לוקח את הצעד הבא: מודל השתלת גפיים אחוריות קופטציה עצבית כדי למקסם את ההתאוששות תפקודית בחולדה

וידאו זה יספק תיאור מפורט, כיצד לבצע איבר אחורי ימני אורתוטופי, עכברוש מושתל באמצע הירך. האיבר האחורי הימני של החולדה התורם נקטע בגובה אמצע הירך, ואז מאוחסן בקרח. האיבר האחורי הימני של החולדה המטופלת גם הוא קטוע בגובה הירך התיכון.

איבר החולדה התורם מחובר לאחר מכן לחולדה המטופלת. אנו נתאר כיצד לחבר מחדש את מערכות העצם, העורק, וריד, העצבים, השרירים והעור. השתלת גפיים, ליתר דיוק, הקצאה מרוכבת וסקולרית, VCA, יש הבטחה טיפולית רחבה.

אבל זה כרגע מוגבל על ידי טכניקות, דיכוי חיסוני, והתאוששות נוירומוטורית תפקודית לקויה. המודל שלנו שם דגש על טכניקות מיקרוכירורגיות שנבדקו בזמן, כגון אנסטומוזיס כלי דם תפור ביד ו coaptation עצבי. ביצענו מעל 200 ניתוחים כאלה ביותר משנה.

למרות שיש עקומת למידה ראשונית למיקרו-אורגניזם ההתחלתי, על ידי שימוש בסרטון זה כדי ללמוד את השיטה שלנו ואת מחויבותם לתרגול ייעודי, כל מיקרו-אורגניזם יוכל לשלוט במודל זה. כל הניסויים נערכו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה של המכון הלאומי לבריאות, NIH, ואושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת נורת'ווסטרן. ההליכים הספציפיים בוצעו בפרוטוקול IS 00001663.

בחר חולדה בגילאי 8 עד 16 שבועות במשקל שבין 250 ל 400 גרם בזמן הניתוח. לגרום להרדמה כללית עם 5% isoflurane דרך אידוי לפני גיזום פרווה הגפיים האחוריות של החולדה. באמצעות חרוט האף כדי לשמור על הרדמה בין 2 ל 2.5% למקם את החולדה על לוח הניתוח עם תנור מתחת.

יש לחטא את העור חסר השיער ב-70% אלכוהול משפשף ולהגן על השדה הכירורגי באמצעות גזה סטרילית. באמצעות מיקרוסקופ מיקרוכירורגי מתאים והמכשירים המיקרוכירורגיים המוצגים כאן, יחד עם אלקטרוקוטריה דו קוטבית ומונופולרית קלה לגישה, אתה תהיה מוכן להתחיל את הניתוח. השתמש במספריים כדי לבצע חתך היקפי ועור סביב האיבר האחורי הימני.

התחל את הקמט inguinal מיד בערך באותה רמה כמו הרצועה הגבית ולהרחיב את הגב באופן כללי כדי להשלים את החתך ההיקף. ואז לחשוף את השכבה השרירית ישירות מתחת החתך, לנתח ולצרוב את כלי האפיגסטרה השטחיים, אשר להוביל מן השכבה השרירית לדש העור proximal רק נוצר. לשקף את דש proximal superomedially לרצועה inguinal ואת דש העור דיסטלי תופת לברך.

השתמש מפשק תיל או גזה מגולגלת כדי לעזור לחשוף את השדה. הבחין כי האנטומיה הבלתי משתנה של החולדה דומה לבני אדם; מן משני למדיאלי לשקר את העצב, העורק, ואת וריד. לנתח את עצב הירך, לחלק אותו בחדות ברצועה הגחונית קרוב bifurcation, אם אפשר.

לסגת העצב מחולק נחות, שמירה על זה בבטחה מהדרך, מכוסה מתחת גזה לחה. הפניית תשומת לב עורק הירך והווריד להשתמש ארבעה סנטימטר ארוך 7-0 קשרי משי כדי לסגת atraumatically כלי במקום לטפל בהם ישירות. לשים לב עכשיו ישפר את התוצאה anastomotic הסופי שלך.

