo למעקב סלולרי

צילום קרקעית העין ככלי נוח ללמוד תגובות כלי הדם לגורמי סיכון קרדיווסקולריים מחלות באפידמיולוגיים לימודים

מדידה עולה אבי העורקים נוקשים

A-תכולה גבוהה

זרחן-31 ספקטרוסקופיה תהודה מגנטית: כלי למדידת

אנגיוגנזה כירורגי אלוגרפט הטיביאלי חזירי: עצם חדשים בעלי חיים גדולים Vascularized דגם אלוגרפט ללא הפרדות צבע