באמצעות ההסטה של נקודת האור, ניתן לעקוב אחר ההתנהגות של הזחלים לפני, במהלך ואחרי הכניסה לאזור האור המאפשר לנתח את הפרטים של תנועת הזחל. בדיקה זו היא פשוטה וקלה לביצוע. תגובת האור נבדקת פעם אחת בלבד, כך שניתן לשלול כל השפעה אפשרית של התאמת האור.
כדי להכין את צלחות אגר, לאט ובדרך שווה לכסות את החלק התחתון של צלחת פטרי 15 ס"מ עם שכבה בעובי של כארבעה מילימטר של חם 1% אגר. אפשר לצלחת להתקרר בטמפרטורת החדר עד שהגר יתמצה. כדי להגדיר את מערכת הגירוי החזותי, גזור מקור אור LED מוכן על מסגרת ברזל, תוך טיפול כי האור מקרין כלפי מטה לכיוון שולחן העבודה.
להטות את הצילינדר מעט עד הזווית בין מישור הצילינדר לבין המישור האנכי הוא כ 10 מעלות. חבר את אור LED כחול 470 ננומטר לתקע LED אחד של מנהל ההתקן LED כוח גבוה ולהדליק את הנהג. סובב את הידית בפינה השמאלית העליונה של הנהג כדי לבחור ערוץ 470 ננומטר ולחץ על LED.
כאשר המסך יציג בדיקה, תופיע נקודת אור כחולה בשולחן העבודה. לחץ על אישור וסובב את הידית כדי להתאים את עוצמת האור. הזז את מיקום מקור האור למעלה ולמטה כדי להתאים את קוטר נקודת האור לשני סנטימטרים.
סובב את הידית כדי לבחור את עוצמת האור בהתאם לדרישות הניסוי. השתמש במסוף מד כוח קומפקטי עם חיישן כוח דיודה צילום סטנדרטי כדי למדוד את כוח האור המקסימלי והמינימלי במקום. כוח האור צריך להימדד בחושך בניסוי עצמו.
לאחר מכן הקלט את כוח האור, למדוד אותו שלוש פעמים ולהשתמש בערך הממוצע. כדי להגדיר את מערכת הדמיון, מהדקים מצלמת אינטרנט ברזולוציה גבוהה עם קליפ ברזל כ-10 ס"מ מעל נקודת האור בשולחן העבודה ומתאימים את הכיוון של עדשת המצלמה לכיוון שולחן העבודה. חבר את המצלמה למחשב שבו פועל Windows 7 באמצעות ממשק USB והצב את לוחית הגר על שולחן העבודה ממש מתחת למצלמה.
פתח את תוכנת AMCap 9.22, נקודת האור תוצג באופן אוטומטי בחלון AMCap. הזז את המצלמה מעט שמאלה או ימינה כדי לוודא שמקום האור קרוב למרכז החלון. השתמש קליפ כדי לתקן 850 פלוס או מינוס שלושה ננומטר מסנן bandpass בחמישה עד שבעה מילימטרים מיד מתחת למצלמה.
מניחים שלושה נורות LED המייצרות אור אינפרא אדום עם אורך גל מרכזי של 850 ננומטר באופן שווה סביב צלחת אגר במרחק של כ-5 ס"מ מקצה הצלחת ועם עדשות LED בזווית של 70 מעלות הפונה לכיוון הצלחת. לאחר מכן חבר את ה-LEDs למקור מתח באמצעות ממירי AC ל- DC שלהם. בתפריט של תוכנת AMCap, בחר אפשרויות, התקן וידאו ותבנית לכידה והגדר את גודל הפיקסל של הווידאו שנלכד ל- 800 על 600 ואת קצב המסגרות ל- 60 מסגרות לשנייה.
הסר את המסנן והצב סרגל מתחת למצלמה. התאם את מוקד המצלמה עד שקו קנה המידה יהיה ברור ובמקביל לרוחב שדה התצוגה של הווידאו ולחץ על לכידה, הגדרה ולכידת וידאו כדי לבחור את נתיב השמירה. לאחר מכן לחץ על התחל להקליט כדי להקליט את המרחק הממשי המתאים ל- 600 פיקסלים ולחשב את היחס בין כל פיקסל למרחק הממשי.
לפני הצגת הזחל להגדרת ההדמיה, רכוש סרטון קצר של מיקום האור ותן שם לאזור אור הווידאו ברקע הפקד הלא מסונן. מקם את המסנן בחזרה על עדשת המצלמה והדליק אור רחוק מהמכשיר הניסיוני בהגדרה נמוכה ככל האפשר ועדיין מאפשר לזחלים להתבונן בבירור. השתמש בכף כדי להסיר כמה זחלים מן מדיום התרבות בעדינות לבחור זחל instar שלישי.
שוטפים את הזחל במים מזוקקים ומ מניחים את הזחל במרכז צלחת הגר. מוציאים בעדינות את כל המים העודפים מהזחל ומכבה את אור החדר. אפשר לזחל להתאקלם במשך שתי דקות בסביבה הכהה לפני הפעלת נורית LED אינפרא אדום.
ניסוי התנהגות הימנעות האור הבא צריך להתבצע בחושך. לנוחות ההדגמה צילמנו באור הבוהק. מברישים בעדינות את הזחל למרכז הצלחת.
כאשר הזחל מתחיל לזחול ישר, לסובב את הצלחת כדי להפוך את הזחל ראש לכיוון נקודת האור. לחץ על לכידה, הגדרה ולכידת וידאו כדי לבחור את נתיב השמירה ולחץ על התחל הקלטה כדי להקליט. אפשר לזחל לזחול לכיוון, הזן ועזוב את נקודת האור עד שהיא כמעט מחוץ לשדה התצוגה ולחץ על הפסק הקלטה.
הרחק את המסנן מהמצלמה ורכוש וידאו קצר של מיקום נקודת האור. לאחר מכן תן שם להודעה שתבטיח אזור אור וידאו לא מסונן 2 והשווה סרטון זה עם אזור האור בסרטון אחד כדי להבטיח שמיקום נקודת האור לא השתנה. כאן, עקומות זמן של מהירות הזנב, זווית כיפוף הגוף ומהירות זוויתית של כיפוף הגוף של זחל מייצג ניתן לראות.
גודלו של ייצוק ראש הזחל, ולכן, זווית כיפוף הגוף המקסימלית מצטמצמת באופן משמעותי בזחלים instar השלישי עם נוירונים תמנון מעוכבים על ידי ביטוי רעיל טטנוס לעומת בקרת הורים המציין כי נוירונים Tdc2-Gal4 נחוצים לתגובת אור זחל נורמלי. לעיבוד תמונה מוצלח, ודא שהמצלמה אינה חוסמת את האור ושנקודה האור עגולה ובסמוך למרכז החלון. בעקבות הליך זה, אופטוגנטיקה יכולה להתבצע כדי לבחון כיצד הזחלים מגיבים כאשר נוירונים ספציפיים מופעלים.
באמצעות בדיקה זו, ניתן לנתח את הפרטים של תנועת הזחל המאפשרת את ההשפעה הרחוקה של הסביבה ועל גורמים פנימיים על התנהגות הימנעות אור זחל להיחקר.