Ligate כל הענפים של כלי הירך עם 7-0 עניבות משי. לחלק את הענפים בין הקשרים. ענפים עורקיים וריריים הדורשים חלוקה כוללים את איליאק ההיקפי השטחי וכלי השרירים.

איליאק ההיקפי השטחי הוא בדרך כלל הגדול ביותר ונראה שהוא צולל עמוק כמו הירך הנדיפית בבני אדם, אך פרופונדה נעדרת בחולדה. ענפים דיסטליים נוספים של כלי הירך, כגון הג'יניקולר הגבוה ביותר וענף saphenous בדרך כלל אינם דורשים חלוקה. עכשיו רצועה עורק הירך עם 7-0 קשרי משי כמו קרוב לרצועה inguinal ככל האפשר ולחלק בין הקשרים.

בדומה העורק, ligate ולחלק את וריד הירך. לשקף הן את העורק והן את וריד נחות, בבטחה מהדרך, מכוסה מתחת גזה לחה יחד עם עצב הירך מכוסה בעבר. לנתח את קבוצות השרירים הגחוניות, דואג לצרוב כל כלי גלוי שעולה.

תשומת לב ל hemostasis עכשיו תמזער את אובדן הדם של המטופל במהלך תוכחה מאוחר יותר. עמוק לקבוצות השרירים הגחוניות, לזהות ולחלק בחדות את העצב הסיאטי proximal לענפיו. כל שלושת הענפים הסיאטיים נראים בדרך כלל, טיביאליים, פרונאליים וציוריים.

כל השלושה צריכים להישמר באיבר התורם. ענף עורי רביעי אינו נראה בדרך כלל בתסתוח זה. סיים לחלק את קבוצות השרירים הגחוניות והדורסיים הנותרות ברמת אמצע הירך עם דימום קפדני.

ייתכן שיהיה צורך לחזור בו מהגפיים באופן מתווך כדי להשלים את חלוקת השרירים. חותכים את עצם עצם עצם הירך באמצע הפיר באמצעות מסור סיבובי אלחוטי כף יד. האיבר עכשיו חופשי מהתורם.

לאחר שהסיר את השתל איבר מן התורם, לחתוך את הקצוות הקשורים משי מן עורק הירך בצד השתל וגדמי וריד, ובכך לפתוח מחדש את הכלים. הכנס אנגיוקטר 24-מד לתוך גדם עורק השתל לשטוף את השתל עם 250 יחידות בינלאומיות של הפרין מדולל 5 מיליליטר של מלוחים נורמלי קר כקרח, נזהר לראות אותו זורם מתוך הוריד הפתוח. לאט, לשטוף בעדינות את השתל במשך כשלוש דקות.

שטיפה כוחנית עודפת עלולה לגרום נזק לא אנדותל. מניחים את השתל בצלחת מלוחים צוננת מקוננת בדלי קרח עד להשתלה. המתת דם לחולדה התורמת עם כריתת חזה דו-צדדית.

הניתוח מתחיל בדומה לניתוח התורם, הרדמה של החולדה, גיזום הפרווה, ביצוע חתך היקפי בקמט ההשכי, המשקף את מדפים העור, ניתוח עצב הירך, העורק והווריד. וליגה את אותם כלי ענף כפי שתואר קודם לכן. עם זאת, במהלך פעולה זו, לחלק את עצב הירך בצורה דיסטית יותר מאשר עבור התורם, אבל proximally כדי bifurcation במידת האפשר.

לחלק ולשחרר את עורק הירך והווריד ו proximately להדק אותם בהתאמה ברמה של הרצועה inguinal עם מלחצי בולדוג מיקרוכירורגיים. המשך את הניתוח כמתואר קודם לכן, חלוקת שרירי הגחון התומכים של הירך בגובה אמצע הירך עם דימום קפדני, תוך נסיגת האיבר בינוני לפי הצורך. לזהות ולחלק את העצב הסיאטי proximal לנקודת הענף ולהפוך את עצם הירך באמצע הפיר באמצעות מסור סיבובי.

