מדידה של מבוי סם חשמלי transepithelial שימש מאז 1980 כדי לקבוע קונפליה ותפקוד מחסום של monolayers אפיתל בתרבות התא. הטכניקה הבסיסית היא חישה של ארבעה מסופים המשתמשת בזוגות שונים של אלקטרודות נושאות זרם וחוש מתח כדי לבצע מדידות מדויקות יותר. ישנם מספר מכשירים זמינים מסחרית כדי למדוד מבוי סם טרנס-פיתלי, אבל למרות קלות השימוש ואת האמינות הגבוהה, יש גם כמה חסרונות כמו תדירות פלט שאינו ניתן לתרגום ואת היקרות שלהם.
לכן, אנו מייצגים כיצד לבנות וולט-אמטר חסכוני וניתן לתיוכנת. בהתחלה, אנחנו רוצים להראות איך מדידת TEER עם מכשירים זמינים מסחרית עובדת. לשם כך, תירבתנו שכבת תא של תאי פיפילומה אפיתל מקלעת choroid על מסנני טרנסוול עם גודל נקבובית של שלושה מיקרומטר.
הגדרה זו תוארה על ידי שרוטן ואח 'כמודל במבחנה של מחסום הנוזלים השדרתיים בדם. עכשיו, אלקטרודה של מקל אכילה מחוברת לוולט-אמטר אפיתל.
ההתקן מופעל ומוגדר למדידת התנגדות. האלקטרודה מעקרת ב 80% אתנול ולאחר מכן שיווי משקל במדיום מתאים. ההימנעות להימדד תשמש כערך ייחוס על מנת להעריך את אמינותו של האמטר וולט שירכיב לאחר מכן.
בדוגמה זו, אנו מקליטים מכשול של 680 אוהם. בואו נתחיל בהרכבה של וולט-אמטר בתקציב נמוך עם תדר פלט ניתן לתיכנת. קודם כל, תצטרך מטען USB סטנדרטי, וכבל מאריך USB כאספקת חשמל זרם ישיר חמישה וולט.
מיקרו-בקר של 8 סיביות בלוח פיתוח USB ישמש לאחר מכן ליצירת זרם גל מרובע. ארבעה כבלים עם תקעי בננה מחוברים לשני מולטימטרים סטנדרטיים למדידת מתח ותנודה. נא ודא שהריבוי מטרים מסוגלים למדוד זרם במגוון מיקרו-אמפרים מסוימים באמצעות TrueRMS.
מחבר RJ14 נקבה ניתן למצוא בכבלי טלפון סטנדרטיים. רק לוודא, כי המחבר יש שישה פינים אשר לפחות ארבעת הפנימיים הם קווית. לבסוף, תצטרך קצת ציוד סטנדרטי, כמו הכבלים שלנו, מסוף ברק, נגד 120 קילוהם, וכמה כלים כמו חשפניות בידוד, כלי crimping, ferrules קצה חוט, ברזל הלחמה.
ההתקן מורכב בדיוק כפי שמודגם בדיאגרמת הפריסה. בהתחלה, הרחבת ה-USB מחוברת למיקרו-בקר. במהלך פעולה רגילה, הוא מופעל על ידי מטען USB DC חמישה וולט, כי ניתן לחבר בקלות למחשב אישי לתכנות.
שני כבלים מופשטים וגדוטים בפרולי קצה תיל בצד אחד. הצד השני הוא הלחמה או ישירות להצמיד אפס ושניים של המיקרו-בקר או כדי הלחמה lugs, אשר בתורו הם קצוצים על הסיכות המתאימות. לאחר מכן, כבלי אספקת החשמל מחוברים למסוף ברק.
המולטימטר הראשון ישמש למדידת זרם ומחובר בסדרה עם נגד 120 קילו-ם ואלקטרודות מקלות אכילה העוברות בזרם. סידור זה מבטיח כי זרם הפלט מוגבל, כך המדידה לא תהיה השפעה על הכדאיות התא. ארבעת המנצחים של כבל הארכת הטלפון מפורקים ומותכים לפרול כפי שהוצג קודם לכן.
לאחר הכנת הכבל, תצטרך לבדוק את ההמשכיות של מוליכים וסיכות. בדוגמה שלנו, סיכה 3 עד 6 מחוברת למנצח הלבן, החום, הירוק והצהוב. עכשיו סיכה חמש ושש, כלומר ירוק וצהוב, מחוברים למסוף הברק כדי להחיל מתח על זוג האלקטרודה החיצונית.
לבסוף, יהיה עליך לחבר את multimeter השני, אשר ישמש כדי למדוד את ירידת המתח transepithelial, סיכות שלוש וארבע, כלומר, בדוגמה שלנו, למנצח לבן וחום. החלטנו לעלות על התקנה במארז פלסטיק זול. לפני השימוש הראשון, יש לתכנת את המיקרו-בקר.
קוד המקור כתוב ב- C+ו ניתן להעלות אותו באמצעות USB. בקצרה, הצמד אפס למצב פלט מרכזי. כאשר מופעל, לולאת הפונקציה תתחיל לסירוגין כמו סיכות בין הקרקע בתוספת חמישה וולט עם עיכוב משתנה.
בדוגמה שלנו, השתמשנו בזמן תיאורטי של חצי תנודות של 40 אלפיות שנייה. בוא נראה כיצד תוצאות המדידה משתוות לערכי הייחוס שהשגנו בעבר. אלקטרודות מקל האכילה ממוקם מחדש לוולט-אמטר שהורכב לאחרונה.
ההתקן מופעל בשלושה שלבים. כלומר, חיבור מטען USB, העברת המולטימטר השמאלי למדידת מתח AC והסטת המולטימטר השני למיקרו-אמפר. שים לב, כי זרם לסירוגין יש לבחור במפורש.
בדוגמה זו, הירידה הפוטנציאלית במערכת הסינון Transwell נמדדת כ- 25 מילי-וולט, בעוד שאנו מקליטים זרם של 37.1 מיקרואמפר. על פי חוק אוהם, ניתן לחשב בקלות מכשול חשמלי ב-674 אוהם, הקרוב מאוד לערך הייחוס של 680. הראינו כי ערכי המדידה אמינים בטווח שמטו עד 1.8 קילוהמים.
לכן, וולט-אמטר המתואר יכול לשמש הן לניסויים ראשוניים והן למחקרים נוספים. עם זאת, אם התוצאות שלך יפורסמו, ייתכן שתמיד תרצה לתמוך בנתונים שלך, על ידי מדידת שטף מולקולות על פני שכבת התא המתאימה.