הסר את האיבר האחורי הימני של המטופל והיפטר כראוי בהתאם להנחיות הוועדה המקומית לטיפול ושימוש בבעלי חיים. חשוב מאוד בשלב זה להנמיך את isoflurane לאחד עד 1.5% דרך חרוט האף. יותר מדי הרדמה במהלך החלק הפחות כואב הזה של ההליך תוביל למותו של החולדה.

הגיע הזמן לפגם את העצמות יחד. באמצעות מסור סיבובי כף יד, לגלח את כל אי סדרים הן התורם ואת הנמען עצם הירך לחתוך קצוות. חותכים את קצה הרכזת של מחט 18 מד, אשר יהפוך את מוט הירך תוך רפואי.

לפני מניפולציה של העצם, להחיל כמות קטנה של שעווה עצם על הקצה לחתוך את הקצה של עצם הירך כדי להפחית את דימום מח העצם במהלך תהליך reaming. תקע את עצמות הירך של התורם והמקבל באמצעות המחט של 18 מד כמוט תוך-רפואי. כוח כלשהו הוא הכרחי, אבל לא ream אף עצם עד כדי שבר קליפת המוח.

לפי הצורך, להסיר את המחט לקצץ אותו לאורך לא הולם, כך שתי העצמות להתאים בצורה חלקה על המחט ללא מחט מראה בין העצם. מניחים תמיכה קטנה כגון כרית גזה או סלע קטן או דוגמנות חימר מתחת לאיבר התורם כדי לשמור אותו מחוץ למתח. לשחזר את קבוצות השרירים הגחוני עם שמונה עד 10 תפרים פשוטים מופרעים 5-0 פוליגלקטין, כך השתל אינו מסתובב סביב מחט עצם הירך.

זה נותן לגפיים יציבות עבור האנטומים. עכשיו תתחילו את האנטומיה. מדי פעם להשקות את השתל ואת השדה כירורגי עם מלוחים קרים כקרח להדמיה טובה יותר כדי להפחית את פגיעה איסכמית reperfusion.

ליישר את העורקים הירך התורם ואת הנמען anastomose בצורה מקצה לקצה באמצעות תפר ניילון קטע פשוט 10-0, הימנעות הן מתח לולאה. העורק דורש בממוצע שישה תפרים. בדומה העורק, anastomose התורם ואת וריד הירך הנמען בצורה מקצה לקצה.

וריד דורש שישה עד שמונה תפרים. השקיה נדיבה של תמיסת מלח קרה, טכניקת טיפול כלי אטראומטי, והשאיר זנבות ארוכים לשמש לתפרים להישאר עבור נסיגת כלי הם כלים חשובים עבור anastomoses מיקרוכירורגי יעיל. מניחים כמות מתונה של אבקת תאית המוסטטית על שני anastomoses, ולאחר מכן להסיר את מהדקי בולדוג microsurgical פרוקסימלי על וריד העורק.

בדוק את שני anastomoses עבור טפיחה טובה וזרימה. השתמש מקלות צמר גפן כדי לדרבן בעדינות את הוריד ולבדוק תום לבטוב על שני anastomoses. כאשר שני האנטומים מאושרים משביעי רצון, לקצץ כל זנבות תפר להישאר ארוך שנותרו כדי להתאים את האחרים.

מיקום מחדש של החולדה לעמדת דטוביטוס בצדדים שמאליים, השתמש באלקטרו-קוטריה ליברלית כדי להשיג דימום קפדני של כל דימום שרירים. תשומת הלב היא הפנה את anastomoses העצבים פעם הגיד השריר מובטחת. לתפור מחדש את קבוצות השרירים הגביות שנמצאות ישירות מתחת לעצב הסיאטי עם תפרים פוליגלקטינים פשוטים שנקטעו 5-0.

לקצץ בחזרה את כל קצות לחתוך עצבים שנראים מרופטים. לשחזר את העצב הסיאטי עם 10-0 תפרים ניילון שואפים עקיצות אפינולי. שמונה עד עשר תפרים פשוטים שנקטעו בדרך כלל יספיקו.

לתפור מחדש את קבוצות השרירים הגביות הנותרות עם 5-0 תפרים פוליגלקטין. לאחר מכן לסגור את העור הגבי עם 4-0 פוליגלקטין רציף פועל תפר. מיקום מחדש של החולדה לתצורת supine, לשחזר את עצב הירך עם תפר ניילון 10-0, שוב, חתירה לעקיצות אפינוליות.

שניים עד שלושה תפרים פשוטים מופרעים בדרך כלל יספיקו. סגור את העור הגחוני הנותר באותו אופן כמו העור הגבי. הימנע זנב תפר עודף, אשר יכול להיות מעצבן את החולדה פעם ער.

ברגע שבעלי החיים יוצאים מהחלון המיידי לאחר הניתוח, הם יכולים להיבדק להתאוששות נוירומוטורית. הבדיקה Hargreaves משמש לבדיקת תחושה תרמית. מניחים את החולדה במיכל הבדיקה ואיפשרו לה להתאקלם במשך 20 דקות.

זכוכית המנגנון מאושרת נקייה, ומקור החום מאושר שהוא עובד עם האצבע של החוקר. לפני הבדיקה, ודא שהעכברוש ער וכף הרגל הנבדקת ממוקמת מעל גלאי התנועה האינפרא-אדום. שדר אנרגיה תרמית בעוצמה 90.

עיכוב זמן בבעל החיים המזיז את כף ידו ממקור החום נרשם. אם לא מתרחשת תנועה בתוך 20 שניות, הבדיקה מבוטלת כדי למנוע פציעה. השג חמישה ניסויים לכל איבר שנבדק, למעט הערך הגבוה והנמוך ביותר לפני חישוב זמן השהיית הנסיגה הממוצע עבור כל בעל חיים.

הנה עיצוב אופרטיבי מתואר בפורמט קריקטורה. האיבר האחורי הימני של חולדות תורמות ונמענות נקטע בגובה הירך האמצעית כחתך סיאטי. עורק הירך, וריד, ועצב, כמו גם את העצב הסיאטי עצם הירך חייב להיות מחובר מחדש בניתוח המטופל.

המודל יכול לשמש כדי להראות השפעות הישרדות דיפרנציאלית של דיכוי המערכת החיסונית ואסטרטגיית השתלה. עם טכניקה זו, הישרדות לטווח ארוך היא ברת השגה. המודל יכול לשמש כדי לחקור התאוששות עצבית חושית, אשר עשוי להיות ניכר על ידי ארבעה שבועות לאחר הניתוח.

פונקציה מוטורית ניתן לחקור גם באמצעות פלטפורמת ניתוח הליכה. כאן, הצגנו פלטפורמת מודל עכברוש עם מאפייני הישרדות נוחים, שבה אנו משתמשים כדי לחקור התאוששות חושית ומוטורית כפי שניתן לראות בדמויות ההליך. השתלת גפיים תחת הקטגוריה הרחבה יותר של VCA, הקצאה של רכיבים וסקולריים יש הבטחה טיפולית ישימה נרחבת עדיין לא מומשה.

המחסומים העיקריים קו דיכוי המערכת החיסון הנוכחי וטכניקות התאוששות neuromotor. פיתוח טכניקות חדשות יהיה תלוי במודלים גמישים, חזקים ובלתי ניתנים לשחזור של בעלי חיים. באמצעות פלטפורמה זו, אנו מקווים כי החוקרים יוכלו לקדם היבטים מרובים של השתלת גפיים.

תודה שצפיתם ובהצלחה בצעדים הבאים שלכם.